DB13T 1384.2-2011 饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定

ICS65.120B46DB13河北省地方标准DB13/T1384.2—2011饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定Determinationofstrain/tetracycline/aureomycininfeed2011-05-10发布2011-05-20实施河北省质量技术监督局发布DB13/T1384.2—2011I前言本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出。本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、河北医科大学、北京出入境检验检疫技术中心、河北省饲料产品质量监督检验站。本标准主要起草人：张岩、张宏、李挥、丛斌、杨立学、卢晓宇、吕品、沈磊、米振杰、贾茜、李志平、马春玲、张敬轩、高振同、武英利。DB13/T1384.2—20111饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定1范围本标准规定了饲料中土霉素、四环素、金霉素的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定。本标准的方法检出限：50μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682－1992，neqIS03696：1987）3原理试样提取液经离心后，上清液用OasisHLB固相萃取柱和阴离子交换柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2乙腈：色谱纯。4.3盐酸。4.40.4mol/L盐酸溶液：准确量取32.8mL盐酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。4.5草酸。4.60.01mol/L草酸甲醇溶液：准确称取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。4.7甲酸。4.8甲酸溶液：准确量取4mL甲酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀即可。4.9土霉素、四环素、金霉素标准物质：纯度≥95％。4.10土霉素、四环素、金霉素标准储备溶液：0.1mg/mL。准确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、标准物质，分别用甲醇配成0.1mg/mL的标准储备液。储备液贮存在-18℃冰柜中。4.11土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液：根据需要吸取适量土霉素、四环素、金霉素标准储备溶液，用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液，基质混合标准工作溶液在4℃保存，可使用三天。4.12OasisHLB固相萃取柱或相当者：500mg，6mL。使用前分别用5mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润。DB13/T1384.2—201125仪器5.1液相色谱-串联四级杆质谱仪，配有电喷雾离子源。5.2分析天平：感量0.lmg和lmg各一台。5.3旋涡混匀器。5.4固相萃取仪。5.5高速离心机。5.6具塞锥形瓶：50mL。5.7离心管：50mL，5mL。5.8氮吹仪。5.9旋转蒸发器。6试样的制备6.1提取准确称取3.0g样品（准确至0.01g），置于50mL具塞锥形瓶中，加入甲醇10mL，旋涡混匀1min，加入盐酸溶液（4.4）30mL，旋涡混匀1min，超声20min，移至50mL离心管中，5000r/min离心10min，取上清液，待净化。6.2净化取10mL上清液与40mL水稀释混匀，再移入下接OasisHLB柱的贮液器中。溶液以小于1.0mL/min的流速过柱，然后依次用甲醇-水溶液（4.9）淋洗，减压抽干20min。用草酸甲醇溶液（4.6）5mL洗脱，收集洗脱液于40℃减压旋转蒸发至干,用1.0mL流动相溶解残渣，12000r/min离心10min，经0.45μm有机滤膜过滤后，待测。7测定步骤7.1测定7.1.1液相色谱条件色谱柱：InertsilC8，3.5μm，150mm×2.1mm（i.d）或相当者；流动相：乙腈＋甲醇＋0.4％甲酸溶液（18＋4＋78）；流速：0.2mL/mim；柱温：25℃；进样量：20μL。7.1.2质谱条件离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；电喷雾电压、碰撞电压等条件优化至最佳值；定性离子对、定量离子对见表1。DB13/T1384.2—20113表1三种四环素族抗生素定性离子对、定量离子对土霉素四环素金霉素定性离子对/（m/z）461/426461/443461/381445/410445/154445/428479/444479/154479/462定量离子对/m/z）461/426445/410479/4447.1.3液相色谱-串联质谱测定用土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液溶度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中土霉素、四环素、金霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。土霉素、四环素、金霉素标准总离子流图见附录A。7.2平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.3空白试验除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。8结果计算结果按式（1）计算：10001000••=mVcX式中：X——试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V——样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；M——样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值。9精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20％。.............................................(1)DB13/T1384.2—20114AA附录A（资料性附录）三种四环素族抗生素标准物质总离子流图1——土霉素，3.31min2——四环素，3.92min3——金霉素，8.02min_________________________________