NYT 2068-2011 蛋与蛋制品中ω-3多不饱和脂肪酸的测定 气相色谱法

ICS67.120.20X18中华人民共和国农业行业标准NY/T2068—2011蛋与蛋制品中ω-3多不饱和脂肪酸的测定气相色谱法Eggandeggproducts-determinationofco-3polyunsaturatedfattyacidcontentbygaschromatography2011-09-01发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T2068—2011前言本标准按照GB／T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC／TC274)归口。本标准起草单位：农业部食品质量监督检验测试中心（上海）、上海展望科技有限公司。本标准主要起草人：孟瑾、黄菲菲、韩奕奕、陈美莲、陈景春、何亚斌、王建军、赵嘉胤、陈军。ⅠNY/T2068—2011蛋与蛋制品中ω-3多不饱和脂肪酸的测定气相色谱法1范围本标准规定了蛋与蛋制品中ω-3多不饱和脂肪酸(a-亚麻酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA))的气相色谱测定方法。本标准适用于蛋与蛋制品。本标准最低检出限：a-亚麻酸0.5mg／100g、二十碳五烯酸(EPA)1.0mg／100g、二十二碳六烯酸(DHA)1.0mg／100g。本方法的标准溶液线性范围为0.01mg／mL～l.0mg／mL。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法GB／T17376—2008动植物油脂脂肪酸甲酯制备3原理样品经盐酸水解，乙醚—石油醚提取脂肪，氢氧化钾—甲醇皂化后，经j氟化硼—甲醇溶液甲酯化生成脂肪酸甲酯，通过气相色谱柱分离，以氢火焰离子化检测器检测，内标法定量。4试剂除另有说明外，所用试剂均为分析纯或以上规格，实验用水为GB／T6682规定的一级水。4.1无水乙醚。4.2石油醚，沸程30℃～60℃。4.3乙醇，体积分数≥95%。4.4正己烷(C6H14)，色谱纯。4.5盐酸，质量分数为37%。4.6焦性没食子酸。4.7无水硫酸钠。4.8三氟化硼甲醇溶液：市售试剂的质量分数为13%～15%；或按照GB／T17376—2008的附录A中A.1制备。警告：三氟化硼甲醇溶液为强腐蚀性试剂，使用时应注意防护。4.9饱和氯化钠溶液：溶解360g氯化钠(NaCl)于1L水中，搅拌溶解，澄清备用。4.10氢氧化钾甲醇溶液[c(KOH)=0.5mol／L]：称取2.8g氢氧化钾(KOH)，用甲醇溶解，并稀释定容至100mL，混匀。4.11十一碳酸甘油三酯内标溶液：每毫升含十一碳酸甘油三酯1.0mg。准确称取十一碳酸甘油三酯标准物质（纯度≥99%）50mg于50mL棕色容量瓶中，用甲苯溶解定容，此溶液每毫升含十一碳酸甘油三酯1.0mg。摇匀，贮存于－18℃冰箱中，有效期一年。4.12脂肪酸甲酯标准物质：十一碳酸甲酯、a-亚麻酸甲酯、二十碳五烯酸甲酯、二十二碳六烯酸甲酯，纯度≥99%。1NY/T2068—20114.13脂肪酸甲酯标准储备液：每毫升含脂肪酸甲酯1.0mg。准确称取各脂肪酸甲酯标准物质(4.12)50mg于50mL棕色容量瓶中，用甲苯溶解定容，此溶液每毫升含各脂肪酸甲酯1.0mg。摇匀，贮存于－18℃冰箱中，有效期半年。4.14混合脂肪酸甲酯标准工作液：以甲苯将脂肪酸甲酯标准储备液(4.13)逐级稀释得到质量浓度为0.050mg／mL、0.100mg／mL、0.200mg／mL、0.500mg／mL、1.00mg／mL的混合标准工作液，现配现用。5仪器设备常用实验室仪器及以下各项。5.1气相色谱仪：配FID检测器。5.2分析天平：感量0.0001g。5.3旋转蒸发仪。5.4离心机，5000r／min。5.5恒温水浴锅。5.6抽脂管，带塞子。5.7回流装置。6分析步骤6.1试样制备6.1.1鲜蛋、皮蛋、咸蛋、糟蛋预先将试样从冰箱中取出，放至室温。取500g，去壳，鲜蛋用匀浆器充分混匀；皮蛋、咸蛋、糟蛋用匀浆器充分打碎混匀。