细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒

北京雷根生物技术有限公司细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒简介：Leagene细胞周期不细胞凋亡检测试剂盒(CellCycleandApoptosisAnalysisKit)是一种采用经典的碘化丙啶染色(PIstaining)方法进行细胞周期不细胞凋亡分析的检测试剂盒。碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)是一种可以嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中并不之结合的荧光染料，无碱基特异性。碘化丙啶不双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。CellCycleandApoptosisAnalysisKit经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期不细胞凋亡检测，亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1～1×106之间。组成：操作步骤(仅供参考)：1、细胞样品的制备：⑴贴壁细胞：①
离心使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl培养液，以免吸走细胞。②
加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。③
离心使细胞沉到管底。⑵悬浮细胞：①
离心使细胞沉到管底。②
小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl培养液，以免吸走细胞。③
加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。④
离心使细胞沉到管底。⑤
小心吸取上清并丢弃，可留大约50μlPBS，以免吸走细胞。2、细胞的固定：加入1ml冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h或更长时间。4℃固定12～24h可能效果更佳。3、细胞的清洗：①
离心使细胞沉到管底。编号名称DA003050TStorage试剂(A):PIStainBuffer25ml-20℃试剂(B):PIStain(20×)1.5ml-20℃避光试剂(C):RNaseASolution(50×)0.5ml-20℃使用说明书1份北京雷根生物技术有限公司②
小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl溶液，以免吸走细胞。③
加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。④
离心使细胞沉到管底。⑤
小心吸取上清并丢弃，可留大约50μlPBS，以免吸走细胞。⑥
轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。4、PI染色：⑴一步法：①
PI染色工作液的配制：根据待检样品的数量，取适量试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)混合形成PI染色工作液。配制好的PI染色工作液4℃避光保存待用，24h有效。1个样品10个样品试剂(A):PIStainBuffer500μl5ml试剂(B):PIStain(20×)25μl250μl试剂(C):RNaseASolution(50×)10μl100μl总量535μl5.35ml②
在每个待检细胞样品中，加入500μl配制好的PI染色工作液，轻轻重悬细胞沉淀，置于37℃避光水浴30min。⑵两步法：①
在沉淀细胞中加入40μlPBS和10μlRNaseASolution(50×)，置于37℃水浴30min。②
PI染色工作液的配制：根据待检样品的数量，取适量试剂(A)、试剂(B)混合形成PI染色工作液。配制好的PI染色工作液4℃避光保存待用，24h有效。1个样品10个样品试剂(A):PIStainBuffer500μl5ml试剂(B):PIStain(20×)25μl250μl总量525μl5.25ml③
在每个待检细胞样品中，加入500μl配制好的PI染色工作液，轻轻重悬细胞沉淀，置于4℃避光30min。5、检测不分析：用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。染色结果：凋亡细胞G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型，在光散射谱上，前向光散射低于正常，侧向光散射高于正常。注意事项：1、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。北京雷根生物技术有限公司、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。3、在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀丌充分，可以适当提高离心力或延长离心时间。4、PI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。