EGCG通过抑制COX-2表达及PGE2合成诱导胃癌细胞系HGC27凋亡-计春燕,谭诗云,李明

EGCG通过抑制COX-2表达及PGE2合成诱导胃癌细胞系HGC27凋亡-计春燕,谭诗云,李明25第17卷第4期2021?年?4?月辽宁中医药大学学报JOURNALOFLIAONINGUNIVERSITYOFTCMVol.17No.4Apr.，2021EGCG通过抑制COX-2表达及PGE2合成诱导胃癌细胞系HGC27凋亡计春燕1，谭诗云2，李明2（1.湖北省新华医院消化内科，湖北?武汉?430015；2.武汉大学人民医院消化内科，湖北?武汉?430060）摘要：目的：探讨EGCG对胃癌细胞系HGC27细胞凋亡的影响及其机制。方法：体外培养的HGC27细胞，分为对照组和实验组，实验组用不同浓度EGCG处理24、48、72?h，对照组加入同等体积的培养基，MTT法测定其对HGC2细胞增殖的影响；EGCG（浓度分别为0、10、20、40?μg/mL）处理HGC27细胞48?h后，分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡，分光光度计检测Casepase-3、Casepase-9相对活性，Rh123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化，western?blot法检测环氧合酶2（COX-2）基因表达，ELISA法检测PGE2含量。结果：EGCG（浓度10~80?μg/mL）能显著抑制HGC27细胞增殖，呈剂量和时间依赖性；EGCG（浓度分别为10、40、80?μg/mL）作用HGC27细胞48?h后，细胞凋亡率分别为14.8%、25.8%、37.7%，对照组凋亡率为0.6%；Casepase-3、Casepase-9相对活性显著增加，线粒体膜电位降低，COX-2的表达降低，PGE2合成减少。结论：EGCG可通过抑制HGC27细胞COX-2表达及PGE2合成，激活线粒体凋亡途径，抑制细胞增殖并促进其凋亡。EGCG可能是一种前景广阔的抗肿瘤药物。关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯；HGC27细胞；线粒体途径；环氧合酶-2；前列腺素中图分类号：R735.2文献标志码：A文章编号：1673-842X(2021)04-0025-04收稿日期：2021-09-03基金项目：湖北省自然科学基金重点资助项目（2021CFA076）作者简介：计春燕（1977-），女，湖北十堰人，副主任医师，硕士，研究方向：消化道肿瘤的防治。通讯作者：谭诗云（1962-），男，湖北武汉人，教授、主任医师，博士研究生导师，研究方向：消化道肿瘤防治。EGCGInducesCellApoptosisThroughInhibitingtheExpressionofCOX-2andPGE2SynthesisinHGC27GastricCancerCellsJIChunyan1，TANShiyun2，LIMing2（1.DepartmentofGastroenterology，HubeiXinhuaHospital，Wuhan430015，Hubei，China；2.DepartmentofGastroenterology，RenminHospitalofWuhanUniversity，Wuhan430060，Hubei，China）Abstract：Objective：ToinvestigatetheeffectofEGCGonthecellapoptosisofgastriccancerlineHGC27cellsanddiscussitspossiblemechanisms.Methods：HGC27cellswereculturedinvitro.Theexperimentsweredividedintotwogroups，includingcontrolgroupanddrugtreatedgroup.Thecontrolgroupreceivedonlytheculturemedium.AftertreatmentbyEGCGatdifferentconcentrationsrespectivelyatdifferenttime，thecellsurvivalwasdeterminedbytheMTTmethod.Apoptosiswasdetectedbyflowcytometry.Therelativeactivityofcaspase-3andcaspase-9weremonitoredbyspectrophotometer.ThemitochondrialmembranepotentialwasevaluatedbyflowcytometryanalysisafterRh123probestaining.WesternblotwereusedforCOX-2proteinanalysis.TheexpressionofPGE2intheculturemediumwasdetectedbyELISA.Results：FromthedataofMTT，thecellproliferationofHGC27cellswasinhibitedbyEGCGinadose-dependentandtime-dependentmanner.FlowcytometryassaysshowedthatEGCGsignificantlyinducedcellapoptosis.AftertreatedwithEGCG，theapoptosisrateofHGC27cellswas14.8%，25.8%，and37.7%respectively，whichshowedanobviousconcentration-effectrelationship.Therelativeactivitiesofcaspase-3andcaspase-9ofEGCGgroupwereincreased.Themitochondrialmembranepotentialwasreduced.ThedataofwesternblotshowedthatEGCGdown-regulatedCOX-2inadose-dependentmanner.AndEGCGinhibitedthePGE2synthesis.Conclusion：EGCGinhibitsthecellproliferationandinducescellapoptosisthroughinhibitingtheexpressionofCOX-2andPGE2synthesisinHGC27gastriccancercells.EGCGmaybeapromisingantitumoragentforgastriccancertreatment.Keywords：EGCG；HGC27cell；mitochondrialapoptosispathway；COX-2；PGE2煎煮与传统法煎煮对当归补血汤质量的影响是相同的，自动煎药机可以用于煎煮中药，其药液质量是有保障的，与传统煎煮法所得药液质量基本相同。