微生物期末复习提纲

微生物期末复习提纲1、掌握微生物类群的分类、基本形态球菌：单球菌、双球菌、链球菌等细菌基本形态：杆菌：短杆菌、长杆菌、链状杆菌等螺旋菌：弧菌（螺旋不满一圈，菌体呈弧形或逗号形）、螺菌（螺旋满2—6环，螺旋状）、螺旋体（旋转周数在6环以上，菌体柔软）等2、掌握革兰氏染色的原理和步骤，注意事项。原理：第一步：结晶紫使菌体着上紫色第二步：典和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。G+菌（革兰氏阳式细菌）：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色Gˉ菌（革兰氏阴式细菌）：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后呈红色。步骤：○1.滴加草酸铵结晶紫1-2滴，要求覆盖住涂抹物，初染1min后水洗。○2.滴加革兰氏碘液1-2滴，媒染1min后水洗○3.滴加95%乙醇1-2滴，脱色0.5min后水洗○4.滴加番红染液1-2滴，复染1min后水洗结果:革兰氏阳性菌——紫色、革兰氏阴性菌——红色注意事项：1、革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须严格把握脱色时间。2、选用培养18—24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。3、涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应均匀，4、水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落5、载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂均匀，不宜过厚。3、霉菌菌丝功能营养菌丝：在固体培养基上，伸入基质起到固定和吸收养分的作用。气生菌丝：向空气中生长，一部分分化形成繁殖器官菌体的菌丝在一定条件下或发育到一定阶段，可形成特殊的组织或结构。它们是由很多菌丝汇集在一起而形成的，这些特殊组织或结构，可起到繁殖、传播以及增强对不良环境抵抗力的作用。4、病毒的定义，噬菌体的分类，噬菌体入侵宿主细胞的过程。定义：是一类超显微的非细胞生物,每一种病毒只含有一种核酸;它们只能在活细胞内营专性寄生;在离体条件下,它们以无生命的化学大分子状态存在.噬菌体分类：蝌蚪形、微球形、纤维形。入侵过程：1.吸附：噬菌体通过尾丝吸附在宿主细胞表面得特异性受点上。2.侵入：核酸注入细胞的过程。噬菌体尾部所含酶类物质可使细胞壁产生一些小孔，然后尾鞘收缩，尾髓刺入细胞壁，并将核酸注入细胞内，蛋白质外壳留在细胞外。3.复制：包括核酸的复制和蛋白质合成。噬菌体核酸进入宿主细胞后，会控制宿主细胞的合成系统，然后以噬菌体核酸中的指令合成噬菌体所需的核酸和蛋白质。4.装配：子代噬菌体DNA收缩聚集起来，形成DNA聚缩体，先形成头部外壳包围在DNA聚缩体外，然后形成尾部，再与头部连接起来，装上尾丝，完成。5.释放：子代噬菌体装配完成后，可以分泌溶菌酶使寄主细胞裂解，将子代噬菌体一次性全部释放。5、掌握微生物的最适生长温度（如细菌、霉菌和酵母菌的最适生长温度）1．嗜低温微生物：多数在零度条件下能够生长,一般最适生长温度在10～15℃，最高生长温度为20℃；2．嗜中温微生物：这类微生物的最适生长温度一般在20～45℃之间。3．嗜高温微生物：能在45℃以上生长的微生物均属这一大类。它们常存在于温泉、堆6、掌握微生物生长曲线规律及各个时期的特征。（一）适应期（adaptivephase）适应期的出现，可能是因为在接种到新鲜培养液的细胞中，一时还缺乏分解或催化有关底物的酶，或是缺乏充足的中间代谢物。该时期有几个特点：①生长繁殖的速度几乎等于零。②细胞形态增大；③细胞内RNA尤其是rRNA含量增高，原生质呈嗜碱性。④合成代谢活跃，核糖体、酶类和ATP的合成加快，易产生诱导酶。⑤对外界不良条件反应敏感。（二）对数增长期(logarithmicphase)又称为指数增长期（exponentialphase），是指在生长曲线中，紧接着适应期的一个细胞以几何级数速度分裂的一段时期。对数增长期有以下几个特点：①生长繁殖的速度很快，世代时间均匀一致；②酶系活跃，代谢旺盛。③菌细胞的形态特征均匀一致，最代表种的特征；④此时期内的微生物的生化特性均匀一致，并且典型。（三）稳定期（stationaryphase）在稳定期时，细胞开始贮存糖原、异染颗粒和脂肪等贮藏物；多数芽孢杆菌在这时开始形成芽孢；有的微生物在稳定期时还开始合成抗生素等次生代谢产物。在此时期内主要表现为：（1）细胞内开始积累贮藏物，如肝糖颗粒、异染颗粒、脂肪颗粒等；（2）大多数能形成芽孢的细菌在此时期内形成芽孢；（3）在此时期内，细胞的次级代谢产物大量积累，菌细胞的总数也达到最高峰。如何延长稳定期，促进代谢产物的积累，对稳定期到来的原因进行研究，还促进了连续培养技术的设计和研究。（四）衰亡期（declinephase或deathphase）○1在衰亡期中，个体死亡的速度超过新生的速度，因此，整个群体就呈现出负生长(R为负值)。○2在这个时期内，细胞形态出现不正常，呈多样性，细胞种的特征典型；○3生理生化出现异常现象，例如会产生很多膨大、不规则的退化形态；○4有的微生物因蛋白水解酶活力的增强就发生自溶(autolysis)，芽孢释放往往也发生在这一时期。○5在衰亡期，菌细胞很容易发生变异7、掌握常用培养基的配置方法。