Agilent-7000B三重串联四级杆质谱操作培训手册

Agilent7000Agilent7000Agilent7000Agilent7000BBBB三三三三重串联四级杆重串联四级杆重串联四级杆重串联四级杆气气气气相相相相质质质质谱谱谱谱仪现场培训教材仪现场培训教材仪现场培训教材仪现场培训教材目录目录目录目录第一章第一章第一章第一章串联四级杆串联四级杆串联四级杆串联四级杆气相气相气相气相质谱仪工作原理质谱仪工作原理质谱仪工作原理质谱仪工作原理............................................................................................................................................3....3....3....31.1气相色谱1.2离子源1.3四级杆质量分析器1.4碰撞池1.5检测器1.6Masshunter软件第二章第二章第二章第二章安捷伦安捷伦安捷伦安捷伦7000700070007000BBBB气相气相气相气相串联串联串联串联质谱仪质谱仪质谱仪质谱仪开关机步骤及调谐开关机步骤及调谐开关机步骤及调谐开关机步骤及调谐......................................................8..............8..............8..............82.1安捷伦7000B气相串联质谱仪配置2.2质谱仪开机步骤2.3质谱调谐2.4质谱仪空气检漏2.5质谱仪关机步骤第第第第三三三三章章章章串联质谱扫描模式及及数据采集方法编辑运行串联质谱扫描模式及及数据采集方法编辑运行串联质谱扫描模式及及数据采集方法编辑运行串联质谱扫描模式及及数据采集方法编辑运行...............................................................................13.......13.......13.......133.1安捷伦串联四级杆可设定的扫描模式3.2串联质谱运行方法编辑3.2.1气相配置设定3.2.2编辑运行方法的气相参数（包含碰撞池气体流量设定）3.2.3运行方法质谱参数设定3.3单个质谱方法运行3.4Sequence自动进样序列表设定及运行第第第第四四四四章章章章MRMMRMMRMMRM方法开发概诉方法开发概诉方法开发概诉方法开发概诉.........................................................................................................................................................................................24.....24.....24.....244.1多重反应监测（MRM）的详细过程4.2MRM方法的开发过程4.3如何使用QQQ方法优化助手第一章第一章第一章第一章串联四级杆气相质谱仪工作原理串联四级杆气相质谱仪工作原理串联四级杆气相质谱仪工作原理串联四级杆气相质谱仪工作原理安捷伦串联气相质谱仪由六个部分组成，分别为：1．气相色谱部分2．离子源3．第一极四级杆及第二级四级杆4．碰撞池5．检测器6．Masshunter软件1.11.11.11.1气相气相气相气相色谱色谱色谱色谱对于质谱仪来说，气相色谱主要是进样仪器。在气相色谱中进样部分为进样口，下图为最常用的分流/不分流进样口结构图。在进样口端，EPC控制载气流入进气口，两路出气口分别为隔垫吹扫和分流口。对于痕量分析，最常用的模式是不分流进样。对于进样口，用户日常接触的部件为进样垫和衬管。