真菌荧光染色的-临床应用

济南博莱生物技术有限公司LIFETIME真菌荧光染色的临床应用目录•疾病介绍1•诊断方法2•产品介绍3•图文对比4•专家评价5疾病介绍1真菌分布种类•真菌广泛存在于自然界，而致病性真菌约有400余种。随着器官移植的大量开展及免疫抑制剂、肿瘤患者化疗药物、糖皮质类固醇激素的广泛使用，人类免疫缺陷病毒感染的高流行趋势、体内有创检查的大量开展，人口老龄化和糖尿病等慢性疾病患者的增多，真菌发病率和死亡率逐年增加，对人类健康的危害日趋严重。真菌感染诊断•由于临床对很多真菌感染的微生物特性了解较少，加之真菌感染的临床表现多种多样，通常会出现误诊、漏诊，导致病情加重甚至危及生命。这就需要确实有效快速的早期诊断方法。LIFETIME真菌感染介绍浅部真菌感染•主要引起皮肤、黏膜的真菌感染•侵犯皮肤、黏膜、毛发、指甲•慢性，对治疗有顽固性•繁殖能力和传染能力强深部真菌感染•侵害人体内脏、皮下组织，引起全身感染•可侵犯全身内脏，严重的可引起死亡，临床上危害很大。•侵袭性真菌病LIFETIME真菌感染分类1.1浅部真菌感染常见的浅部真菌病皮肤癣菌病马拉色菌毛囊炎甲真菌病念珠菌病等等浅部真菌病面癣体癣（犬小孢子菌）头癣浅部真菌病案例深部真菌感染－侵袭性真菌病1.2•定义：深部真菌病是指致病性真菌侵犯皮下组织、黏膜和内脏，感染器官所引起的感染性疾病，其中以白色念珠菌为主。•致病特点：慢性肉芽肿样炎症、溃疡及坏死。•深部感染致病真菌较常见的有念珠菌、曲霉、隐球菌、组织胞浆菌、肺孢子菌、毛霉、马尔尼菲青霉及镰刀菌病。念珠菌属对皮肤、黏膜、指趾甲及内脏均可侵犯。•导致条件性真菌感染增高的因素：HIV、肿瘤化疗、干细胞或器官移植、抗生素使用等。LIFETIME深部真菌病念珠菌：死亡率第一位，院内血源感染第四位。曲霉：死亡率高达60%-90%，第二位最常见深部真菌病。LIFETIME深部真菌病2目前临床常用真菌诊断方法LIFETIME临床常用真菌检测方法对比真菌荧光染色液优势【真菌荧光染色液】一种快速检测真菌的试剂，检测范围广，阳性率高，远优于传统湿片法，临床上毛囊炎糠秕孢子，马拉色菌的检测湿片法基本无效，而荧光法可敏感快速的检测出来，医保收费，需使用荧光显微镜。内容传统真菌镜检真菌荧光染色真菌荧光染色的临床优势操作环节取样→滴加一定浓度的KOH溶液→经酒精灯加热固定→光学显微镜观察取样→滴加荧光染色液→加盖盖玻片→荧光显微镜观察操作同样简洁，需要时间短，适用于临床大样本，快速检测。检测结果找到真菌菌丝或者孢子结构，得出结果根据看到荧光标记的真菌菌丝或者孢子结构，得出结果可以明确明辨糠皮孢子感染、马拉色菌感染(检查糠皮孢子的派克墨水法敏感度更高，不用加热环节，有利于临床实际应用)。浮载液10%~20%的KOH或者复方氢氧化钾溶液配方KOH（氢氧化钾）溶解杂质细胞，荧光剂：与真菌细胞壁中成分发生非特异性的结合1、检测灵明度很高，减少检查结果假阴性的发生，进而降低漏检漏检率，提高了皮屑真菌检测的准确率；2、视野清，反应为荧光反应，因此其结果在显微镜视野中以清晰的荧光表现，更易于观察；3、抗干扰强，检测原理是染色液与真菌细胞壁中几丁质等多糖成分反应，因此可排出检测中的其他干扰。检测器材光学显微镜荧光显微镜荧光显微镜：产生匹配染色液中荧光染色剂的激发光，所需的激发光为紫外光，并在目镜下观察。辅助材料载玻片，盖玻片，滤纸载玻片，盖玻片，滤纸与传统镜检方式用材一样。