SNT 2432-2010 进出口食品中哒螨灵残留量的检测方法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４３２—２０１０进出口食品中哒螨灵残留量的检测方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狆狔狉犻犱犪犫犲狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋２０１００１１０发布２０１００７１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书中华人民共和国出入境检验检疫行　业　标　准进出口食品中哒螨灵残留量的检测方法ＳＮ／Ｔ２４３２—２０１０中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６　６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６　印张１．５　字数３６千字２０１０年４月第一版　２０１０年４月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２０７４０　定价２４．００元书书书前　　言本标准的附录Ａ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山西出入境检验检疫局。本标准主要起草人：薛平、杜利军、陈勇、张晓峰、潘亚利、苑利。Ⅰ犛犖／犜２４３２—２０１０进出口食品中哒螨灵残留量的检测方法１　范围本标准规定了进出口食品中哒螨灵残留量检测的气相色谱测定和气相色谱质谱确证的方法。本标准适用于芦笋、土豆、葱、梨、桃、玉米、荞麦、茶叶、食醋、蜂蜜、核桃仁、兔肉、鸡肝、虾仁、鸡肉中哒螨灵残留量的检测。２　方法提要醋和蜂蜜用水溶解和稀释后，过固相萃取柱净化；葱和茶叶用乙酸乙酯环己烷混合溶剂提取，固相萃取净化；动物源性食品和含油量高的食品用乙腈提取，其他食品用乙酸乙酯环己烷混合溶剂提取，提取液用凝胶色谱仪（ＧＰＣ）；供带有电子捕获检测器的气相色谱仪测定，外标法定量，阳性样品用气相色谱质谱法确证。３　试剂和材料除非另有规定，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。３．１　乙酸乙酯：色谱纯。３．２　环己烷：色谱纯。３．３　乙腈：色谱纯。３．４　正己烷：色谱纯。３．５　丙酮：色谱纯。３．６　无水硫酸钠：６５０℃灼烧４ｈ，贮于密封容器中备用。３．７　氯化钠。３．８　乙酸乙酯环己烷混合溶剂（１＋１，体积比）：量取５００ｍＬ乙酸乙酯和５００ｍＬ环己烷，混匀。３．９　正己烷丙酮混合溶剂（９＋１，体积比）：量取９０ｍＬ正己烷和１０ｍＬ丙酮，混匀。３．１０　环己烷乙酸乙酯混合溶剂（６＋１，体积比）：量取１０ｍＬ乙酸乙酯和６０ｍＬ环己烷，混匀。３．１１　哒螨灵标准物质：（ｐｙｒｉｄａｂｅｎ；ＣＡＳ编号：９６４８９７１３；Ｃ１９Ｈ２５ＣｌＮ２ＯＳ；相对分子质量：３６４．９３）纯度大于等于９９％。３．１２　标准储备液（１００ｍｇ／Ｌ）：准确称取适量标准物质，用乙酸乙酯溶解，配制成浓度为１００ｍｇ／Ｌ的标准储备液，该溶液在０℃～４℃冰箱中保存。３．１３　标准工作液：根据需要再用乙酸乙酯稀释成适用浓度的标准工作溶液。标准工作液应现用现配。３．１４　石墨化碳黑和ＰＳＡ混合柱：１ｍＬ，５０ｍｇ石墨化碳黑＋５０ｍｇＰＳＡ，用３ｍＬ环己烷乙酸乙酯混合溶剂（３．１０）活化。３．１５　ＨＬＢ固相萃取柱：３ｍＬ，６０ｍｇ，或相当者，依次用２ｍＬ正己烷丙酮混合溶液（３．９），２ｍＬ丙酮，５ｍＬ蒸馏水预淋洗。３．１６　有机相滤膜：０．４５μｍ。４　仪器和设备４．１　气相色谱仪，配有电子捕获检测器。１犛犖／犜２４３２—２０１０４．２　气相色谱质谱仪，配有电子轰击源（ＥＩ）。４．３　分析天平：感量为０．０１ｇ。４．４　分析天平：感量为０．１ｍｇ。４．５　凝胶色谱仪，配有单元泵，馏分收集器。４．６　离心机：４０００ｒ／ｍｉｎ。４．７　旋转蒸发器。４．８　无水硫酸钠柱：７．５ｃｍ×１．５（内径）ｃｍ玻璃柱，内装５ｃｍ高无水硫酸钠。４．９　涡旋混合器。４．１０　均质器。４．１１　氮吹仪。４．１２　具塞离心管：５０ｍＬ，聚四氟乙烯。５　样品制备与保存５．１　样品制备５．１．