农业部1077号公告-3-2008 水产品中链霉素残留量的测定 高效液相

ICS67.050B50中华人民共和国国家标准农业部1077号公告-3-2008水产品中链霉素残留量的测定高效液相色谱法Determinationofstreptomycinresiduesinfishandfisheryproductsbyhighperformanceliquidchromatography2008-08-11发布2008-08-11实施中华人民共和国农业部发布农业部1077号公告-3-2008目U吕本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口m本标准起草单位:中国海洋大学。本标准主要起草人:林拱、江洁、=F立、徐杰、王静雪。农业部1077号公告-3-2008水产品中链霉素残留量的测定高效液相色谱法范围本标准规定了水产品中链霉素残留量的高放液相色谱荧光测定方法。本标准运用于水产品中链霉素残留量的测定.2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款e凡是沌日期的引用文件，其随后所有的修改单〈不包括勘误的内容〉或修订版均不适用于水标准，然而，鼓励根据本标准，达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的':11周文忡，其最新版本适用于本标准。CB/T6682分析实验室)fJ/l.规桶和试验JjjLSC/T3016水产品抽样方法·3原理以三氧乙酸提取样品中的链霉素.经过C1&间相萃取柱净化，在碱性条件下柱后衍生.高效眼相包谐荧光检测棵测定，外际怯定晶。4试1tJJ所有试剂在给定的色谱条件干J市无干扰峙，除标明纯度外，均为分析纯。4.1试验用水应符合CB/T(i(j出一组京的要求。4.2链毒素标准品:硫酸链霉素.纯j主主!JK}们4.3甲醇:色谱纯。4.4叔丁基甲醒:色谱纯。4.5正d~皖:色谱纯，4.6庚'国磺酸铀:色语纯。4.7蔡酿磺酸铀:1，2-茶醒4-横酸例，色谱纯。4.8乙晴:色谱纯。4.9三氧乙酸:分析纯。4.10氢氧化铀:优级纯。4.1110%三镇乙酸溶液:称取芝氯乙酸27.7g，用250mL71.溶解。4.12o.5mollL庚烧磺酸铀榕液:准确称取5.05g庚皖磺酸纳，用水溶解，定容至50mL。4.13叔丁基甲酿-正己烧榕液:叔丁基甲酣十正己烧(4+1)。4.140.2mo1/L氮氧化铀梅液:称取8.OUgNaOH，用1000mL71.溶解，使用前过0.45jlm敬孔墟膜过滤并脱气e4.15乙脯溶液:乙脂十水(3十7)。4.16庚烧磺酸铀-荼酿磺酸纳潜液:准确称取1.10g庚烧磺酸饷、0.052g荼Wit确酸铀，用乙脯辞辛液(4.15)瘤解，定容至500mL，用乙酸调节至pH3.3(土0.1)，避光。农业部1077号公告-3-20084.170.01mol!L庚烧硫酸制溶液:准确称取1.10g庚烧磺酸俐，用乙腊溶液(4.15)榕解，定容至500mL，用乙酸调节至pH3.3(=0.门。4.18链霉素标准储备液:准确称取链霉素标准品O.100g，用水溶解定容至100mL.配制成1mg/mL的储备液，-4C密封避光存放，存放时间不超过15λa4.19链霉素标准工作液:使用前将链莓京标准储备液用庚烧磺酸铀溶液(4.17)稀释成一系列标准工作液p现用现配。5 仪器5.1高效液相色谱仪:配荧光检测器。5,2柱后衍生仪:PCX5200,Pickering;或性能相当者。5.3固相萃取仪。5.4分析天平:感虽O.OOOlg.5,5天平:感挝0.01g,5.6离心机:最大转速:000rlmin.5.7均质机。5.8旋转蒸发器。5.9容ill瓶，5mL,25mL.5.10坞，心瓶:50mL。5.11离心管，SOmL。5 12C18固相萃取柱:SOOmg，3mL,AccuBONDCla，Agilent;或性能相当者。注:槌及公司的信息及标识，除非做了说明，并不意味推荐使用该公司的产品。