传统真菌镜检与真菌荧光染色对比表3真菌荧光染色液介绍【产品名称】真菌荧光染色液【包装规格】100人份/盒、200人份/盒、300人份/盒【预期用途】该荧光染色液主要用于定性组织学染色，对福尔马林固定、石蜡包埋组织中的真菌和和其他机会性生物的细胞壁中的多糖染色。【检测原理】试剂成分的荧光染色剂是一种与真菌和其他生物体细胞壁中的纤维素和壳多糖结合的飞特异性荧光染料可检测许多酵母菌和病原性真菌，试剂中的复染剂当使用蓝色激发光（并非UV）检测可以降低组织或血细胞的背景荧光信号。【有效期】：两年【储存条件】：常温、避光；切勿冷冻【厂家信息】：公司名称：济南博莱生物技术有限公司公司地址：济南市天桥区蓝翔路15号时代总部基地C6销售电话：[phone]荧光染色法是一种利用重组几丁质酶来检测人体各种标本中是否存在真菌有形成分的方法。真菌荧光染色液中，经过特殊荧光素标联的重组几丁质酶可以高亲和力与真菌细胞壁上的几丁质结合并发出荧光，在荧光显微镜下可以清楚的观察到真菌形态。荧光染色法原理LIFETIME产品适用范围、标本操作步骤0175%乙醇消毒患者皮损部位，使用钝头刀从皮损的边缘向外刮取。如鳞屑量较少，可使用透明胶带法取材。0275%乙醇消毒病甲，从甲变色、萎缩或变脆的部位，健甲与病甲交界处取材，保证一定深度。对伴有甲沟炎患者取材，应采用棉拭子，75%乙醇局部消毒后，沾取损害分泌物。0375%乙醇局部消毒，选择无光泽毛发或毛囊口折断的毛发，用镊子将毛发从头皮处拔除，尽量保留毛根部。04口腔黏膜可用钝刀刮片或拭子取材，阴道黏膜可用拭子取材，一般不用浸湿。皮屑甲屑毛发黏膜取材方法05痰液标本取自病人清晨漱口后的第一口晨痰，标本存入无菌痰液容器中保存。06尿液标本取自病人的早上的第一次清洁尿，使用无菌容器收集保存，离心后取沉渣作镜检。07胸水及其他体液标本需要无菌采集于无菌试管中，离心后取沉渣作镜检。痰液尿液胸水其他体液取材方法08白带白带标本取自病人阴道分泌物，标本存入无菌容器中保存，涂片镜检。《荧光染色法与KOH湿片法在真菌直接镜检中的应用比较》相关论文2014年英国甲真菌病管理指南荧光显微镜显微镜荧光模块适用于OLYMPUS（奥林巴斯）CX、BX全系列正置显微镜，采用LED灯泡作为照明光源，使用寿命可长达10年，普通显微镜增加显微镜荧光模块即变为荧光显微镜。4荧光染色部分照片备注：部分来自网络，目的学习交流粪便标本痰液标本粪便标本荧光显微镜检查（×400）荧光显微镜检查（×400）荧光显微镜检查（×400）来自北京大学第一医院真菌荧光染色和KOH染色效果对比图皮屑标本（×400）普通光源下紫外光光源下来自复旦大学附属华山医院真菌荧光染色和KOH染色效果对比图甲屑标本（×400）普通光源下紫外光光源下来自复旦大学附属华山医院黏膜标本（×400）普通光源下紫外光光源下来自复旦大学附属华山医院同一视野，普通光源下孢子菌丝隐约可见，紫外光光源下见发荧光的孢子、菌丝普通光源下紫外光光源下（×400）来自华西医院冉玉平教授普通光学显微镜检查（×400）荧光显微镜检查（×400）真菌显微镜检查（普通光+荧光染色）由华西医院冉玉平教授提供普通光学显微镜检查（×400）荧光显微镜检查（×400）真菌显微镜检查（普通光+荧光染色）来自华西医院冉玉平教授B1B2荧光染色-荧光显微镜（×400）B1（白光光源）：病发内外可见孢子、菌丝？B2（荧光光源）：与B1同一视野，病发内外可见孢子、菌丝发出亮蓝色荧光。