DB34T 1366-2011 配合饲料中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林的测定高效液相色谱法

ICS65.120B46DB34安徽省地方标准DB34/T1366—2011配合饲料中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林的测定—高效液相色谱法DeterminationofFurazolidone,FuraltaandFuracilinumresiduesinformulafeedbyhighperformanceliquidchromatography2011-03-16发布2011-04-16实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1366—2011I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：陈文帮、丁作坤、陶小平、吴昊、许世富、汤春莲、李珲。DB34/T1366—20111配合饲料中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林的测定—高效液相色谱法1范围本标准规定了配合饲料中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林检验的制样和高效液相色谱法（HPLC）测定方法。本标准适用于配合饲料中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林的定量检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3试样制备按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。4原理试样中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林经甲酸和丙酮提取后，用混合阳离子固相萃取柱净化，蒸干后用流动相溶解，HPLC法于365nm进行测定，外标法定量。5试剂和材料5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。5.2呋喃唑酮标准品：纯度≥99.0％。5.3呋喃它酮标准品：纯度≥99.0％。5.4呋喃西林标准品：纯度≥99.0％。5.5甲醇，色谱纯。5.6乙腈，色谱纯。5.7丙酮。5.8乙酸。5.90.2％甲酸水溶液：取甲酸0.2mL，加水稀释至100mL，即得。5.100.1mol/L盐酸溶液：取盐酸0.9mL，加水稀释至100mL，即得。5.1120％的甲醇水溶液：取甲醇20mL，加水稀释至100mL，即得。DB34/T1366—201125.125％的氨水甲醇溶液：取氨水5mL，加水稀释至100mL，即得。5.13提取液：取甲酸、丙酮等体积混合，即得。5.14固相萃取柱（SPE）：混合阳离子柱，60mg/3mL。5.15呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林标准储备液（呋喃唑酮、呋喃西林0.5mg/mL,呋喃它酮1.0mg/mL）：准确称取呋喃唑酮、呋喃西林对照品50mg，呋喃它酮对照品100mg，用甲醇溶解并稀释至100mL，混匀，置-18℃避光保存，存放时间不超过3个月。5.16呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林标准工作液：准确移取呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃它酮标准标准储备液（5.14），流动相配制标准系列溶液，呋喃唑酮、呋喃西林标准工作液为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μg／mL，呋喃它酮标准工作液为2.0、4.0、10.0、20.0、40.0μg／mL。6仪器和设备6.1高效液相色谱仪，配置二极管阵列检测器或紫外检测器。6.2离心机：8000r/min。6.3振荡器。6.4涡旋混合器。6.5分析天平：感量0.0001g，0.001g。6.6氮吹仪。6.7离心管：50mL，10mL。6.8固相萃取装备。7测定步骤7.1样品处理准确称取（2±0.05g）粉碎后的饲料样品于50mL离心管中，加入5mL乙腈和提取液（5.9）15mL，涡旋2min，振荡10min，8000rpm离心5min，取上清液1mL，50℃水浴氮气吹干，加入0.2％甲酸水溶液（5.8）1mL，混匀，备用。7.2试样净化取固相萃取柱，分别用3mL甲醇和3mL水活化SPE小柱，备用液全部过SPE柱，依次用0.1mol/mL的盐酸溶液(5.9)1mL和20％的甲醇水溶液(5.10)1mL淋洗，抽干。用5％氨水甲醇溶液（5.11）洗脱，收集洗脱液，50℃水浴蒸干，加1mL流动相溶解，经0.45μm滤膜过滤，供HPLC分析。7.3色谱条件色谱柱：C18(4.6×250mm，5μm)，或相当者。柱温：30℃。进样体积：10μL。流速：1.0mL／min。检测波长：365nm。流动相：乙腈-0.2％甲酸溶液（28：72）。7.4上机测定DB34/T1366—20113取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8结果判定和表述按照下式计算试样中各种药物的含量：1000mAs1000VCsAX×××××=................................(1)式中：X——试样中各种药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As——标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V——定容体积，单位为毫升（mL）；Cs——标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m——试样质量，单位为克（g）。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。8.1灵敏度本方法呋喃唑酮、呋喃西林检出限均为1mg/kg，呋喃它酮检出限为2mg/kg。8.2准确度本方法在添加浓度为2mg/kg（呋喃它酮为4mg/kg）的回收率均为60％～110％。8.3精密度本方法的批内变异系数CV≤10％，批间变异系数CV≤15％。DB34/T1366—20114AA附录A（资料性附录）高效液相色谱图A.1空白饲料样品溶液色谱图图A.1空白饲料样品溶液色谱图A.2标准物质溶液色谱图图A.2标准物质溶液色谱图DB34/T1366—20115A.3空白饲料中添加标准物质溶液色谱图图A.3空白饲料中添加标准物质溶液色谱图注：1.呋喃唑酮；2.呋喃它酮；3.呋喃西林_________________________________