DB34-T 202-2000 蔬菜中农药残留测定方法

安徽省地方标准蔬菜中农药残留量测定方法DB34/T202-20001范围本标准规定了蔬菜中已知和未知组分的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的速测方法、残留量的定量分析方法；有机氯和拟除虫菊酯类农药残留量的测定方法。本标准适用于安徽省内蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留的速测和定量分析，以及有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的分析。同时也适用于水果、茶叶中农药多种残留量的分析。2引用标准本标准引用下列标准，下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T5009.38-1996食品中多菌灵残留量的测定GB/T14970-1994食品中噻嗪酮残留量的测定GB/T14973-1994食品中粉锈宁残留量的测定GB/T16340-1996食品中灭幼脲残留量的测定GB/T17331-1998食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留量的测定GB/T17332-1998食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定3测定方法3.1速测法3.1.1速测卡法3.1.1.1测定原理：利用乙酰胆碱酯酶对在有机磷或氨基甲酸酯类具有高度的敏感而引起的变化来测定蔬菜中是否具有超量的有机磷或氨基甲酸酯类农药残留。3.1.1.2检测材料：农药速测卡。3.1.1.3检测步骤：a）叶菜类表面农药残留的检测1）用超声波清洗器或干净的纸和水清洗菜叶上的灰尘和杂物。2）在洗净的菜叶上滴2滴洗脱液，用另一片菜叶在滴液处轻轻磨擦。3）取一片速测卡，将涂有洗脱液的菜叶上出的菜汁轻轻地涂在白色药片上。静置10min，使农药与白色药片反应。4）将速测卡向内对折，用手指捏紧，使白色药片和红色药片紧密接触，3min后打开，观察结果。5）白色药片变兰色为阴性反应，说明农药残留符合卫生标准；若白色不变或显淡兰色则为阳性反应，说明有过量农药残留，超过卫生标准规定。b）果菜类农药残留的检测安徽省质量技术监督局2000-07-01发布2000-07-01实施DB34/T202-20001）取菜体约5g，用不锈钢剪或刀剪切碎置于试管中，加10滴洗脱液和5ml净水，或用力摇1min。2）取试管内提取液1滴滴在速测卡的白色药片中放置10min。3）将速测卡向内对折，用手指捏紧，使白色药片和红色药片紧密接触，3min后打开，观察结果。结果判定3.1.1.3条的a）。3.1.2酶抑制率法酶抑制率法测定农药残留，以对乙酰胆碱酯酶（AchE）具有抑制作用的有机磷和氨基甲酸酯类农药为检测对象。3.1.2.1试剂a)缓冲液：0.1M磷酸盐缓冲液PH=8.0。b)酶液：适量的乙酰胆碱酯酶溶于缓冲液c)底物：适量的碘化硫代乙酰胆碱（acctylthio-cholinc，ATchl）溶于蒸馏水。d)显色剂：适量的硫化双硝基苯甲酸（DTNB）溶于缓冲液。3.1.2.2仪器：农药残留毒性快速测定仪。3.1.2.3检测步骤：a)待测液制备：取2g剪碎的蔬菜样品放入试管中，加6ml缓冲液，盖上塞子，振荡2min后取出清液即为待测液。b)仪器校准：仪器预热3min，按校准程序进行校准后，方可测试。c)对照测试：取酶20μl，缓冲液2.5ml，加入专用反应瓶中，混匀静置5min后，加入显色剂100μl，底物20μl，摇匀后立即转入比色皿中，即时上机检测，打印结果。d)样品测试：取酶20μl，待测液2.5ml，加入专用反应瓶中，混匀静置5min后，加入显色剂100μl，底物20μl，摇匀后立即转入比色皿中，上机检测，打印结果。3.1.2.4检测结果判定被测样品的酶抑制率读数超过40（即达到40%以上）时，则表明被测样品的农药残留毒性可能超过安全的界定标准。3.2定量分析法3.2.1有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留量的测定。3.2.1.1试剂材料a)丙酮：重蒸。b)二氯甲烷：重蒸。c)乙酸乙酯：重蒸。d)甲醇：重蒸。e)正乙烷：重蒸。f)磷酸。g)氯化钠。h)无水硫酸钠：700℃灼烧4h，密封于瓶中备用。i)氯化胺。j)硅胶：60-80目130℃烘2h，以5%水失活。k)助滤剂：celite545。l)凝结液：5g氯化胺+10ml磷酸+10ml水，用前稀释5倍。m)脱脂棉：将脱脂棉放入大号索氏提取器中，加4%丙酮-正已烷洗剂，在水浴上回流4h后，在通气橱内让其自行挥发干。DB34/T202-2000n)农药标准品。o)农药标准液的配制分别准确称取农药标准品，用丙酮为溶剂，分别配成1mg/ml标准储备液贮于冰箱，使用时可用丙酮稀释成单品种的标准使用液，也可根据各种农药在仪器上的响应情况，以质谱定性的结果，吸取不同量的标准储备液，用丙酮稀释成混合标准使用液。