来自华西医院冉玉平教授荧光染色-荧光显微镜（×400）B1B2荧光光源下，病发内外仍可见孢子、菌丝发出亮蓝色荧光来自华西医院冉玉平教授荧光显微镜（×1000）B1（白光光源）：病发内外可见孢子、菌丝？B2（紫外光光源）：与B1同一视野，病发内外可见孢子、菌丝发出亮蓝色荧光。B1B2来自华西医院冉玉平教授荧光染色-荧光显微镜（×400）B1B2荧光光源下，病发内外仍可见孢子、菌丝发出亮蓝色荧光来自华西医院冉玉平教授荧光染色-荧光显微镜（×1000）B1B2荧光光源下，病发内外仍可见孢子、菌丝发出亮蓝色荧光来自华西医院冉玉平教授荧光染色-荧光显微镜（×1000）B1B2荧光光源下，病发内外仍可见孢子、菌丝发出亮蓝色荧光来自华西医院冉玉平教授普通光学显微镜检查（×1000）荧光显微镜检查（×1000）真菌显微镜检查（普通光+荧光染色）来自华西医院冉玉平教授光学显微镜检查自然光荧光皮肤镜：之字形发荧光染色-荧光显微镜检查辅助诊断头癣来自华西医院冉玉平教授普通光学显微镜检查（×400）荧光显微镜检查（×400）真菌显微镜检查（普通光+荧光染色）来自西医院冉玉平教授普通光学显微镜检查（×400）荧光显微镜检查（×400）显微镜检查（普通光+荧光染色）毛囊虫（+）真菌孢子（+）来自华西医院冉玉平教授普通光学显微镜检查（×100）荧光显微镜检查（×100）显微镜检查（普通光+荧光染色）真菌孢子（+）毛囊虫（+）混合光源（×100）来自华西医院冉玉平教授普通光学显微镜检查（×400）荧光显微镜检查（×400）双光源显微镜检查（×400）真菌显微镜检查（普通光+荧光染色）来自华西医院冉玉平教授普通光学显微镜双光源显示（×400）来自华西医院冉玉平教授荧光显微镜检查普通光学显微镜检查（×1000）荧光染色荧光显微镜检查（×1000）双光源显微镜检查（×1000）由华西医院冉玉平教授提供13899-0061孢子丝菌病普通光学显微镜检查（×1000）荧光显微镜检查（×1000）双光源显微镜检查（×1000）由华西医院冉玉平教授提供普通光学显微镜检查（×1000）荧光显微镜检查（×1000）双光源观察（×1000）来自华西医院冉玉平教授普通光学显微镜检查（×1000）荧光显微镜检查（×1000）双光源观察（×1000）来自华西医院冉玉平教授5专家评价1、真菌镜检的技术瓶颈•KOH溶解角质需要加热，耗时。•受到细胞重叠、纤维等杂质干扰，菌丝难以辨认。•孢子与气泡、油滴、水滴相似，不易分辨。•美兰、Parker墨水染色不具有特异性。•需要长期经验积累，易出现假阳性和假阴性皮肤科真菌专家评价——华西医院冉玉平教授高特异性、高效率、高灵敏度•大大提高真菌阳性率，避免假阳性•显著缩短真菌镜检时间•精准定位“真养性”，自信确认“真阴性”•变不可能为可能：真菌病快速出结果，可查见孢子丝菌病孢子•快速查毛囊虫•有助于研究真菌学形态•利于患者教育和提高依从性2、真菌荧光染色诊断－革命性技术皮肤科真菌专家评价——华西医院冉玉平教授真菌室专家评价——上海华山医院章强强教授真菌荧光染色液可适用于皮屑、甲屑、毛发、痰液、肺泡灌洗液、尿液胸水等各种标本。在荧光背景下真菌菌丝、孢子清晰可见，检测灵敏度大幅提高。特别是在KOH湿片法中，孢子与脂肪滴有时很难鉴别，而荧光染色法对脂肪滴不产生标记，易于鉴别，且特异性高，其能使少量真菌着染，弥补了传统的KOH湿片法在真菌数量少时检出率不高的不足，并且染色时间短，只需1min，结果直观。根据我们的数据统计与经验，荧光染色法在浅部标本与深部标本的检测中，与KOH湿片法比较有较大优势。真菌实验室的建立