植物组织培养PPT

1植物组织培养2取一部分植物组织,在无菌的条件下接种在培养基上,给予一定的温度和光照,使之产生愈伤组织,或进而生根发芽,培养为成熟植株的技术。一般不需要光3(2)细胞分化：在植物的个体发育过程中，细胞在________、________和生理功能上出现_____________的过程。全能性形态结构稳定性差异1．植物组织培养的基本过程(1)理论基础：植物细胞的__________。4(3)基本过程①愈伤组织：由离体的植物组织或细胞经形成的一种的活的薄壁细胞团组成的新生组织。②脱分化：又叫去分化，是由__________的植物组织或细胞产生__________的过程。③再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成________等器官的过程。脱分化相对没有分化高度分化愈伤组织根或芽5植物组织培养的条件无菌环境一定的温度一定的光照含有全部营养成分的培养基防止外植体带菌、保证培养基及接种器具彻底灭菌、严格遵守无菌操作规程适时MS培养基适量空气适合的PH植物激素比例合适适宜的外植体6MS培养基配方表：由、和三大成分组成大量元素微量元素有机成分其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要7MS培养基中各成分的作用成分作用微量和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压甘氨酸、维生素、烟酸、肌醇等满足离体植物细胞在正常代谢途径受一定影响后所产生的特殊营养需求8植物激素和人工合成的植物激素天然植物激素植物激素类似物生长素萘乙酸（NAA）细胞分裂素苄基腺嘌呤（BA）植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成的激素在植物中没有相应分解它的酶，所以作用和存在的时间长，作用效果明显。9生长素和细胞分裂素在植物组织培养中的相互作用比例结果细胞分裂素浓度生长素浓度细胞分裂素浓度=生长素浓度细胞分裂素浓度生长素浓度诱导芽生成愈伤组织继续生长而不分化诱导根生成102.萘乙酸(NAA)需用少量0.1mol/L氢氧化钠溶液溶解，苄基腺嘌呤(BA)需用少量0.1mol/L盐酸溶解。也可配成母液冰箱中保存。3.发芽培养基：3000mLMS培养基+含1.5mgBA的溶液+含0.02mgNAA的溶液+30g蔗糖+40g琼脂，再加蒸馏水至4000mL，混合均匀，加热至琼脂融化后，通过三角漏斗分装至100mL三角瓶中，每瓶40mL，共100瓶。三角瓶加上封口膜后1kg压力下在灭菌锅中灭菌20min。114.生根培养基：1000mLMS培养基+含0.38mgNAA的溶液+30g蔗糖+20g琼脂，再加蒸馏水至2000mL，混合均匀，加热至琼脂融化后，分装至100mL的三角瓶中，每瓶40mL，共50瓶。灭菌操作同步骤3。三角瓶加上封口膜后1kg压力下在灭菌锅中灭菌20min12菊花组织培养操作步骤:131、配制MS培养基⑴配制各种母液→配制培养基→灭菌⑵培养基由大量元素、微量元素和有机成分组成在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，因为其茎段培养比较容易142、外植体消毒若使用自然生长的茎进行组织培养，则可取一段茎在70%的乙醇中浸泡10分钟，在放入5%的次氯酸钠溶液中浸泡5分钟，然后用另一次氯酸钠溶液浸泡5分钟，最后在超净台中用无菌水冲洗，将茎的切段培养在生芽培养基中。外植体上残留的杂菌会和外植体争夺培养基中的营养物质，并且产生大量对外植体有害的物质，导致外植体死亡，所以要先消毒再接种。一般选择未开花植株的茎上部新萌发的侧枝153、接种⑴将已消毒的外植体插入培养基，形态学上端朝上。⑵在酒精灯旁，每个锥形瓶接种2-3外植体。注意事项：①注意无菌操作②注意别烫伤植物材料③注意植物材料插入方向164、培养⑴在日光灯下保持18-25℃培养，每天的光照不少于14.5h⑵先生芽培养，然后再生根培养2～3周后将生长健壮的丛状苗在无菌条件下一个个转入生根培养基中，在上述条件下继续培养。注意事项：①无菌箱中培养并定期消毒②如果培养顺序颠倒，则不容易诱导芽的形成③一般情况下，愈伤组织形成不需要光，试管苗形成后需要见光培养176、定植苗健壮后移至土中培养（定植），即可长成植株并开花。