7890气相色谱仪1.21.21.21.2离子源离子源离子源离子源电子轰击离子源电子轰击离子源电子轰击离子源电子轰击离子源（（（（EIEIEIEI））））的作用是用灯丝产生激发电子，轰击样品分子，将被分析的样品分子电离成带电的离子，并使这些离子在离子透镜的作用下，形成离子束，进入质量分析器被分离。电子轰击离子源（EI）是气质联用中最常用的离子源。由于现有的标准EI质谱图都是在70eV电子的轰击下产生的，我们一般把电子能Electronenergy自动设为-70eV。化学电离源化学电离源化学电离源化学电离源（（（（CICICICI））））化学源离子室内的反应气（甲烷等）受到电子轰击，产生反应气离子，再与试样分子碰撞，产生准分子离子。化学电离源是一种软电离方式，主要产生分子离子峰，具有较高的灵敏度和选择性。正化学源电离正化学源电离正化学源电离正化学源电离（（（（PCIPCIPCIPCI））））--甲烷作为反应气•质子转移，样品分子得到一个质子[M+1]CH5++M=MH++CH4•样品分子丢失一个质子[M-1]C2H5++M=[M–H]++C2H6•加和反应CH5++M=MCH5+；C2H5++M=MC2H5+负化学源电离负化学源电离负化学源电离负化学源电离（（（（NNNNCICICICI））））--甲烷作为反应气•电子捕获反应MX+e-(thermal)=MX-•分离的电子捕获反应MX+e-(thermal)=M+X-EI源的特点化学离子源(CI)特点电离效率高；质谱图重现性好；结构简单，操作方便分子离子峰最强；谱图简单；不适用难挥发样品1.31.31.31.3四级杆四级杆四级杆四级杆质量分析器质量分析器质量分析器质量分析器四级杆质量分析器是质谱仪的核心，它将离子源产生的离子按质荷比(m/z)的不同进行分离。四极杆质量分析器由四根金属或表面镀金属的平行杆组成，杆表面理想为双曲面，相对的两组杆上分别加有电压(DC+RF)和-(DC+RF)，DC是直流电压，RF是高频电压。只有与四级杆上所加的对应电压相匹配的离子才能通过四级杆分析器，其余离子被过滤掉。四级杆电压如下图所示：单四级杆质量分析器单四级杆质量分析器单四级杆质量分析器单四级杆质量分析器可使用概念模型来说明单四极杆质谱仪的理论。请参见下图单四极杆质谱仪工作原理示意图•样品在离子源中离子化，不同颜色和大小的球代表具有不同m/z值的离子。•四极杆质量过滤器用移动带表示，通过移动带上不同大小的孔（代表不同的电压组合）过滤离子，离子从漏斗经过过滤器到达检测器。•检测器用过滤带下方的收集漏斗表示。当移动带（质量分析器）移动时，即四级杆上的电压变化，通过质谱仪来过滤具有不同m/z值的离子串联串联串联串联四级杆质量分析器四级杆质量分析器四级杆质量分析器四级杆质量分析器串联四极杆质谱仪工作原理示意图在此图例中，使用第一级四极杆来选择母离子，并将其发送到碰撞反应池进行碎裂。然后通过第二级四极杆来扫描子离子（产物离子）。1.1.1.1.4444碰撞池碰撞池碰撞池碰撞池安捷伦使用六极杆碰撞池，使用氮气作碰撞气体，氦气作碰撞池抑制气体，少量氦气可以降低离子源热氦离子带来的噪音。打开和关闭氦气，样品信躁比的变化六级杆,最好的结合了质量带宽和聚焦。使用氮气和氦气来激发碰撞。碰撞池气体通过EPC控制。为何使用六极杆？••••在离子聚焦方面。研究显示在提供离子聚焦方面，四极杆优于六极杆，六极杆优于八级杆，因此，在过滤器中较少数量的杆会改善离子聚焦。••••在涉及宽质量范围离子传输方面。八级杆优于六极杆，而六极杆优于四极杆。选择了六极杆，是因其在离子聚焦和离子传输之间提供了最佳的折中。1.51.51.51.5检测器检测器检测器检测器安捷伦的三轴HED-EM检测器由于消除了光子和中性离子的干扰，具有良好的信噪比结果。注意：EM容易受潮，容易被氧化。所以在平时清洗离子源时或关机放空后，记得把两块侧板的固定螺丝旋紧。7890GC设定较大柱流速，让腔体内氦气充满后再关7890GC。1.1.1.1.6666MasshunterMasshunterMasshunterMasshunter软件软件软件软件安捷伦气相串联质谱仪的仪器控制和数据分析软件叫做MassHunter.