设计实验-茶皂素的提取和测定

设计性实验探究茶皂素的提取和测定实验小组成员：袁国明王蓉一、实验目的1、掌握水提---醇萃法提取茶皂素的原理、方法和一般步骤。2、探究不同液料比对水提---醇萃法提取茶皂素的影响。3、探究提取茶皂素的最佳溶剂热水、含水乙醇、正丁醇及冰醋酸。4、掌握用紫外分光光度法测定茶饼中茶皂素的含量。二、实验原理茶皂素难溶于冷水、无水甲醇、无水乙醇，不溶于乙醚、丙酮、苯、石油醚等有机溶剂，稍溶于温水，易溶于热水、含水甲醇、含水乙醇、正丁醇及冰醋酸，根据以上特性，本次实验来探究提取茶皂素的最佳溶剂。水提---醇萃法又是在以上基础上，根据茶皂素易溶于热水和95％的乙醇，不溶于冷水性质，用热水浸提茶饼，然后于浸提液中加入絮凝剂Al2(SO4)3，沉降除杂冷却后，再用95％的乙醇转萃提纯一种方法。茶皂素与香草醛在浓硫酸作用下表现呈色反应，茶皂素的含量和吸光度值成线性关系，本文利用此性质对茶皂素的分析方法进行研究。三、实验材料1、实验试剂：95％乙醇；Al2(SO4)3；活性炭；NaOH；蒸馏水；香草醛；硫酸；含水乙醇、正丁醇及冰醋酸2、实验材料：油茶饼粕3、实验仪器：电子天平、高速万能粉碎机、电热恒温水浴锅、蒸发器、电热恒温鼓风干燥箱、紫外可见分光光度计、三角锥形瓶、纱布、抽滤瓶、滤纸、分液漏斗、烧杯、表面容器、容量瓶、具塞刻度试管四、实验步骤1、茶皂素的提取操作(1)油茶饼粕的处理取一定量的油茶饼粕放入高速万能粉碎机中粉碎成油茶饼粕粉末，但不可过细（不利于下一步的过滤），一般粉碎粒度在l～3mm为宜。(2)探究提取茶皂素的最佳溶剂称取1g的油茶饼粕粉末4份分别加入到三角锥形瓶中，分别加入热水、含水乙醇、正丁醇及冰醋酸按1:7比例，标记，置入温度为90℃的恒温水浴锅中处理1.5h，得到茶皂素浸取液。浸取液要趁热用纱布过滤。(2)探究一定固液比下恒温热水浴浸提称取1g的油茶饼粕粉末3份分别加入到三角锥形瓶中，分别加入蒸馏水和固体的比例为1:6、1:7、1:8，置入温度为90℃的恒温水浴锅中处理1.5h，得到茶皂素浸取液。浸取液要趁热用纱布过滤（茶皂素难溶于冷水，放置冷却后将导致产率下降），将滤渣继续加蒸馏水再次进行恒温水浴浸提，然后趁热用纱布过滤，反复操作三次，将得到的滤液合并。(3)加絮凝剂（Al2(SO4)3）除杂絮凝剂可以将浸提液中鞣质、蛋白质、蜡质等不稳定杂质除去，而对于茶皂素的溶解则不会产生影响。(4)抽滤（抽滤可以将上述的杂质与茶皂素滤液迅速分离）。(5)减压恒温蒸发浓缩将抽滤除杂后的滤液置于RE52-99旋转蒸发其中进行减压恒温蒸发浓缩至稠状，温度80～90℃（减压恒温蒸发,既可以使滤液快速浓缩，又使得茶皂素不会遭到高温破坏）。(6)乙醇转萃将上述稠状液体置于分液漏斗中，加适量的95％乙醇（PH=5）萃取三次，取上层萃取液，合并三次的萃取液。（茶皂素在95％乙醇中的溶解度很高，而在冷水中的溶解度较低，所以茶皂素转入乙醇中。而其它杂质在乙醇中溶解度较低，就留在下层液中）。(7)脱色将转萃后的液体置于烧杯中，加入少量活性炭进行脱色处理。为了增强脱色效果，可将烧杯中液体加热煮沸，并不断搅拌两三分钟，然后用过滤的方法除去活性炭。(8)蒸发乙醇将脱色后的滤液置于RE52-99旋转蒸发其中进行减压恒温蒸发乙醇，温度55℃，蒸发至稠状时停止。(9)恒温干燥将上述稠状物置于表面容器中，放入电热恒温鼓风干燥箱进行干燥，温度50～60℃。(10)称重，得到粗茶皂素2、茶皂素含量的测定方法（1）标准溶液的配置称取0.1g茶皂素标准品，用95％乙醇溶解后置入100mL容量瓶，并用95％乙醇定容。分别吸取0.9，1.8，2.7，3.6，4.5mL于10mL容量瓶中，用蒸馏水定容，则得含茶皂素0.09、0.18、0.27、0.36、0.45mg/mL五种不同浓度的标准溶液。（2）标准曲线的制作在最大吸收波长545nm处测定不同浓度的茶皂素标准液的吸光度，以茶皂素含量为横坐标，吸光度为纵坐标，作标准曲线3、茶皂素含量的测定准确称取1g茶皂素粗产品，用95％乙醇完全溶解，定容至100ml,得1mg/ml的茶皂素粗产品溶液。吸取供试液5mL，置50mL容量瓶中，加香草醛一硫酸显色，充分混匀，用95％乙醇定容，以定容空白液作对比，于545nm处测定吸光度(A)。根据茶皂素标准工作曲线，计算出茶皂素含量。五、结果分析和计算1、粗产品的含量2、茶皂素含量的百分含量计算3、提取率的计算茶皂素的提取率=提取含量/茶皂素的实际含量4、结果析用水提—醇萃法提取茶皂素的浸提温度为90℃，浸提时间为1.5h，液料比为，此时茶皂素的提取率将达到%。