5、移栽锻炼将生根的苗从锥形瓶中移至草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持80%以上的湿度，2-3天后打开玻璃罩逐渐降低湿度进行锻炼，直到将罩全部打开处于自然湿度为止。18例题：右图是实验室进行植物组织培养的一般过程。请回答下列问题：⑴下列设备及用品中,该实验无需使用的是.A．酒精灯B．灭菌锅C．封口膜D．玻璃刮刀⑵培养过程中涉及的培养基有:培养基、培养基、培养基。与微生物培养基相比,植物组织培养一般要添加、作为生长调节剂。⑶离体组织接种后脱分化形成,在不同配比激素的诱导下,依次经历和生根苗两个阶段,形成试管苗。定植前还需要将试管苗移栽至草炭土或中继续培养,其目的是。⑷下表所列该实验设备、用品及材料与其灭菌或消毒方法的对应关系中,错误的是。A.三角瓶高压蒸汽灭菌B.培养基G6玻璃砂漏斗过滤C.超净台紫外灯照射D.外植体70%酒精和5%次氯酸钠先后浸泡DMS发芽生根NAABA愈伤组织从状苗蛭石湿度锻炼/炼苗(适应土壤种植)B19[判一判]⑴实验过程中先使茎段生根,再使生根苗长叶⑵脱分化和再分化过程中都需要植物激素发挥作用⑶因植物细胞都具有全能性,故菊花组织培养实验中选材不会影响实验结果⑷野生菊花苗段在接种前要用酒精和次氯酸钠溶液进行消毒,再用自然水清洗。201、概念：取一部分植物组织，在的条件下接种在培养基上，给予一定的和，使之产生，或进而生根发芽，培养为成熟植株的技术。2、原理：。植物组织培养技术无菌温度光照愈伤组织植物细胞的全能性213、培养基⑴MS培养基：由、和组成。可将各成分分别配成浓度为配方的5～10倍的，用时稀释⑵发芽培养基：由MS培养基、溶液、溶液、蔗糖和琼脂，再加水混合均匀。用法灭菌后待用⑶生根培养基：由MS培养基、溶液、蔗糖、琼脂和水混合⑷培养基中植物激素的配比与细胞的分化：大量元素微量元素有机成分母液BANAA高压蒸汽灭菌比例结果细胞分裂素浓度生长素浓度细胞分裂素浓度=生长素浓度细胞分裂素浓度生长素浓度诱导根的形成诱导芽的形成愈伤组织不分化NAA22菊花组织培养操作步骤:制备离体植物组织接种培养培养移栽和定植取无菌培养的菊花幼苗用无菌镊子和无菌解剖刀切成几段,或取自然生长的茎充分,用清洗后,切成几段,每段至少有张叶片在旁,将切取的茎段接种到培养基中,盖上。在日光灯下保持18~25℃的温度培养,每天不少于14.5h,培养(2~3周后)至长出在条件下,将丛状苗转入培养基中,在适宜条件下继续培养待生根后,将苗移至中,逐渐降低进行。最后转移至土中培养()消毒无菌水1酒精灯火焰生芽封口膜生芽光照丛状苗生根无菌生根草炭土或蛭石湿度锻炼定植23菊花组织培养理论依据基本过程培养基影响因素选材（细胞类型）幼苗处理自然生长茎段消毒植物细胞全能性MS培养基、生根、生芽培养基材料种类、营养、激素、pH、温度、光照体细胞降低湿度锻炼70%乙醇、5%次氯酸钠浸泡，无菌水冲洗离体的植物组织、器官愈伤组织根、芽完整植株25⑴培养基的灭菌；（）⑵外植体的消毒；（）⑶接种的无菌操作；（）⑷无菌箱中的培养；（）⑸移栽到草炭土或蛭石中进行湿度锻炼。（）1、在整个植物组培的操作过程中，是如何来实现无菌环境的？高压蒸汽灭菌酒精、次氯酸钠超净台酒精灯火焰旁无菌箱定期消毒生存环境消毒思考:261、外植体带菌2、培养基及接种器具灭菌不彻底3、接种操作时带入4、环境不清洁污染途径27植物组织培养用的培养基，含有植物生长发育所需要的各种营养物质，这些营养物质同样为细菌等微小的生物提供了适合的营养。在这种培养基上，细菌等微小的生物比植物细胞具有更强的新陈代谢能力，它们比植物细胞生长、繁殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。因此，植物组织培养要想取得成功，必须有效地防止细菌等的污染，保证培养材料、培养基、培养用具完全无菌。为了达到这一要求，就要在植物组织培养过程中进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。28生长素／细胞分裂素比值结果比值高时比值低时含量少且比值适中2、激素的用量比例对细胞分裂和分化的影响促根分化，抑芽形成促芽分化，抑根形成促进愈伤组织生长植物组织培养时，使用人工合成的激素，还是植物中存在的天然激素？为什么？人工合成的激素，原因：植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成的激素在植物中没有相应分解它的酶，所以作用和存在的时间长，作用效果明显。29【典例】辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得途径如图。