粪便细菌DNA的提取

粪便细菌DNA的提取1.0.2-0.5g粪便置于Ep管中（冰水浴），加入1mlPBS，漩涡振荡混匀，200xg离心5min，取上清，冰水浴；2.向沉淀中加入1mlPBS，重复步骤1；3.混合两次上清，用300g离心5min，弃沉淀；4.两次上清用10000rpm离心8min，沉淀菌体；5.所得沉淀用1mlPBS洗涤至上清无色；6.-20℃过夜；7.向Ep管中加入500ulDNA提取液，6ul蛋白酶K，37℃摇床160rpm摇40min，再加入56ul20%SDS，65℃条件下水浴2h，每隔15-20min轻摇Ep管；8.等体积酚/氯仿抽提，8000rpm离心10min，取上层水相，重复两次，除净蛋白；9.0.6倍体积异丙醇沉淀DNA，12000rpm离心10min（4℃）；10.用70%乙醇洗涤DNA沉淀两次，自然干燥；11.沉淀中加入15ulTE，在37℃孵育箱中孵育30min。DNA提取液（pH8.0）100mmol/LTris-HCL100mmol/LNa2EDTA100mmol/L磷酸钠1.5mol/LNaCL1%CTAB（100ml提取液含CTAB1g）Tips：此DNA可在4℃贮存6个月，-20℃保存时间更长，但要注意避免反复冻融，以免剪切高分子量DNA。混匀时不要用力振摇，以免DNA断裂。Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1