DB34T 1371-2011 动物组织中那西肽的残留测定-气相色谱质谱法

ICS67.120X04DB34安徽省地方标准DB34/T1371—2011动物组织中那西肽的残留测定—气相色谱质谱法DeterminationNosiheptideresidueinanimaltissue-Gaschromatographymassspectrometrymethod2011-03-16发布2011-04-16实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1371—2011I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：蔡一杰、明文庆、刘红云、吴蕾、张莉、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。DB34/T1371—20111动物组织中那西肽的残留测定—气相色谱质谱法1范围本标准规定了用气相色谱质谱法测定猪、牛、鸡、鸭肌肉、肝脏、肾脏中那西肽残留测定方法。本标准适用于猪、牛、鸡、鸭肌肉、肝脏、肾脏中那西肽的残留测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试样制备猪、牛、鸡、鸭的肌肉、肝脏、肾脏等动物组织，去筋后切成小块，制成糜状后，于-18℃以下温度冷冻保存。4原理样品以乙腈提取，正己烷脱脂，固相萃取柱净化，用N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1%三甲基氯硅烷（TMCS）衍生化，气相色谱-质谱进行定性和定量分析。5试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682二级水的规定。5.2那西肽标准品：纯度≥95％。5.3标准储备液：精密称取那西肽标准品适量，用甲醇配制成100µg/mL，作为标准储备溶液，4℃冰箱保存，有效期为30天。5.4标准工作液：精密量取适量那西肽储备液，用甲醇稀释成浓度为0.5、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0ng/mL的标准工作液，4℃冰箱保存，有效期为7天。5.5甲醇：色谱纯。5.6乙腈：色谱纯。5.7乙腈。5.8无水硫酸钠。5.9磷酸。5.10正丙醇。5.11正己烷。DB34/T1371—201125.12固相萃取柱：碱性氧化铝柱，2g/12mL，或相当者。5.13衍生化试剂：N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）（99:1）。6仪器设备6.1气相色谱质谱仪。6.2氮吹仪。6.3离心机。6.4振荡器。6.5涡旋混合器。6.6分析天平：感量0.0001g，0.001g。6.7鸡心瓶50mL。6.8离心管：50mL、10mL。6.9分液漏斗：50ml。6.10固相萃取装备。6.11旋转蒸发器。7测定步骤7.1试样提取称取5g（精确到0.001g）均质动物组织样品于50mL离心管中，加入20mL乙腈和4g无水硫酸钠，用玻璃棒充分搅拌，振荡5min后，置于离心机上以3000r/min离心10min，转移上清液于分液漏斗中，残渣再用20mL乙腈提取一次，合并两次提取液，转移到已加入20mL正己烷的分液漏斗中，收集乙腈层，加入5mL正丙醇，40℃下在旋转蒸发器上浓缩至干备用。7.2试样净化将固相萃取柱（SPE）用3mL95％乙腈淋洗，用甲醇3mL溶解试样提取浓缩物（7.1），上SPE柱，收集洗脱液，混匀。7.3衍生化用氮气吹干净化后洗脱液（7.2），加入100µL衍生试剂，密封70℃衍生1h，氮气吹干，加0.5mL乙腈溶解，用气相色谱质谱分析。同时分别取5.3项下标准工作液系列各1ml用氮气吹干，加入100µL衍生试剂，按试样同法操作。7.4气相条件色谱柱：5％苯基甲基聚硅氧烷，柱长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μm或性能相当的色谱柱。进样口温度：250℃。升温程序：起始温度100℃保持1min，以30℃/min的速率升温至280℃（保持9min）。载气：氦气纯度99.999％。流量：0.8Ml/min。进样方式：不分流进样。进样体积：1.0μL。DB34/T1371—201137.5质谱条件样品离子源：负化学电离源（反应气为甲烷）。甲烷：纯度99.999％。离子源温度：150℃。传输线温度：250℃。检测电压：500V。选择离子收集模式，收集质荷比为92，99，182，274m/z的4个碎片离子。8定性定量方法定性方法：样品与标准品保留时间的相对标准偏差不大于0.5％。特征离子基峰丰度与标准品相差不大于20％。定量方法：以92，99，182和274峰面积之和进行校正定量。9结果计算和表述按照下式计算试样中药物残留的含量：mAsVCsAX×××=....................................(1)式中：X——试样中药物的含量，单位为毫克每千克（µg/kg）；A——试样溶液的选择性离子色谱图中的峰面积响应值；As——标准溶液的选择性离子色谱图中的峰面积响应值；V——定容体积，单位为毫升（mL）；Cs——标准溶液的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；m——试样质量，单位为克（g）。计算结果扣除空白值，平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。10检测方法灵敏度、准确度、精密度10.1灵敏度本方法的检测限为0.1µg/kg。10.2准确度本方法添加浓度为1.0µg/kg时，回收率均为80％～120％。10.3精密度本方法的批内变异系数CV≤15％，批间变异系数CV≤20％。DB34/T1371—20114AA附录A（资料性附录）那西肽标准溶液衍生物质谱图图A.1那西肽标准溶液衍生物质谱图_________________________________