⑴图中①和②分别表示辣椒组织培养中细胞的和过程。⑵图中培养外植体的培养基中常用的凝固剂是。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值(选填“高”或“低”)时,有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时,应采取的灭菌方法是。⑶图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是，除此以外，还需用到。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时,常用的酶是纤维素酶和。脱分化再分化琼脂低高压蒸汽灭菌70%果胶酶5%次氯酸钠溶液302、下面是宁夏农林科学院进行苹果试管苗培养的一般过程:⑴请填写a～c所表示的内容。a.；b.；c.。⑵实验室一般使用保存的培养基母液来制备MS固体培养基,配制母液时,、和有机物要浓缩5～10倍。⑶该过程中a、c的启动关键在于培养基中所加和的浓度配比。⑷离体的植物细胞能发育成完整植株的原因是。⑸醋杆菌是生产苹果醋必用的菌种,可以从食醋中分离得到纯化的醋杆菌。扩大培养醋杆菌时,一般采用平板倒置培养,原因是。脱分化愈伤组织再分化大量元素微量元素生长素细胞分裂素植物细胞具有全能性防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染313、为了探究6-BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组在MS培养基中加入6-BA和IAA，配制成四种培养基(见下表)，灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条件下培养一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率(m)，以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n)，结果如下表。培养基编号浓度/mg·L－1m/%n/个6BAIAA10.5076.73.120.177.46.130.266.75.340.560.05.0回答下列问题：⑴按照植物的需求量，培养基中无机盐的元素可分为________和__________两类。上述培养基中，6B-A属于___________类生长调节剂。⑵在该实验中，自变量是___________，因变量是________________________，⑶从实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是________号培养基。⑷为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入________(填“6-BA”或“IAA”)。大量元素微量元素细胞分裂素IAA的浓度菊花再生丛芽外植体的比率和外植体上的丛芽平均数16-BA32⑴制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用____________蘸取少量的稀释液，在MRS乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。下图所示的划线分离操作，正确的是________。接种环B2017/4回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：⑵泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由_____________进行厌氧呼吸产生。亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸盐，与___________________发生重氮化反应，再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后用光程为1cm的____________，在550nm光波下测定光密度值，与由一定浓度梯度亚硝酸钠制作的_________________比对，计算样品中亚硝酸盐的含量。⑶已知乳酸菌中的亚硝酸还原酶能降解亚硝酸盐。在一定的腌制时间内，随着腌制时