（以LB培养基为例）LB培养基的配方如下：操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。3．调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/LHCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。4．分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。5．加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。6．包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。7．灭菌将上述培养基以1.05kg/cm2（15磅/英寸2），121.3℃，20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。8．搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。9．无菌检查将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48小时，以检查灭菌是否彻底。8、掌握高压蒸汽灭菌的原理（灭菌压力，时间，温度等）高压蒸汽灭菌器是根据沸点与压力成正比设计的。在密闭的容器中水的沸点随压力而变化，增加压力就能提高沸点，因而就提高了水和水蒸气的温度。一般培养基何启敏灭菌控制压力1.05kg/cm2，温度121℃，时间15-30min详细见课本240页9、测量微生物常用的单位（微生物，真菌、病毒等）病毒用nm(纳米)或μm(微米)，细菌用μm(微米)，真菌用μm(微米)或㎜(毫米)10、学会分辨真核和原核微生物11、掌握常见真菌（酵母菌、霉菌）最主要的繁殖方式酵母菌属于真核微生物，具有有性繁殖和无性繁殖两种形式，但大多是酵母菌以无性繁殖为主。而酵母菌的无性繁殖包括芽殖、裂殖、芽裂繁殖和产生无性孢子；有性繁殖主要是产生子囊孢子。霉菌的繁殖方式多种多样，除了以一段菌丝可不断伸长分支形成菌丝体外，主要通过产生各种孢子繁殖。12、分离培养各种微生物常用的培养基是什么（如分离细菌、真菌）细菌：牛肉膏蛋白胨培养基酵母菌、霉菌：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（又称PDA培养基）、豆芽汁琼脂、麦芽汁培养基霉菌：察氏培养基放线菌：高氏一号培养基繁殖方式孢子菌丝片段无性孢子有性孢子卵孢子接合孢子孢囊孢子分生孢子原核微生物真核微生物13、掌握常见微生物的菌落特征细菌菌落：看不清楚看课本16-17页酵母菌菌落：菌落大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，颜色单调。常见白色、土黄色、红色放线菌菌落：质地致密、干燥、多皱、小而不蔓延、不易挑起，表面有放射状沟纹霉菌菌落：霉菌的菌落大、疏松、干燥、不透明，有的呈绒毛状或絮状或网状等，菌体可沿培养基表面蔓延生长，由于不同的真菌孢子含有不同的色素，所以菌落可呈现红、黄、绿、青绿、青灰、黑、白、灰等多种颜色。14、掌握一些常见的微生物专业名称的定义（如菌落，生长因子，转基因食品，灭菌，消毒，巴氏消毒、无菌操作，化疗、培养基等）菌落：是细菌在固体培养基上生长发育，形成以母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞的集团。生长因子：通常指那些微生物生长所必需且需要量很小,而且微生物自身不能合成或合成量不足以满足机体生长需要的有机化合物转基因食品：是利用现代分子生物技术，将某些生物的基因转移到其他物种中去，改造生物的遗传物质，使其在形状、营养品质、消费品质等方面向人们所需要的目标转变。灭菌：指用物理或化学的方法，使存在于物体中的所有生活微生物，永久性地丧失其生活力，包括耐热的细菌芽孢。这是一种彻底的杀菌方法。消毒：指利用某些理化方法杀死物体表面或内部所有对人体或动植物有害的病原菌，而对被消毒的对象基本无害的措施。巴氏消毒：用于彻底杀灭啤酒、酒、牛奶、血清蛋白等液体中病原体的方法，也是现世界通用的一种牛奶消毒法。无菌操作：用于防止微生物进入人体组织或其它无菌范围的操作技术。化疗：即化学治疗，是指利用具有高度选择毒力的化学物质对生物体内部被微生物感染的组织或病变细胞进行治疗，以杀死组织内病原微生物或病变细胞，但对机体本身无毒害作用的治疗措施。培养基：是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物营养基质。15、掌握常见霉菌的结构（如根霉和青霉，要求会画图，并能说出每部分结构的名称）16、掌握微生物常用接种的方法，举例详细说明。○1.斜面接种：图３－４斜面接种时的无菌操作(1)接种灭菌(2)开启棉塞(3)管口灭菌(4)挑起菌苔(5)接种(6)塞好棉塞○2.平面接种：是指在培养基平皿上点接、划线或涂布接种a：点接：用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体，点接到平皿的不同位置上。b：划线接种：用接种环挑取少量菌体，在平皿上划线。c：涂布接种：用吸管吸取菌液注入平皿，然后用玻璃涂棒在平皿表面均匀涂布。○3.液体接种○4.穿刺接种17、掌握培养基的分类。物理分类：液体培养基、固体培养基、半固体培养基个人整理，如有遗漏，请多包涵！按微生物分类