SN T 0711-2011 进出口茶叶中二硫代氨基甲酸酯(盐)类农药残留量的检测方法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜０７１１—２０１１代替ＳＮ０７１１—１９９７出口茶叶中二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药残留量的检测方法液相色谱质谱／质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犱犻狋犺犻狅犮犪狉犫犪犿犪狋犲（狊犪犾狋）狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀狋犲犪狆狉狅犱狌犮狋狊犳狅狉犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ０７１１—１９９７《出口茶叶中代森锌类农药总残留量检验方法》。本标准与ＳＮ０７１１—１９９７相比主要修改如下：———修改了标准名称；———删除了“抽样”部分；———修改了样品的前处理方法；———修改了仪器测定方法；———增加了待测二硫代氨基甲酸酯种类；———修改了标准结构；———降低了方法测定低限。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国河南出入境检验检疫局起草。本标准主要起草人：杨冀州、祝伟霞、刘亚风、郭俊峰、魏蔚、王素方、孙武勇。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：———ＳＮ０７１１—１９９７。Ⅰ犛犖／犜０７１１—２０１１出口茶叶中二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药残留量的检测方法液相色谱质谱／质谱法１　范围本标准规定了出口茶叶中二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药残留量检测的液相色谱质谱／质谱确证方法。本标准适用于出口绿茶、乌龙、红茶中乙撑双二硫代氨基甲酸盐（包括代森锌、代森锰、代森锌锰、代森钠、代森联）；甲基乙撑双二硫代氨基甲酸盐（包括甲基代森锌）；二甲基二硫代氨基甲酸酯（盐）类（包括福美双、福美锌、福美铁）农药残留量的定性检测。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　方法提要茶叶中乙撑双二硫代氨基甲酸盐类和甲基乙撑双二硫代氨基甲酸盐类农药残留在碱性乙二胺四乙酸二钠溶液中转化为水溶性钠盐，加入离子对试剂后，用碘化甲烷进行甲酯化反应，ＨＬＢ固相萃取柱净化，甲醇洗脱，洗脱液浓缩至干后，乙腈０．１％甲酸溶液溶解残渣，液相色谱质谱／质谱测定，外标法定量。茶叶样品中残留的二甲基二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药用乙腈提取，加入碘化甲烷甲酯化试剂生成甲酯化衍生物，采用无水硫酸镁和石墨化碳极性填料分散固相萃取净化，样液浓缩至干后，乙腈０．１％甲酸溶液溶解，液相色谱质谱／质谱测定，外标法定量。４　试剂与材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定一级水。４．１　乙腈：色谱级。４．２　甲醇：色谱级。４．３　甲酸（９６％）：质量分数，色谱级。４．４　盐酸（３６．５％）：质量分数。４．５　碘甲烷。４．６　乙二胺四乙酸二钠（ＥＤＴＡＮａ２）。４．７　氢氧化钠（ＮａＯＨ）。４．８　Ｌ半胱氨酸。１犛犖／犜０７１１—２０１１４．９　四丁基硫酸氢铵。４．１０　无水硫酸镁：使用前于５５０℃灼烧４ｈ，置干燥器中备用。４．１１　石墨化碳。４．１２　氢氧化钠溶液（１ｍｏｌ／Ｌ）：称取４０ｇ氢氧化钠（４．７），用１０００ｍＬ水溶解后混匀。４．１３　碱性提取溶液（０．２ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡＮａ２）：称取７４．４ｇＥＤＴＡ（４．６），用６００ｍＬ～７００ｍＬ水溶解，用１ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液调ｐＨ９．６～１０，用水定容至１０００ｍＬ。４．１４　四丁基硫酸氢铵（０．４１ｍｏｌ／Ｌ）：称取１３６ｇ四丁基硫酸氢铵（４．９），用水定容至１０００ｍＬ。４．１５　盐酸溶液（２ｍｏｌ／Ｌ）：量取１８０ｍＬ盐酸，缓慢加至６００ｍＬ～７００ｍＬ水中，混匀后用水定容至１０００ｍＬ。４．１６　０．１％甲酸：１ｍＬ甲酸用水定容至１０００ｍＬ。４．１７　乙腈＋０．１％甲酸（１＋１，体积比）：量取５０ｍＬ乙腈与５０ｍＬ０．１％甲酸（４．１６）混匀。４．１８　二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药标准品：代森锌、代森锰、代森锌锰、代森钠、福美双、福美锌、福美铁、甲基代森锌、代森联，化合物信息参见表Ａ．