１　粮谷及茶叶类将样品按四分法缩分至５００ｇ，用磨碎机全部磨碎。混匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的盛样瓶内，密闭，标明标记。５．１．２　水果及蔬菜类抽取水果或蔬菜样品５００ｇ，或去壳、去籽、去皮、去茎、去根、去冠（不可用水洗涤），将其可食用部分切碎后，依次用食品捣碎机将样品加工成浆状。混匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的盛样袋内，密闭，标明标记。５．１．３　肉及肉制品类、坚果类从所取全部样品中取出有代表性样品约１ｋｇ，取可食部分经捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器内作为试样。密封并标明标记。５．２　试样保存粮谷类、茶叶类、坚果类、蜂蜜及蜂蜜制品类试样于０℃～４℃保存；其他类试样于－１８℃以下冷冻保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。６　测定步骤６．１　提取６．１．１　蔬菜、水果、粮谷蔬菜、水果、粮谷称取１０ｇ（精确到０．０１ｇ）均匀试样，置于５０ｍＬ具塞离心管中，加入２０ｍＬ乙酸乙酯环己烷混合溶剂（３．８），１００００ｒ／ｍｉｎ匀浆１ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ，收集上层有机相，残留物再用２０ｍＬ乙酸乙酯环己烷混合溶剂重复提取一次，合并上层有机相，过无水硫酸钠柱（４．８）脱水，收集于１５０ｍＬ浓缩瓶中，于４０℃水浴中旋转浓缩至近干，准确加入１０．０ｍＬ乙酸乙酯环己烷溶解残渣，并过０．４５μｍ滤膜，待凝胶色谱净化。６．１．２　核桃仁、兔肉、鸡肝、虾、鸡肉称取１０ｇ（精确到０．０１ｇ）均匀试样，置于５０ｍＬ具塞离心管中，加入２０ｍＬ乙腈，１０ｍＬ蒸馏水，３ｇ氯化钠，１００００ｒ／ｍｉｎ匀浆１ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ，收集上层有机相，残留物再用２０ｍＬ乙腈重复提取一次，合并上层有机相，过无水硫酸钠柱脱水，收集于１５０ｍＬ浓缩瓶中，于４０℃水浴中旋转浓缩至近干，准确加入１０．０ｍＬ乙酸乙酯环己烷溶解残渣，并过０．４５μｍ滤膜，待凝胶色谱净化。２犛犖／犜２４３２—２０１０６．１．３　茶叶、葱称取２．５ｇ（精确到０．０１ｇ）均匀试样，置于５０ｍＬ具塞塑料离心管中，加入１５ｍＬ蒸馏水，静置１ｈ，加入２０ｍＬ乙酸乙酯环己烷混合溶剂，１００００ｒ／ｍｉｎ匀浆１ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ，收集上层有机相，残留物再用２０ｍＬ乙酸乙酯环己烷混合溶剂重复提取一次，合并上层有机相，过无水硫酸钠脱水，收集于１５０ｍＬ浓缩瓶中，于４０℃水浴中旋转浓缩至近干，用乙酸乙酯环己烷混合溶剂（３．１０）准确定容到１０．０ｍＬ，过０．４５μｍ滤膜，待固相萃取净化。６．２　净化６．２．１　蔬菜、水果、粮谷、核桃仁、兔肉、鸡肝、虾、鸡肉凝胶色谱净化６．２．１．１　凝胶色谱净化条件ａ）　凝胶净化柱：３００ｍｍ×１０ｍｍ（内径），ＢｉｏＢｅａｄｓＳＸ３，或相当者；ｂ）　流动相：环己烷乙酸乙酯（１＋１）；ｃ）　流速：４．７ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）　样品定量环：５ｍＬ；ｅ）　收集时间：７．５ｍｉｎ～１２．５ｍｉｎ。６．２．１．２　凝胶色谱净化步骤将１０ｍＬ待净化液按６．２．１条件净化，收集全部收集液于氮吹管中，于３５℃水浴中氮吹至近干，用乙酸乙酯定容至１．０ｍＬ，供气相色谱仪测定，气相色谱质谱法确证。６．２．２　醋、蜂蜜称取２．５ｇ（精确到０．０１ｇ）均匀试样，加入５ｍＬ水旋涡振荡混匀３０ｓ，将溶液全部过ＨＬＢ固相萃取柱，流速控制在１ｍＬ／ｍｉｎ，再用２ｍＬ蒸馏水淋洗柱子，弃去淋洗液，真空抽干２ｍｉｎ，再用４ｍＬ正己烷丙酮混合溶液（３．９）洗脱，收集洗脱液于离心管中，４０℃下氮气吹干，０．５ｍＬ乙酸乙酯定容，待测。６．２．３　茶叶、葱取０．５ｍＬ待净化液上石墨化碳黑和ＰＳＡ混合柱（３．１４），用１．５ｍＬ乙酸乙酯：环己烷混合溶剂（３．１０）洗脱，流速控制在１ｍＬ／ｍｉｎ，收集所有流出液于离心管中，４０℃下氮气吹干，０．