岛津LC-20AD液相使用说明

岛津LC-20AD液相使用说明高效液相色谱仪操作规程原理：高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。仪器：名称LC-20AD高效液相色谱仪，分硬件与软件两个部分，硬件：DGU-20A、LC-20AD、SIL-20A、SPD-20A、CTO-20AC五个模块，软件labsolutions工作站。硬件脱气机、泵、自动进样器、托盘、柱温箱每天来1、开机（按钮左下角）2、流动相放好。流动相水相：一般纯化水、超纯水、哇哈哈、条件好屈臣氏，水相每天现配最好。有机相：色谱级试剂上机之前流动相先过滤（0.45μm以下滤膜），然后超声10-20min。托盘上五根管道，ABCD用于放流动相，一般情况四根用两根A-B、A-C，岛津仪器最好A与其他搭配，便于设参数，具体流动相中药依据药典。另一个无标识为自动进样器清洗液，一般是50%甲醇水（反相系统），正相系统则与流动相同，正反相转化①先用流动相过②用异丙醇过滤③用甲醇水。补充：正相色谱法采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。反相色谱法：一般用非极性固定相（如C18、C8)；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。3、拧松黑色排气阀。拧松黑色排气阀，之后点击两次purge，分别为泵单元上按钮与自动进样器上purge按钮，注：泵单元上按钮点击时，流动相管道用的哪些，purge那些，可于工作站上面设置。比如用的A与B，先purgeA，之后purgeB。purge之后一定要拧紧黑色排气阀，非purge下，拧紧，否则不出峰。关于泵单元，一般泵的压力范围0.2MPa,压力故障大部分是由于单向阀造成的，清洗单向阀（90%水+10%的甲醇超声10-20min，纯的异丙醇10-20min，再用90%水+10%的甲醇超声10-20min，实在不行可用5%的稀硝酸替代异丙醇那一步。）泵最大流速10ml/min,40MPa。单向阀上下左右共计四个，下面进，上面出，之间是泵头，再上面是压力传感器，下面有个在线过滤器，黑色即为排气阀，这一次purge，流速8ml/min,3minstop。什么时候purge？（1）滤头离开液面（否则可能有气泡进来）（2）每天分析之前（温差变化，可能有气泡）4、接柱子、上样品流动相-脱气机-低压阀-入口单向阀-泵头-出口单向阀-压力传感器-拧松-purge-拧紧-混合器-自动进样器首先流动相到混合器，混合，混合器在柱温箱左边，柱温箱可降温，温度控制范围最低温度为环境温度减10℃，报警系统其他单元在右下角感应，柱温箱则是浓度报警，可打开，擦拭一下。混合器混合后，到自动进样器。自动进样器有两个托盘，分别为0号架，1号架，一般用1号架，共105孔，孔放1.5ml瓶子，一般液体放一半即可，瓶盖可清洗，垫片是一次性，垫子一面深色与里面，特殊材料，耐酸耐腐蚀。架子往里面推有声音，才是推进去，正常情况下，自动进样器工作状态门要关着（否则仪器显示doorisopen）。接柱子：每根柱子有方向，箭头，即流动相流动方向。每天做完冲柱子（10%甲醇水1ml/min0.5h+纯甲醇1ml/min0.5h为最低要求），主子是耗材，轻拿轻放，长期不用，冲一遍拿下，两头堵住，放于柱箱中。样品通过柱子到流动池，氘灯提供能量，到紫外检测器分离，分离后与工作站显示图谱，废液进废液瓶。氘灯最大使用时间2021h,检测器最大波长700nm。软件（labsolutions工作站）Labsolution-用户名、密码-进入工作站工作站左边仪器、处理工具、管理工具、手册点击仪器-选择项目-岛津-连接仪器-主界面主界面左边是工具栏，中间图谱显示区，右边详细参数。软件一般分三大模块，分别为参数设定、图像采集、后处理。1、参数设定简单设置LC结束时间设定后，点击应用应用所有采集时间模式，结束时间便与LC结束时间同。选择低压梯度，泵浓度，A是默认，只有BCD三个参数设定。A+B+C+D=100%，波长设定（通道）依据药典说明。柱温箱温度就是控制温度，即所需温度。双波长模式开启：仪器-系统配置-检测器-勾上即可。时间程序有梯度洗脱、等度洗脱两个。梯度洗脱以人参为例，根据药典参数设置，设梯度最好带着A，点击梯度曲线，梯度只要有一个从零开始，会默认A泵，A本身设不了，默认所以最好ABCD四根管道由A搭配其他。实例（人参）时间流动相A（%）流动相B（%）设置如下图0-35198135-5519-2981-7155-70297170-10029-4071-60等梯度洗脱设置100控制器stop时间具体可做特殊分析。自动排气改参数改右边的，左边的可能要权限，默认ApurgeA，3min之后，改右边详细B，然后purge。方法设定好之后，文件-另存为-名字然后点击下载下次进主页面-选择项目（没有就设置一个）-人参-下载-文件，后期选择项目里面会有品种名字，针对每个样品。2、图像采集主项目（左边助手栏，助手栏消失的话，点击视图-助手栏）-批处理分析-出现类似于Excel表（每行代表一针，可根据需要添加）其中样品瓶号、架号、方法文件、数据文件、进样体积必设参数项。样品瓶号设定：右键，向下填充。数据文件：命名瓶号东西，例如人参标样01，可根据针数向下填充，进样体积：药典方法中有。然后文件-批处理文件另存为-文件名-保存即可-等柱温箱温度稳定，泵压力、检测器基线稳定后-批处理分析开始。3、后处理报告修饰：登录密码之后界面里处理工具-选择项目-在解析-数据（多的话有筛选）-双击目标图，会出现图数据，针对数据一栏，可加想要数据参数-点击空白处-右击表样式-可添加数据参数，右下角有积分参数可做图片修饰。（编辑-。。。。-视图）报告的生成：数据报告（默认模板）也可新建报告模板，左上角，表头+样品信息+色谱图+峰表。如果表参数在导出报告中不出，则文件-数据报告-峰表向下拉-双击空白-峰表属性-峰表-添加即可。报告的保存：报告-报告文件另存为即可。保存完之后，便有报告模板，便可直接拖入目标图，点击数据出现报告模板，直接拖即可。添加化合物：图-向导-下一步-选中样品-改成化合物名-点击视图-保存做完样品之后：关激活仪器按钮键-关工作站-关机注：氘灯有使用寿命，检测完尽量要关灯，以保持灯的寿命。