6 色谱条件6.1色谱中主，HypersijCia柱，150mmX4.6mm,SI--Lm，或性能相当者。6.2色谱柱祖度:4S0C。6.3流动相:庚烧磺酸铀-荼l!ilt磺酸铀溶液(4.16)6.4流动相流速:O.8mLImin,6.5进样盐:50μL。6.6检测波长:激发波长263nm.发射波长438n.m.6.7衍生试齐I):0.2mollLNaOH(4.14)。6.8反应温度:50'C6.9衍生试剂流速，0.3mL/min。6.10反应管;10mX2.8mm7 操伟方法7.1 试样制备按照SC/T3016的要求制备试样。7.2提取称取试样(5土0.02g)于50mL离心管中，加入10mL三氯乙酸溶液，10000r/min均质1min.振荡Srnin.4500r/min离心15min.上清液转移至烧杯巾，残渣用lOmL三氯乙酸溶液同上述方法再提取一农业部1077号公告-3-2008段，所得上清液合并过拙，收集到25mL容量瓶中，川人2mL庚炕磺酸饷溶液(4.12)，用水定容至25mL，播匀。7.3固相萃取净化依~用5皿L甲酷和10mL水预洗C1自圄相萃取柱。将7.2步骤的提取液以约1.5mL/min流速通过固相萃取柱。依改用10mL水和4mL叔丁基甲酷-正己烧溶施洗柱，弃去洗11\液。用5mL甲醇以约1.5mL/min流速进行洗脱，收集洗脱掖于鸡心瓶中，加入2mL水.4S·C诫压浓缩至液体剩余1mL~2mL，转移至5mL容虽瓶，用2mT.庚烧磺酸饷恪掖(4.17)洗瓶，合并于容量瓶，用庚烧磺酸铀榕液(4. 17)定容至5mL，经0.45μm徽孔蜡膜过滤，待上机分析。在:固相萃取柱的预处理和净化过稳保持柱子湿润。7,4标准工作曲线的制作准确取标准储备接(4.18)，用庚;皖磺酸饷溶液(4.17)稀释成地度为O.1μg/m.L,O.5!~g/mL、1.0μg/mL、2.5,U.g/mL、5.0p.g/m.L系列标准工作液，供高效液相色谱仪分析。7.5色渭分析分别注人50μL标准工作坡和试样提取被于高数液相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面职，I响应值均应在仪器检测的续性范围之内a在6规定的条件下，链霉素保留时间约为6.4min四根据标准品的保留时间定性，外标法定量c色谱图参见附录/\07.6空白试验除不如试样外，均按上述测定条件和步骤进行。B 计算试样中链霉素的含量按公式(1)计算。计算结果需扣除空向值，结果保留二位有效数字固X=AXC,XVX1000(1)A,Xm式巾-X一一试样中链霉素含量，单位为微克每千克(，ug/kg):巳一一标准榕液巾链霉素含章，单位为做克每毫升(μg/mU;A一一试样液中链霉素的l峰而积;V一一试样提取液最终定容体积，单位为毫升(mU;A,-标准熔液中链霉素的峰面积;m一一试样质盐，单位为克(g)囚9 方法灵敏度、准确度和精密度9. 1灵敏度本方法最低定量限100μg/I鸣，最低检出限20μg/kg.9.2 准确度本方法;m标放度为100μg/kg~5000μg/同时，回收率为70%~120%。9.3精密度本方法批肉和批间相对标准偏差:::;;;15%。3农业部1077号公告-3-2008附录A(资料性附录)链霉素渡相笆i晋图A.l链霉素标准晶液帽色谱固l.0μg/mL链霉索标准品液相色谱图见图Al。E,=263.E,p438gP喝呐。-飞8070605040302010o'。246号mm图A.l1.0μg/mL链霉素标准晶液相色谱图A.2空白细鱼试样液相色谱图空白自即鱼试样液相色i曾图见图A.20E.=263•E.，=43日L503α)2502∞150AHAM50OU234567mill圈A.2空白蜘鱼试样液相色i蕾圄叫农业部1077号公告-3-2008A.3 链蹲素加标制鱼试样液中目色谱图链毒素刀口标脚鱼试样被相色谱图见图A.3.E，，，，26J，r:俨438LU350(iA7ll3仪)250200150)00贵。。。234567min圄A.35.0ltg/kg链理素加标制鱼试样班相色谱图二〉