主要由三部分组成：仪器控制软件（DataAcquisition）、定性分析软件（QualitativeAnalysis）、定量分析软件（QuantitativeAnalysis）。第二章第二章第二章第二章安捷伦安捷伦安捷伦安捷伦7000700070007000BBBB气相气相气相气相串联串联串联串联质谱仪质谱仪质谱仪质谱仪开关机步骤及调谐开关机步骤及调谐开关机步骤及调谐开关机步骤及调谐2.12.12.12.1安捷伦安捷伦安捷伦安捷伦7000700070007000BBBB气相气相气相气相串联串联串联串联质谱仪质谱仪质谱仪质谱仪配置配置配置配置：：：：1.在桌面双击AgilentGCMSConfiguration图标进入仪器配置界面，配置7000质谱仪及GC7890。2.输入自定义的仪器名称7000,输入仪器IP地址（7000:192.168.254.12；7890:192.168.254.11）。3.在configure中选择使用的离子源类型(标准EI源，高灵敏度EI源，CI源)和iris选项。然后点击OK完成配置。桌面上出现“7000”的仪器图标。2.2.2.2.2222质谱仪开机步骤质谱仪开机步骤质谱仪开机步骤质谱仪开机步骤1、打开氦气钢瓶总阀，设置分压阀压力至0.5Mpa。打开氮气钢瓶总阀，设置分压阀压力0.15MPa。2、打开计算机，登录进入Windows系统。3、确认毛细色谱柱已经装好，打开7890GC电源开关。打开7000质谱仪电源，在打开MSD电源的同时用手向右推分析器前侧板直至侧面板被紧固地吸牢。（后段真空腔的侧板螺丝一般是拧上的，所以抽真空时不用推紧）4、涡轮泵开始工作，等待大约2min，仪器自检完毕。5、在桌面上双击仪器控制图标，进入Masshunter数据采集化学工作站界面。6、开机后要注意观察真空泵运行状态，分子涡轮泵转速在10分钟内应该达到95%以上。否则，说明系统有大漏气，应检查侧板是否压正、放空阀是否拧紧、柱子是否接好。点击Method→EditMonitors,在出现的窗口中将MSTurbo1Speed选到SelectedMonitors中。就可显示分子涡轮泵转速。2.2.2.2.3333质谱调谐质谱调谐质谱调谐质谱调谐调谐就是调整离子源和四极杆参数来达到理想的信号强度和分辨率。每个四极杆，MS1和MS2,分别调谐。当一个四极杆被调谐的时候，另外一个允许所有离子穿过。7000型质谱仪调谐时碰撞气可以打开。1、自动调谐（CI源调谐时，甲烷反应气钢瓶总阀要打开，输出压力约0.15MPa）在仪器控制面板中,点击调谐图标，进入调谐窗口。在Filesandreports子窗口中调出离子源对应的EI或CI调谐文件。(atunes.eiex.tune.xml;atunes.nci.tune.xml;atunes.pci.tune.xml）在Autotune的子窗口内，选择所安装的离子源类型：标准EI源，高灵敏度EI源，CI源（NCI或PCI），根据需要选择调谐文件保存及打印选项，点击Autotune按钮。完成调谐后，自动打出调谐报告。调谐过程完成。自动调谐时，一般这三项都要选中做NCI和PCI时，要选择反应气体在做高灵敏度EI源，CI源调谐时，要选择此选项点击load，选择对应的缺省调谐文件。自动调谐报告：（HighsensitivityEIautotunereport）在自动调谐中，每根四极杆在所有三个质量峰宽度0.7,1.2和2.5中调谐。质量峰宽度参数（Unit,Wide,Widest）原理图如下：当质谱峰宽增加时，质谱的分辨率会降低，灵敏度会增加。当质谱峰宽减小时，质谱的分辨率会增加，灵敏度会降低。2.2.2.2.4444质谱仪空气检漏质谱仪空气检漏质谱仪空气检漏质谱仪空气检漏关闭N2,在MnualTune中点击Air/WaterCheck，所得空气检漏报告如下：要求:RatioO2to