１。４．１９　标准储备溶液：准确称取适量的代森锌、代森锰、代森锌锰、福美双、福美锌、福美铁、甲基代森锌、代森联等二硫代氨基甲酸盐类农药标准品（４．１８），用乙腈配制成质量浓度为１００μｇ／ｍＬ悬浊液；准确称取适量的代森钠、福美双标准品，用乙腈配制成１００μｇ／ｍＬ的标准储备液。该溶液于－１８℃以下避光保存，可稳定３个月，使用前用力振摇使其均匀。４．２０　中间标准溶液：准确移取１ｍＬ标准储备溶液（４．１９）于１０ｍＬ容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为１０μｇ／ｍＬ的中间标准溶液，２℃～４℃冷藏避光保存，可稳定１个月。４．２１　工作标准溶液：分别取适量的代森锌、代森锰、代森锌锰、甲基代森锌、福美双、福美锌、福美铁、代森联标准溶液，用乙腈配制成质量浓度为１μｇ／ｍＬ单个标准溶液，该溶液于２℃～４℃冷藏避光保存，可稳定１个月。４．２２　ＨＬＢ固相萃取柱：３ｍＬ，６０ｍｇ或相当者，使用前依次用３ｍＬ甲醇和３ｍＬ水活化。４．２３　微孔滤膜：０．２２μｍ，有机相。５　仪器和设备５．１　液相色谱质谱／质谱仪，配电喷雾离子源。５．２　电子天平：感量为０．１ｍｇ，０．０１ｇ。５．３　超声波提取仪。５．４　涡旋混匀器。５．５　离心机。５．６　ｐＨ计：精度±０．０２。５．７　旋转蒸发器。５．８　氮吹仪。５．９　粉碎机。５．１０　聚四氟乙烯离心管：５０ｍＬ。５．１１　鸡心瓶：１００ｍＬ。６　试样的制备与保存取样品约５００ｇ，用粉碎机粉碎，并使其全部通过２０目的样品筛，混合均匀，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于２℃～４℃避光保存。２犛犖／犜０７１１—２０１１取样、制样及保存过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。７　测定步骤７．１　乙撑双二硫代氨基甲酸盐和甲基乙撑双二硫代氨基甲酸盐类农药的测定７．１．１　样品溶液的制备称取均匀的试样约１．０ｇ（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ具塞聚四氟乙烯离心管中，加入０．１ｇＬ半胱氨酸，加入２０ｍＬＥＤＴＡＮａ２碱性提取溶液（４．１３），每５ｍｉｎ涡旋混匀２ｍｉｎ，共涡旋混匀３次。加入２ｍＬ四丁基硫酸氢铵溶液（４．１４），用２ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液调节ｐＨ７．５～７．７（约０．８ｍＬ～１．０ｍＬ），加１００μＬ碘甲烷（４．５）于样液中，放置３０ｍｉｎ后，于４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，转移上清液于另一５０ｍＬ聚四氟乙烯离心管中，待净化。将上述步骤制得样液全部转移至已活化过的ＨＬＢ固相萃取柱中（４．２２），以１ｍＬ／ｍｉｎ的流速通过柱体，待样液全部流过后，用３ｍＬ水淋洗固相萃取柱，弃去全部流出液，抽干固相萃取柱５ｍｉｎ，用６ｍＬ甲醇洗脱被测物，洗脱液于４５℃水浴中氮吹浓缩至干，用１ｍＬ乙腈０．１％甲酸溶液（４．１７）溶解残渣，经０．２２μｍ滤膜（４．２３）过滤后，进行液相色谱质谱／质谱测定。７．１．２　标准基质溶液的制备称取１．０ｇ阴性试样（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ具塞聚四氟乙烯离心管中，加入０．１ｇＬ半胱氨酸，加入２０ｍＬＥＤＴＡＮａ２碱性提取溶液（４．１３），按照标准曲线最终定容浓度分别加入中间标准溶液（４．２０）或工作标准溶液（４．２１），静置２０ｍｉｎ后进行测定，其他操作步骤同７．１．１。７．２　二甲基二硫代氨基甲酸酯（盐）的测定７．２．１　样品溶液的制备称取均匀的试样约２．０ｇ（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ具塞聚四氟乙烯离心管中，加入２０ｍＬ乙腈（４．１）和１００μＬ碘甲烷（４．５），超声提取１０ｍｉｎ，涡旋混匀３ｍｉｎ，并于室温下静置１７ｍｉｎ，于４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，转移上清液于１．０ｇ无水硫酸镁（４．１０）、０．２ｇ石墨化碳（４．１１）中，涡旋混匀３ｍｉｎ，于４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，移取５ｍＬ上清液于４５℃氮吹浓缩至干，用１ｍＬ乙腈０．１％甲酸溶液（４．１７）溶解残渣，经滤膜过滤后，进行液相色谱质谱／质谱测定。７．２．２　基质标准溶液的制备称取２．０ｇ阴性试样（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ具塞聚四氟乙烯离心管中，按照标准曲线最终定容浓度分别加入中间标准溶液（４．