SNT 2533-2010 进出口化妆品中糖皮质激素类与孕激素类检测方法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２５３３—２０１０进出口化妆品中糖皮质激素类与孕激素类检测方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犮狅狉狋犻犮狅狊狋犲狉狅犻犱狊犪狀犱狆狉狅犵犲狊狋犲狉狅狀犲狊犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布食品伙伴网书书书前　　言　　本标准的附录Ａ、附录Ｂ、附录Ｃ和附录Ｄ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国河南出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：杨冀州、袁萍、刘亚风、祝伟霞、郭俊峰、魏蔚。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２５３３—２０１０食品伙伴网进出口化妆品中糖皮质激素类与孕激素类检测方法１　范围本标准规定了化妆品中曲安西龙、泼尼松龙、氢化可的松、甲泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、氟米松、曲安奈德、氟氢松、醋酸氢化可的松、醋酸氟氢可的松、醋酸泼尼松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、哈西奈德、１７α羟基醋酸去氧皮质酮、丙酸倍氯米松等１７种糖皮质激素类药物和炔诺酮、孕酮、甲烯雌醇醋酸酯、甲炔诺酮、地屈孕酮、醋酸羟孕酮、醋酸甲地孕酮、米非司酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、己酸羟孕酮等１１种孕激素类药物含量检测的液相色谱质谱／质谱（ＬＣＭＳ／ＭＳ）和液相色谱法（ＬＣ）检测方法。本标准适用于膏状、乳状、水状化妆品中１７种糖皮质激素和１１种孕激素含量检测的液相色谱方法和液相色谱质谱／质谱确证方法。本标准的液相色谱质谱／质谱法为仲裁法。２　规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方面研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和实验方法３　试样的制备与保存混匀所取样品，均分成两份作为试样，分别装入洁净容器，密封并做好标识。方法一　液相色谱质谱／质谱法４　方法提要化妆品中糖皮质激素、孕激素采用乙腈超声提取，吹干浓缩后经固相萃取柱净化，液相色谱质谱／质谱检测和确证，外标法定量。５　试剂和材料除特殊注明外，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。５．１　甲醇：高效液相色谱级。５．２　乙腈：高效液相色谱级。５．３　乙酸胺：高效液相色谱级。５．４　甲醇水（３０＋７０，体积比）溶液：量取３０ｍＬ甲醇与７０ｍＬ水混合。５．５　１０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸胺溶液：称取０．７７ｇ乙酸胺（５．３），用水溶解并定容至１０００ｍＬ。５．６　乙腈１０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸胺溶液（７０＋３０，体积比）：量取７０ｍＬ乙腈与３０ｍＬ１０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸胺溶液（５．５）混合。５．７　标准品：标准品名称及ＣＡＳ号参见附录Ａ中表Ａ．１，纯度大于等于９９％。１犛犖／犜２５３３—２０１０食品伙伴网５．８　标准储备溶液：分别称取糖皮质激素、孕激素类标准品各０．０１０ｇ（５．７），用甲醇溶解并定容至１００ｍＬ，浓度相当于１００μｇ／ｍＬ，该标准储备液贮存于－１８℃以下，可稳定３个月。５．９　标准中间溶液：准确移取１．０ｍＬ标准贮备溶液（５．８），用甲醇定容至１００ｍＬ，浓度相当于１．０μｇ／ｍＬ，该溶液贮存于０℃～４℃，可稳定１个月。５．１０　标准工作溶液：根据需要用本标准规定操作方法制得空白样品提取液，将标准中间溶液（５．９）稀释成适当浓度的标准工作溶液，该工作溶液应使用前配制。５．１１　固相萃取柱：ＯａｓｉｓＨＬＢ（６０ｍｇ／３ｍＬ，）或相当者。使用前依次用３ｍＬ甲醇、３ｍＬ水预处理，保持柱体湿润。５．１２　０．２２μｍ微孔滤膜：有机相。