20040113_gbt9695.17－1988

中华人民共和国国家标准UDC637.51/.52:443.06肉与肉制品葡糖酸—δ—内酯含量的测定GB/T9695-17.88Meatandmeatproducts—Methodfordeterminationofglucono-delta-lactonecontent━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本标准等同采用国际标准ISO4133—1979《肉和肉制品中葡糖酸-δ-内酯含量的测定》。1主题内容与适用范围本标准规定了肉和肉制品中葡糖酸-δ-内酯含量的测定方法。本标准适用于肉和肉制品中葡糖酸-δ-内酯含量的测定。2引用标准GB9695.15肉与肉制品水分含量测定GB9695.19肉与肉制品取样方法3原理用冷高氯酸提取试样中的葡糖酸-δ-内酯,离心,倾析并过滤上清液。在氢氧化钾作用下葡糖酸-δ-内酯转化成葡糖酸酯。葡糖酸酯通过葡糖酸酯激酶和6-磷酸葡糖酸酯脱氢酶的作用,产生5-磷酸核酮糖并使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)还原。葡糖酸酯+ATP葡糖酸酯激酶6-磷酸葡糖酸酯+ADP6-磷酸葡糖酸酯+NADP6-磷酸葡糖酸酯脱氢酶5-磷酸核酮糖+NADPH+CO2+H-用分光光度计测量还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的光密度,然后计算出葡糖酸-δ-内酯的含量。4试剂所用试剂均为分析纯。容器应认真清洗,蒸煮或灭菌。水是重蒸水。4.1高氯酸(GB623):0.4mol/L溶液。4.2氢氧化钾(GB2306):2mol/L溶液。4.3缓冲液：称取二苷氨酞2.64g和氯化镁(GB672)0.284g溶于150mL水中,用氢氧化钾溶液调pH至8.0,定容到200mL。4.4烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠盐:称取烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠盐50mg于带盖的小瓶中,用5.0mL水溶解。4.5腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)溶液:称取腺嘌呤核苷三磷酸钠盐250mg和碳酸氢钠(GB640)250mg于带盖的小瓶中,加入5mL水溶解。4.3,4.4,4.5试剂可在4℃下保存四星期。4.6每毫升6-磷酸萄糖酸酯脱氢酶(6-PGDH)悬液中含有6-PGDH2.0mg,葡糖酸激酶和还原型NADP氧化酶不超过0.05％。4.7每毫升葡糖酸激酶(GK)悬液中含有GK1.0mgNADP氧化酶含量不超过0.05％。4.6,4.7试剂可在4℃下保存6个月。5仪器和设备5.1常用实验室仪器5.2绞肉机：孔径不超过4mm。5.3匀浆器。5.4离心机。5.5紫外分光光度计。6试样6.1按GB9695.19取样。6.2至少取有代表性试样200g通过绞肉机绞两次混匀。6.3绞好的试样要尽快分析,若不立即分析,要密封冷藏贮存,防止变质和成分发生变化,贮存的试样在启用时必须重新混匀。7分析步骤7.1葡糖酸酯的制备称取试样50g(精确至0.01g),放入烧杯内,加入0.4mol/L冷高氯酸溶液100mL于匀浆器中均浆,转移到离心管中,在3000r/min离心10min除去上面的脂层,上清液通过扇形滤纸过滤到200mL锥形瓶中,弃去最初滤液10mL。取滤液50mL于100mL烧杯中,用氢氧化钾溶液调pH至10。然后将烧杯内容物完全转移到100mL容量瓶中并定容,置于冰浴中放置20min后,用扇形滤纸过滤,弃去最初的滤液10mL。取滤液25mL或适当体积移入100mL容量瓶中并定容。7.2测定取缓冲液2.50mL,NADP溶液0.1mL和ATP溶液0.1mL分别置于两个比色杯中,其中一个比色杯加入提取液0.2mL为试验溶液,另一个比色杯中加入水0.2mL为空白溶液,然后再分别加入6-磷酸葡糖酸酯脱氢酶0.05mL,混匀后放置5min,以空气为参比在365nm或340nm波长处测光密度。A1——试验溶液的光密度值A1B——空白溶液的光密度值取葡糖酸酯激酶悬液0.01mL分别置于上述两个比色杯中,立即混匀。10～15s内在360nm或340nm波长处测光密度。以后每隔2min测一次,直到光密度值恒定为止。绘制出光密度值与时间的关系曲线,并查出光密度最大值。A2——试验溶液的光密度值A2B——空白溶液的光密度值8分析结果的计算M×m计算公式：100×━━━2.96×196.1100100100100X(％)=0.908ΔA×━━━━━━×━━━×━━━×━━━━━━━×━━K×0.2×10001000V50mΔAM×m=52.705×━━━━━×(100+━━━━)K×V×m100式中:X——葡糖酸-δ-内酯含量,％;ΔA——(A2-A1)-(A2B-B1B);196.1——D-(＋)-葡糖酸的相对分子量；K——在365nm波长时,K=3.5cm**2/μmol；在340nm波长时,K=6.23cm**2/μmol；V——取滤液的体积(25mL)；M——试样的含水量；m——试样质量g。当符合允许差要求时,则取两次测定的算术平均值作为结果,精确到0.01％。8允许差同一分析者同时或相继两次测定允许差不超过平均值的10％。━━━━━━━━━━━附加说明：本标准由中华人民共和国商业部食品局提出。本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。本标准由中国肉类食品综合研究中心负责起草。本标准主要起草人裴显庆、张纯。━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━中华人民共和国商业部1988-02-25批准1989-03-01实施