２０）或工作标准溶液（４．２１），静置２０ｍｉｎ后进行测定，其他操作步骤同７．２．１。７．３　测定７．３．１　液相色谱条件７．３．１．１　色谱柱：ＳｕｎｆｉｒｅＣ１８，１５０ｍｍ×２．１ｍｍ（内径），５μｍ或相当者。７．３．１．２　流动相：乙腈＋０．１％甲酸（５＋５，体积比）（梯度洗脱条件见表１）。７．３．１．３　流速：０．３ｍＬ／ｍｉｎ。７．３．１．４　柱温：３０℃。７．３．１．５　进样量：１０μＬ。３犛犖／犜０７１１—２０１１表１　梯度洗脱程序时间ｍｉｎ乙腈％０．１％甲酸％０４０６０２７５２５６７５２５６．５４０６０１０．５４０６０７．３．２　质谱条件７．３．２．１　离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ＥＳＩ＋）。７．３．２．２　质谱扫描方式：多反应监测（ＭＲＭ）。７．３．２．３　其他质谱参考条件参见附录Ｂ。７．３．３　定量测定根据样液中被测物残留量的情况，选定峰面积相近的基质工作溶液。基质工作溶液和样液中二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药残留的响应值均应在仪器的检测线性范围内。对基质工作溶液和样液等体积参插进样测定。标准溶液的液相色谱质谱／质谱多反应监测（ＭＲＭ）色谱图参见图Ｃ．１。７．３．４　定性测定按照上述仪器条件测定样品和标准工作溶液，样品中目标物质的保留时间与标准溶液中目标物质的保留时间偏差在±２．５％范围内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的基质标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表２的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表２　定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０８　空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。９　结果计算与表述用色谱数据处理仪或按式（１）计算，计算结果应扣除空白值。犡犻＝犃犻×犮ｓ×犞犃ｓ×犿×犉…………………………（１）　　式中：犡犻———试样中二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药含量（以ＣＳ２计），单位为微克每千克（μｇ／ｋｇ）；４犛犖／犜０７１１—２０１１犃犻———样液中二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药的峰面积；犮ｓ———标准溶液中二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药的浓度（以ＣＳ２计），单位为微克每升（μｇ／Ｌ）；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犃ｓ———标准溶液中二硫代氨基甲酸酯（盐）类农药的峰面积；犿———最终样液所代表的试样质量，单位为克（ｇ）。注：测得值乘相当系数即换算为样品中ＣＳ２含量，对于乙撑双二硫代氨基甲酸盐、二甲基二硫代氨基甲酸酯（盐）类相关系数犉为０．６３，（包括代森锌、代森锰、代森锌锰、代森钠、代森联）：甲基乙撑双二硫代氨基甲酸盐相关系数犉为０．６０（包括甲基代森锌）。１０　测定低限与回收率１０．１　测定低限代森锌、代森锰、代森锌锰、代森钠、代森联方法测定低限为１０μｇ／ｋｇ，福美双、福美锌、福美铁测定低限为１０μｇ／ｋｇ，甲基代森锌测定低限为２０μｇ／ｋｇ。１０．２　回收率１０．２．１　绿茶在０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ时，代森锌回收率为８１．６％～１０１．３％；在０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ时，代森锰回收率为７８．３％～９７．２％；在０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ时，代森锌锰回收率为８５．４％～９８．７％；在０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ时，代森钠回收率为９１．７％～９２．４％；在０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ时，代森联回收率为９１．７％～９２．４％；在０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ时，甲基代森锌回收率为７２．３％～９１．２％；在０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