５ｍＬ乙酸乙酯定容，待测。６．３　气相色谱测定６．３．１　气相色谱条件ａ）　色谱柱：ＤＢ１３０１石英毛细管柱，３０ｍ×０．２５ｍｍ（内径）×０．２５μｍ，或性能相当者；ｂ）　色谱柱温度：５０℃２０℃／→ｍｉｎ２００℃５℃／→ｍｉｎ２６０℃（１０ｍｉｎ）；ｃ）　进样口温度：２６０℃；ｄ）　检测器温度：３００℃；ｅ）　载气：氮气，纯度大于等于９９．９９９％，柱流量２ｍＬ／ｍｉｎ；ｆ）　进样方式：无分流，０．７５ｍｉｎ后打开分流阀；ｇ）　进样量：１μＬ。６．３．２　气相色谱测定根据样液中哒螨灵含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中哒螨灵相应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，哒螨灵的保留时间约为２０．９ｍｉｎ。标准品的色谱图参见附录Ａ中图Ａ．１。标准溶液及样液均按６．３．１的条件进行测定，如果样液中与标准溶液相同的保留时间有峰出现，则对其进行气相色谱质谱确证。６．４　气相色谱质谱确证６．４．１　气相色谱质谱条件：３犛犖／犜２４３２—２０１０ａ）　色谱柱：ＨＰ５ＭＳ石英毛细管柱，３０ｍ×０．２５ｍｍ（内径）×０．２５μｍ，或性能相当者；ｂ）　色谱柱温度：５０℃（１ｍｉｎ）１０℃／→ｍｉｎ２８０℃（１０ｍｉｎ）；ｃ）　进样口温度：２５０℃；ｄ）　色谱质谱接口温度：２８０℃；ｅ）　电离方式：ＥＩ；ｆ）　电离能量：７０ｅＶ；ｇ）　载气：氦气，纯度大于等于９９．９９９％，流速１ｍＬ／ｍｉｎ；ｈ）　进样方式：无分流，０．７５ｍｉｎ后打开分流阀；ｉ）　进样量：１μＬ；ｊ）　测定方式：选择离子监测；ｋ）　选择监测离子（ｍ／ｚ）：１４７、３０９、１０５（丰度比１００∶２５∶１４）；ｌ）　溶剂延迟：５．０ｍｉｎ。６．４．２　气相色谱质谱法确证经确证分析被测物质量色谱峰保留时间与标准品样品相一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，所选择的离子均出现；同时所选择离子的丰度比与标准样品相关离子的相对丰度一致，相似度再允许差之内（见表１），则可判定样品为哒螨灵阳性检出。哒螨灵标准物质的气相色谱质谱选择离子色谱图和质谱图参见附录Ａ中图Ａ．２和图Ａ．３。表１　定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许相对偏差／％±１０±１５±２０±５０６．５　空白试验除不称取样品外，均按上述步骤进行。７　结果计算和表述按式（１）计算试样中哒螨灵残留量：犡＝犃×犮ｓ×犞犃ｓ×犿…………………………（１）　　式中：犡———试样中哒螨灵残留量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犃———样液中哒螨灵的峰面积；犮ｓ———标准工作液中哒螨灵的浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犃ｓ———标准工作液中哒螨灵的峰面积；犿———最终样液所代表的试样量，单位为克（ｇ）。注：计算结果应扣除空白值。８　测定低限和回收率８．１　测定低限本标准对桃、梨、芦笋、土豆、玉米、荞麦、蜂蜜、食醋、核桃仁、虾仁、鸡肉、兔肉、大葱、茶叶和鸡肝的测定低限为０．０１ｍｇ／ｋｇ。８．２　回收率本方法添加水平和回收率见表２。４犛犖／犜２４３２—２０１０表２　添加水平和回收率样　　品添加水平／（ｍｇ／ｋｇ）回收率／％确证低限／（ｍｇ／ｋｇ）桃０．０１８５．１～９８．６０．０５８７．２～９８．４２．０８２．０～９９．７０．０１梨０．０１７１．４～１０２．４０．０５７４．８～１０１．５２．０８４．１～９９．６０．０１芦笋０．０１８４．３～９９．２０．０５８５．４～９８．８２．０８６．１～９８．９０．０１大葱０．０１８０．５～１０３．２０．０５８１．０～１００．８２．０８６．７～１０１．３０．０１土豆０．０１７９．８～１００．３０．０５８２．６～９８．８２．０８４．３～９９．１０．０１蜂蜜０．０１７２．６～９８．２０．０５７５．４～９８．０２．０８６．５～９９．７０．０１荞麦０．０１８３．４～１０３．１０．０５８７．２～１０２．０２．０８６．５～９９．９０．０１茶叶０．０１７６．５～１０５．１０．０５７８．４～９８．８２．