但是，当归补血汤的药味毕竟只有2味，而平时医师的处方药物一般在7~13味，也有的多达20多味，这么多药物在煎煮过程中相互作用，要评价其药液质量，就要求选择更多的评价指标，而且要根据评价指标的权重进行综合评价，这就是课题组今后研究中要加以考虑和改进的。◆参考文献[1]李学林.中药应用形式及特点[J].中医研究，2021，19(2)：59.[2]欧阳荣，彭懿，刘绍贵，等.四种中药的直火单煎与机煎单煎液的质量对比检测[J].中国药业，2021，10(3)：48-49.[3]吴忠义，陈宗良，吴立成，等.HPLC测定不同煎法徐长卿中丹皮酚含量[J].中国现代中药，2021，11(9)：31-32.[4]杨凌，包玮鸳.煎药机煎药与传统方法煎药的煎出率比较[J].时珍国医国药，2021，12(5)：410-411.[5]蒲维娅，万伟中.不同煎煮工艺对复方白芍汤质量的影响[J].云南中医中药杂志，2021，30(8)：53-54.[6]陈迎春，相聪坤，安福丽.生化汤传统煎法与煎药机煎法的对比研究[J].中国药业，2021，18(14)：80-81.[7]于忠兴，唐风雷，范正达.自动煎药与传统煎煮法对白芍汤剂质量的影响[J].抗感染药学，2021，3(2)：81-82.[8]龚慕辛，薛然，聂波，等.不同煎药方法对感冒清热汤剂质量的影响[J].TraditionalChineseDrugResearch&ClinicalPharmacology，2021，20(1)：44-45.DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2021.04.009辽宁中医药大学学报17卷胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，胃癌死亡率居肿瘤相关死亡率前列[1]。我国胃癌的发病率呈逐年上升趋势，严重威胁着我国人民群众的生命健康。胃癌治疗方法以手术切除为主，辅以化疗，但常规的化疗药物毒性大且常出现耐药性，因此寻找高效低毒的抗肿瘤药已经成为国内外研究热点。绿茶是公认的健康饮料，近年来发现其富含有抗肿瘤成分，包括表儿茶素（epicatechin，EC）、表没食子儿茶素（epigallocatechin，EGC）、表儿茶素没食子酸酯（epicatechingallate，ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechingallate，EGCG）。其中EGCG是绿茶中茶多酚中含量最高、活性最强的单体，其具有广泛的药理活性，包括抗肿瘤、降血压、降脂、降血糖及抗氧化等。研究证实，EGCG对肝癌、乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤均有抗肿瘤作用[2-4]。环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）是前列腺素（prostaglandins，PG）特别是前列腺素E2（PGE2）合成过程的重要限速酶[5]，COX-2在多种肿瘤中过表达[6]。过表达的COX-2能产生大量的PGE2，广泛参与细胞增殖、凋亡、侵袭转移等[7]，而选择性COX-2抑制剂能够治疗并预防大肠癌及其他肿瘤[8]。因此，COX-2被认为是潜在的肿瘤治疗靶点[9]。本研究旨在观察EGCG对胃癌HGC27细胞的增殖及凋亡的影响，并探讨EGCG对其COX-2表达及PGE2合成的影响，以期为临床应用提供理论研究基础。1材料与方法1.1?材料胃癌细胞HGC27购自中国科学院上海细胞库；EGCG、MTT及罗丹明123（Rhodamine123，Rh123）购于sigma公司；AnnexinV/PI试剂盒购于BENDER公司；胎牛血清购自Invitrogen公司；RPMI1640培养液购于杭州四季青生物材料研究所，胎牛血清系GIBCO产品；MTT试剂盒购于武汉谷歌生物科技有限公司；Caspase-3、Caspase-9活性检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司；PGE2ELISA检测试剂盒购自美国BPB公司；COX-2单克隆抗体购自CellSignalingTechnology公司；辣根酶标记兔抗山羊IgG购自武汉博士德生物科技有限公司。1.2?方法1.2.1?细胞培养HGC27细胞培养于RPMI1640培养液中（含10％小牛血清，100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素），置于37℃，饱和湿度，5％CO2培养箱内培养，取对数生长期细胞用于实验。1.2.2?MTT法检测细胞活力取对数生长期的HGC27细胞，调整细胞浓度为1×104/mL，种于96孔板，每孔200μL，细胞贴壁后分为实验组和对照组：实验组加入EGCG终浓度为10、20、40、80μg/mL的培养液，对照组加入等量的培养液，每组5个复孔，并设调零孔。分别培养24、48、72h，实验结束前4h加入MTT试剂每孔20μL，继续孵育4h，小心吸掉上清，每孔加150μLDMSO，振荡10min，使结晶充分溶解，酶标仪上检测每孔在570nm处的吸光值（A值），细胞活力=（实验组平均A值-调零孔A值）/（对照组平均A值-调零孔A值）×100%。1.2.3?流式细胞仪检测细胞凋亡取对数生长期细胞，以1×106/mL浓度接种于6孔培养板中，贴壁后分为实验组和