6.1.2干燥蛋制品准确称取干燥蛋制品0.500g样品于抽脂管(5.6)中，待测。6.1.3其他样品称取试样2.00g至抽脂管(5.6)中，待测。6.1.46.1.1和6.1.2所述样品中加入100mg焦性没食子酸(4.6)、1.00mL十一碳酸甘油三酯内标溶液(4.11)以及10mL盐酸(4.5)混匀，置于80℃恒温水浴锅(5.5)水解30min，取出轻摇，冷至室温。6.2脂肪提取在6.1.4的抽脂管中加入10mL乙醇(4.3)，混匀。加入25mL无水乙醚(4.1)，加塞振摇1min。加入25mL石油醚(4.2)，加塞振摇1min，静置，有机层转入磨口平底烧瓶中。再加入25mL无水乙醚(4.1)及25mL石油醚(4.2)，加塞振摇1min，静置，有机层转入磨口平底烧瓶中，再加入10mL无水乙醚(4.1)及10rnL石油醚(4.2)，加塞振摇1min，静置，合并三次抽提液于磨口平底烧瓶中，用旋转蒸发仪50℃下浓缩至近干。6.3皂化酯化浓缩物(6.2)加入10mL氢氧化钾甲醇溶液(4.10)置于70℃水浴上回流5min～10min。再加入5mI.三氟化硼甲醇溶液(4.8)，继续回流10min。冷却至室温，将平底烧瓶中的液体转入50mL离心管中，用3mL饱和氯化钠溶液(4.9)清洗平底烧瓶，共清洗三次，合并饱和氯化钠溶液于50mL离心管，加入10mI)正己烷(4.4)，振摇后，以5000r／min离心5min，取上层清液过无水硫酸钠(4.7)脱水后作为试液，供气相色谱仪(5.1)测定。注1：甲酯化后的试样如需保存，应用惰性气体保护，密封并置于-18℃冰箱中。2NY/T2068—2011注2：三氟化硼甲醇溶液可能在20～22碳脂肪酸区域内产生干扰峰，因此，对于每批新的试剂或溶液进行试剂空白实验，若有干扰峰出现，则不可用。6.4色谱参考条件色谱柱：SP-2560，100m×0.25mm，0.20µm，或性能相当的色谱柱。载气：高纯氮气（纯度大于99.99%）。进样口温度：220℃。分流比：30﹕1。检测器温度：260℃。柱温箱温度：初始温度140℃，保持5min，以4℃／min升温至240℃，保持15min。载气流速：1.0mL／min。氢气流速：30mL／min。空气流速：300mL／min。6.5测定准确吸取各不少于两份的2µL混合脂肪酸甲酯标准工作液(4.14)及试液(6.3)分别进样，以色谱峰面积积分定量。响应值应在工作曲线线性范围内。典型色谱图参见附录A。7结果计算试样中各脂肪酸含量以质量分数Xi计，数值以毫克每百克(mg／100g)表示，按式(1)计算：CllCllCll1.0067100iiiiAcVXFfAm××=××××…………………………………(1)式中：Fi——脂肪酸甲酯i的响应因子；Ai——样品中脂肪酸甲酯i的峰面积；ACll——样品中的内标物十一碳酸甲酯的峰面积，cCll——十一碳酸甘油三酯的浓度，单位为毫克每毫升(mg／mL)；VCll——样品中加入的十一碳酸甘油三酯的体积，单位为毫升(mL)；1.0067——十一碳酸甘油三酯转化为十一碳酸甲酯的转换系数；fi——脂肪酸甲酯转化为脂肪酸的换算系数，见表1；m——样品的质量，单位为克(g)。表1脂肪酸甲酯转化为脂肪酸的换算系数一览表脂肪酸名称fi转换系数α-亚麻酸(C18:3n3)0.9520二十碳五烯酸EPA(C20:5n3)0.9557二十二碳六烯酸DHA(C22:6n3)0.9590脂肪酸甲酯i的响应因子Fi按式(2)计算：llllsiisicAFAc×=×………………………………………………（2）式中：Fi——脂肪酸甲酯i的响应因子；csi——混标中各脂肪酸甲酯i的浓度，单位为毫克每毫升(mg／mL)；All——十一碳酸甲酯标准溶液的峰面积；Asi——脂肪酸甲酯的峰面积；cll——混标中十一碳酸甲酯的浓度，单位为毫克每毫升(mg／mL)。3NY/T2068—2011测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不得超过算术平均值的10%。在再现性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不得超过算术平均值的15%。4NY/T2068—20115