3.2.1.2仪器a)组织捣碎机b)匀浆机c)超声波清洗机d)离心机：5000r/mine)恒温水浴锅f)旋转蒸发仪g)气质联用仪h)色谱仪i)微量注射器3.2.1.3检测步骤a)样品制备蔬菜样品擦去表层泥水，取可食用部分捣碎匀浆制成分析试样备用。b)提取按GB/T17331—1998第6.1.1.2条执行。c)净化按GB/T17331—1998第6.2条执行。d)测定1)气相色谱参考条件色谱柱：OV——10125m×0.32mm（内径）石英弹性毛细管柱。气体流速：氮气：50ml/min尾吹气（氮气）：30ml/min氢气：0.5kg/cm2空气：0.3kg/cm2温度：柱温采用程序升温方式。140℃180℃195℃235℃235℃进样口温度250℃检测器：质量选择检验器（MSD）或氮磷检测器（FTD）。50℃/min10/min恒温2min2℃/min恒温1min2)色谱分析分别量取1μl混合标准溶液及样品净化液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准样的峰高或峰面积比较定量。3.2.1.4计算：按式（1）计算。Xi=…………………………………………（1）hi×Esi×1000hsi×m×f式中Xi—i组分有机磷农药的含量，mg/kg；hi—试样i组分的峰高或面积；his—标准中i组分的峰高或面积；Esi—标样中i组分的量，μg；DB34/T202-2000m—样品量，g；f—换算系数，2/3。3.2.1.5精密度和准确度将有机磷和氨基甲酸酯类农药混合标准液分别加入到西红柿、白菜等中进行方法的精密度和准确度试验，添加回收率在73.38%-108.22%之间，变异系数在2.17%-7.69%之间。3.2.1.6复检如按3.2.1.3条的b）规定，提取、净化后检测不出农药组分，建议称取试样量增大到50g按同样方法提取、净化、检测。3.2.2有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定3.2.2.1试剂材料a)石油醚：沸程60-90℃重蒸。b)苯：重蒸。c)丙酮：重蒸。d)乙酸乙酯：重蒸。e)无水硫酸钠：700℃灼烧4h，密封于瓶中备用。f)弗罗里硅土：层析用，于620℃灼烧4h备用。用前140℃烘2h，趁热加5%水失活。g)农药标准品。h)标准溶液的配制：分别准确称取农药标准品，用苯溶解并配成1mg/ml储备液，使用时可用石油醚稀释配成单品种的标准使用液，再根据各种农药品种在仪器上的响应情况以及质谱仪定性检测的结果，吸取不同量的标准储备液，用石油醚稀释成混合标准使用液。3.2.2.2仪器a)振荡器b)组织捣碎机c)匀浆机d)旋转蒸发仪e)层析柱f)气质联用仪（或附电子捕获检测器）3.2.2.3检测步骤a)样品制备：取蔬菜样除去泥水擦净，取可食用部分备用。b)提取按GB/T17332—1998第6.1.2条执行。c)净化按GB/T17332—1998第6.2条执行。d)测定1)气相色谱参考条件色谱柱：OV——10115m×0.25mm（内径）石英弹性毛细管柱。气体流速：氮气：40ml/min尾吹（氮气）：60ml/min分流比：1：50温度：柱温自180℃230℃保持30min-检测器、进样口温度250℃。5℃/minDB34/T202-2000检测器：质谱仪（MSD）（或电子捕获器ECD）。2）色谱分析吸取1μl试样液注入气相色谱仪，先以质谱仪进行定性测定，记录色谱峰的保留时间和峰高。根据质谱仪的检测结果，确定残留农药的品种，吸取相应农药标准储备液，配制混标溶液，吸取1μl混标溶液注入气相色谱，记录色谱峰的保留时间和峰高，用外标法定量。3.2.2.4结果计算：计算按式（1）计算。Xi=×k………………………………………（1）hi×Esi×V2hsi×V1×m式中Xi—样品中农药的含量，mg/kg；Esi—标准样品中i组分农药的含量，μg；V1—样品中进样体积μlHsi—标准样品中i组分农药峰高，mm；hi—样品中i组分农药峰高，mm；m—试样的质量，kg；k—稀释倍数。3.2.2.5精密度和准确度将农药混合标准液加入到蔬菜中进行方法的精密度和准确度试验，添加回收率在81.71%-112.41%之间，变异系数在2.48%-10.05%之间。3.2.2.6复检如按3.2.2.3条的b）规定，提取、净化后检测不出农药组分，建议称取试样量增大到50g，按同样方法提取、净化、检测。3.2.3多菌灵残留量的测定按GB/T5009.38的规定执行。3.2.4噻嗪酮残留量的测定按GB/T14970的规定执行。3.2.5粉锈宁残留量的测定按GB/T14973的规定执行。3.2.6灭幼脲残留量的测定按GB/T16340的规定执行。附加标准：本标准由安徽省质量技术监督局提出。本标准由安徽质量技术监督局、安徽国家农业标准化与监测中心负责起草。本标准主要起草人：周云霞、朱竹、王先宏、金美峰、徐长兴。