６　仪器和设备６．１　液相色谱质谱／质谱仪：配电喷雾离子源（ＥＳＩ）。６．２　分析天平：感量０．１ｍｇ，０．０１ｇ。６．３　超声波提取仪：４０℃。６．４　冰箱：－１８℃。６．５　旋涡混匀器。６．６　温控离心机：４０００ｒ／ｍｉｎ，－１０℃。６．７　固相萃取装置。６．８　氮气浓缩仪。６．９　聚丙烯离心管：２０ｍＬ，１０ｍＬ。７　测定步骤７．１　样品提取７．１．１　膏状、乳状样品准确称取１ｇ均匀试样（精确到０．０１ｇ）于２０ｍＬ聚丙烯离心管中，加入１０ｍＬ乙腈，混匀后４０℃超声提取２０ｍｉｎ，每隔５ｍｉｎ取出晃动一次，超声后涡旋混匀３ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，将上清液转移至１０ｍＬ聚丙烯离心管中，置于－１８℃冰箱中冷冻３０ｍｉｎ，取出后立即于－１０℃４０００ｒ／ｍｉｎ离心２ｍｉｎ，上清液于５０℃水浴中氮吹浓缩至干，用３ｍＬ甲醇水（５．４）溶解残渣，待净化。７．１．２　水状样品准确称取１ｇ均匀试样（精确到０．０１ｇ）于２０ｍＬ聚丙烯离心管中，加入１０ｍＬ乙腈，混匀后４０℃超声提取２０ｍｉｎ，每隔５ｍｉｎ取出晃动一次，超声后涡旋混匀３ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，将上清液转移至１０ｍＬ聚丙烯离心管中，５０℃水浴中氮吹浓缩至干，用３ｍＬ甲醇水（５．４）溶解残渣，待净化。７．２　净化将样液转移至已活化过的固相萃取柱中（５．１１），控制样液流速约１ｍＬ／ｍｉｎ，待样液全部流出后，依次用３ｍＬ水、３ｍＬ甲醇水（５．４）淋洗，弃去全部流出液，１５ｍｍＨｇ以下减压抽干５ｍｉｎ，使柱体保持干涸，用１０ｍＬ甲醇洗脱，洗脱液于５０℃水浴中氮吹浓缩至干，用１．０ｍＬ乙腈乙酸胺混合溶液（５．６）溶解残渣，经０．２２μｍ滤膜过滤，供液相色谱质谱／质谱测定。７．３　测定７．３．１　液相色谱条件７．３．１．１　色谱柱：Ｃ１８，１５０ｍｍ×２．１ｍｍ（内径），５μｍ，或相当者；７．３．１．２　柱温：２５℃；７．３．１．３　进样量：１０μＬ；７．３．１．４　流动相：乙腈１０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸胺溶液，梯度洗脱程序见表１。２犛犖／犜２５３３—２０１０食品伙伴网表１　液相色谱质谱／质谱法梯度洗脱程序时间／ｍｉｎ流速／（ｍＬ／ｍｉｎ）乙腈／％１０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸胺／％００．３２０８０８０．３５０５０１５０．３５０５０１８．５０．３６０４０２００．３６０４０２１０．３９０１０２５０．３９０１０２５．５０．３２０８０３１０．３２０８０７．３．２　质谱条件７．３．２．１　离子化模式：电喷雾正离子模式（ＥＳＩ＋）；７．３．２．２　质谱扫描方式：多反应监测（ＭＲＭ）；７．３．２．３　其他质谱参考条件参见附录Ｂ。７．３．３　液相色谱质谱／质谱测定７．３．３．１　定量测定根据样液中糖皮质激素、孕激素浓度大小，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中糖皮质激素、孕激素响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定，在上述色谱条件下，糖皮质激素、孕激素参考保留时间参见附录Ａ中表Ａ．１。标准溶液的多反应监测色谱图参见附录Ｃ中图Ｃ．１。７．３．３．２　定性测定按照上述仪器条件测定样品和标准工作溶液，如果样品与标准工作液中待测物质色谱峰相对保留时间在±２．５％范围内；糖皮质激素、孕激素的质谱两个定性离子必须同时出现，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其允许误差不超过表２规定的范围。表２　相对离子丰度最大容许误差相对丰度（基峰）／％相对离子丰度最大容许误差／％＞５０±２０大于２０至小于等于５０±２５大于１０至小于等于２０±３０小于等于１０±５０８　空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。９　结果计算用数据处理软件中的外标法，或按照式（１）计算试样品中糖皮质激素、孕激素类药物含量。犡＝犃×犮ｓ×犞犃ｓ×犿…………………………（１）３犛犖／犜２５３３—２０１０食品伙伴网　　式中：犡———试样中糖皮质激素、孕激素类药物的含量，单位为微克每千克（μｇ／ｋｇ）；犃———样液中糖皮质激素、孕激素类药物的色谱峰面积；犮ｓ———标准工作液中糖皮质激素、孕激素类药物的浓度，单位为纳微克每升（μｇ／Ｌ）；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犃ｓ———标准工作液中糖皮质激素、孕激素类药物的色谱峰面积；犿———最终样液所代表的试样量，单位为克（ｇ）。