冰冻切片HE染色步骤

冰冻切片苏木素伊红染色步骤1.组织包埋，OCT1.用铝箔纸盖子造个模出来2.在里面放入一些OCT3.将96孔板垫在液氮上，再将放入OCT的模子放在96孔板上，防止铝箔纸模接触液氮4.待OCT凝固后，取出，将修剪好的组织放在凝固的OCT上，然后再用OCT将组织包埋起来，不要包埋太多5.继续放回液氮，待OCT全部凝固后，放入-80°冰箱保存6.需要切片时，取出，放入冰冻切片机中，使之恢复一段时间，大约30min-60min2.冰冻机上切片3.固定：1.将切好的片子自然晾干；2.固定液A30s—60s3.水冲洗30s4.固定液B60s固定液A配置方法：80%中性福尔马林+19%--95%乙醇+1%冰醋酸固定液B配置方法：75%无水乙醇+25%冰醋酸中性福尔马林：90%PBS+10%--40%甲醛4.取出已经切好及固定好的冰冻切片（存放方法：短期放入泡沫盒中，放少许水，制作成湿盒保存切片；长期放入-20度冰箱保存，防止组织变形）5.苏木素染色10min（成熟苏木素制作方法，加入碘酸钠：0.2g碘酸钠/L苏木素）6.水冲洗7.1%盐酸乙醇5s（方法：放进去，取出来，重复五次，使得细胞核与细胞质分化）1%hcl+99%无水乙醇8.放入水中10min9.放入伊红5min10.然后80%，95%，100%乙醇依次洗过,每个2s，将伊红洗净11.放入二甲苯1-2s12.第一滴中性树脂在组织上，轻轻放上盖玻片，防止气泡13.吹干，读片。