DB52T 955-2014 辣椒品种抗青枯病温室接种鉴定技术规程

ICS67.080.01B31DB52贵州省地方标准DB52/T955—2014辣椒品种抗青枯病温室接种鉴定技术规程Ruleforidentificationofpepperforresistancetopepperbacterialwilt2014-10-30发布2014-11-30实施贵州省质量技术监督局发布贵州省农业委员会发布发布DB52/T955—2014I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13术语和定义........................................................................14用具及试剂........................................................................25育苗及接种........................................................................2附录A（资料性附录）辣椒抗青枯病性鉴定结果记载表....................................5附录B（资料性附录）辣椒抗青枯病性鉴定结果汇总表....................................6DB52/T955—2014II前言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化指导原则第1部分：标准的结果和编写》给出的规则起草。请注意：本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准的附录A和附录B均是资料性附录。本标准由贵州省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：贵州省植物保护研究所。本标准主要起草人：吴石平、陈小均、袁洁、杨学辉、何海永、王莉爽、谭清群。DB52/T955—20141辣椒品种抗青枯病温室接种鉴定技术规程1范围本标准规定了辣椒品种对青枯病抗病性鉴定的接种体制备、育苗、接种、病情调查以及抗病性评价程序和方法。本标准适用于贵州辣椒资源材料及品种对辣椒青枯病抗性的室内鉴定及评价。2规范性引用文件本标准中引用的文件对本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5084农业灌溉水质标准3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1辣椒青枯病pepperbacterialwilt由青枯雷尔氏菌（Ralstoniasolanacearum(Smith)Yabuuchietal.）引起的植株萎蔫甚至枯死，茎部微管束变褐，横切新鲜病茎挤压或插入清水中，可见乳白色菌脓溢出等症状的辣椒病害。3.2抗病性diseaseresistance植物对各种病原生物的忍耐性和抵抗性，是植物在长期进化或人为选育过程中所形成并能稳定遗传的性状。3.3抗病性鉴定screeningfordiseaseresistance通过适宜技术方法鉴别植物对其特定病害的抗感情况。3.4抗病性评价evaluationofresistance采用适当的技术标准评价寄主植物对特定病害反应程度和抵抗水平。3.5致病性pathogenicity病原物所具有的破坏寄主和引起病变的能力。DB52/T955—201423.6人工接种artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体适当部位并使之发病的过程。3.7病情级别diseaseratingscale人为定量植物个体发病程度的数值化描述。3.8接种体inoculum用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。3.9病情指数diseaseindex通过对植物个体病情级别的计算所获得的群体发病程度的数值化描述。4用具及试剂4.1用具冰箱、消毒锅、pH计、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、试管、酒精灯、接种环、光学显微镜、超净工作台、恒温生物培养箱、恒温摇床、孔径规格为25mm×25mm×50mm的塑料泡沫漂浮育苗盘、外科手术刀。4.2试剂次氯酸钠、葡萄糖，蛋白胨，水解酪蛋白、氯代三苯基四氮唑（TZC）、泥炭、蛭石、膨化珍珠岩、硝酸铵、硫酸铵、普通过磷酸钙、硫酸钾。5育苗及接种5.1对照品种鉴定时设抗病对照品种和感病对照品种。5.2育苗待鉴定品种及对照品种育苗采用漂浮育苗盘育苗。辣椒种子用5％的次氯酸钠浸种5min～l0min，用清水洗净，置于28℃恒温培养箱中催芽，待种子发芽后播于装有育苗基质的育苗盘内。育苗盘为塑料泡沫漂浮盘，其规格为76cm×34.2cm×5.5cm、160孔/盘，育苗基质为泥炭、蛭石和膨化珍珠岩混合，各成分所占比例分别为60％～70％、15％～20％和15％～20％(体积比)，基质经高温蒸汽灭菌（121℃，30min），播种后在辣椒种子上盖3mm左右的育苗基质，然后将播种的漂浮盘放入营养液中。营养液配方为：每100kg清水加入50g硝酸铵、50g硫酸铵、15g尿素、100g普通过磷酸钙、50g硫DB52/T955—20143酸钾；配制营养液使用的清水应符合GB5084的蔬菜类灌溉水质要求。在18℃～25℃的自然条件下育苗。5.3接种体准备在接种前需要进行病原物接种体的繁殖。繁殖方法：将保存的菌种摇匀，挑取一环菌液在TZC培养基平板上划线，在30℃下培养36h～48h后，选取较大、白边较宽、中央粉红色、似有流动感的致病力较强的菌落，移至青枯菌液体培养基（葡萄糖5g，蛋白胨10g，水解酪蛋白1g，蒸馏水1000ml，pH7.2）中，30℃振荡培养24h，加适量无菌水调整至浓度为1×108cfu/ml的菌悬液。5.4接种5.4.1接种时期辣椒青枯病抗性鉴定接种时期为5～6叶期。5.4.2接种及管理接种采用伤根灌注接种法。接菌前先将育苗盘移出营养池，自然条件下晾48h，以降低基质内的含水量，培养室内温度白天为26℃～30℃，夜间为18℃～22℃，空气湿度为70%～80%。剔除过大苗、弱苗和病苗，每品种留80株生长一致的健康苗。然后在幼苗一侧距根1cm处用外科手术刀斜插入基质造成伤根，在伤根处每株灌注2ml的菌液。接种后将漂浮盘放入培养室的营养液内，培养室温度白天为28℃～32℃，夜间为20℃～24℃，每天光照12h～14h，强度为12000Lux～17000Lux，空气湿度为60%～70%。5.5病情调查5.5.1调查时间病情调查于接种后10d后，当感病对照病株率达70%～80%时进行。5.5.2分级方法按照以下分级方法，根据辣椒苗发病情况逐株调查，并将结果记入表1（附录A）。0级无症状；1级1片叶萎蔫；3级2～3片叶萎蔫；5级除顶部1～2片叶外，其他叶片全部萎蔫；7级整株叶片全部萎蔫；9级叶片严重萎蔫，茎尖萎蔫或枯死。5.5.3病情指数计算病情指数（DI）按以下公式计算：DI100（各级病级代表数值该病级株数）病情指数（）调查标准的最高病级代表数值总株数...............(1)5.6辣椒抗青枯病性评价：5.6.1有效鉴定判定DB52/T955—20144感病对照品种的病情指数＞50，抗病对照品种病情指数＜10时视为该批次鉴定有效。5.6.2抗性评价标准鉴定试验结束后，将按照以下评价方法对辣椒抗青枯病性进行评价结果记入表2（附录B）。高抗（HR）：0＜DI≤5，抗病（R）：5＜DI≤12.5，中抗（MR）：12.5＜DI≤30，感病（S）：30＜DI≤50，高感（HS）：DI50。5.7鉴定记载表格辣椒品种抗青枯病鉴定原始记录及结果记载表格见附录A、B。DB52/T955—20145AA附录A（资料性附录）辣椒抗青枯病性鉴定结果记载表播种时间：接种时间：调查时间：调查人：记录人：病情级别编号0级1级3级5级7级9级注：调查时根据调查标准逐株进行，用“正”字法进行记载。DB52/T955—20146BB附录B（资料性附录）辣椒抗青枯病性鉴定结果汇总表编号品种名称来源病情指数抗病性评价鉴定技术负责人（签字）鉴定单位（盖章）：鉴定日期：_________________________________DB52/T955-2014