１０　测定低限和回收率１０．１　测定低限本标准中１７种糖皮质激素与１１种孕激素的测定低限均为１０μｇ／ｋｇ。１０．２　回收率本标准的添加浓度范围与回收率数据参见附录Ｄ中表Ｄ．１。方法二　液相色谱法１１　方法提要化妆品中糖皮质激素、孕激素用乙腈超声提取，吹干浓缩后经固相萃取柱净化，用配有二极管阵列检测器或双波长紫外检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。１２　试剂和材料除特殊注明外，所用试剂和材料均同５．１～５．２，５．７～５．９，５．１１～５．１２。１２．１　乙腈水（７＋３，体积比）：量取７０ｍＬ乙腈与３０ｍＬ水混合。１２．２　标准工作溶液：根据需要用乙腈水（１２．１）将标准中间溶液（５．９）稀释成适当浓度的标准工作溶液，该溶液使用前配制。１３　仪器和设备除特殊注明外，所用试剂和材料均同６．２～６．８。液相色谱仪：配二极管阵列检测器或双波长紫外检测器。１４　测定步骤１４．１　样品提取同７．１。１４．２　净化样品残渣用１．０ｍＬ乙腈水（１２．１）溶解，经０．２２μｍ滤膜过滤后，供液相色谱测定。其他同７．２。１４．３　测定１４．３．１　液相色谱条件１４．３．１．１　色谱柱：Ｃ１８，１５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径），５μｍ或相当者。１４．３．１．２　柱温：３５℃。１４．３．１．３　进样量：２０μＬ。１４．３．１．４　检测波长：２４０ｎｍ和２９０ｎｍ。１４．３．１．５　流动相：乙腈水，梯度洗脱程序见表３。４犛犖／犜２５３３—２０１０食品伙伴网表３　液相色谱法梯度洗脱程序时间／ｍｉｎ流速／（ｍＬ／ｍｉｎ）乙腈／％水／％０１．０２０８０５１．０２０８０１３１．０３０７０２４１．０３０７０２５１．０４０６０３０１．０４０６０３５１．０６０４０４０１．０６０４０４１１．０９０１０４５１．０９０１０４６１．０２０８０５０１．０２０８０１４．３．２　液相色谱测定根据样液中糖皮质激素、孕激素浓度大小，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中糖皮质激素、孕激素响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定，在上述色谱条件下，糖皮质激素、孕激素参考保留时间参见附录Ａ中表Ａ．１。标准溶液的色谱图参见附录Ｃ中图Ｃ．２。１５　空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。１６　结果计算和表述同第９章。１７　测定低限、回收率１７．１　测定低限本方法测定低限为１００μｇ／ｋｇ。１７．２　回收率回收率实验数据参见附录Ｄ中表Ｄ．２。５犛犖／犜２５３３—２０１０食品伙伴网附　录　犃（资料性附录）检测化合物和保留时间表犃．１　检测化合物及参考保留时间类型化合物英文名称ＣＡＳ号ＨＰＬＣ法参考保留时间／ｍｉｎＨＰＬＣＭＳ／ＭＳ法参考保留时间／ｍｉｎ糖皮质激素曲安西龙ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ１２４９４７８．９７．１泼尼松龙ｐｒｅｄｉｓｏｌｏｎｅ５０２４８１３．６８．７氢化可的松ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ５０２３７１３．９８．８甲泼尼松龙ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ８３４３２１７．２９．９倍他米松ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ３７８４４９１８．２１０．４地塞米松ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ５００２２１８．６１０．７氟米松ｆｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ２１３５１７３１９．０１０．７曲安奈德ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅａｃｅｔｏｎｉｄｅ７６２５５２１．８１１．１氟氢松ｆｌｕｏｃｉｎｏｌｏｎｅａｃｅｔｏｎｉｄ