SNT 2314-2009 进出口动物源性食品中二苯脲类残留量检测方法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２３１４—２００９进出口动物源性食品中二苯脲类残留量检测方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犱犻狆犺犲狀狔犾狌狉犲犪狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋２００９０７０７发布２０１００１１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布食品伙伴网书书书中华人民共和国出入境检验检疫行　业　标　准进出口动物源性食品中二苯脲类残留量检测方法ＳＮ／Ｔ２３１４—２００９中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６　６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６　印张１．７５　字数４４千字２００９年１１月第一版　２００９年１１月第一次印刷印数１—２０００书号：１５５０６６·２２０００９　定价２７．００元食品伙伴网书书书前　　言本标准的附录Ａ、附录Ｂ和附录Ｃ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：林海丹、姚仰勋、邵琳智、林峰、谢守新、秦燕、康庆贺、吴映璇。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２３１４—２００９食品伙伴网进出口动物源性食品中二苯脲类残留量检测方法１　范围本标准规定了进出口动物源性食品中尼卡巴嗪（标志残留物为双硝基均二苯脲）和双咪苯脲残留量的液相色谱和液相色谱质谱／质谱法测定方法。本标准适用于牛肉、鸡肉、牛肝、鸡肝和鸡蛋中尼卡巴嗪和双咪苯脲残留量的测定和确证。２　方法提要试样在碱性条件下用乙腈提取，正己烷液液分配，双咪苯脲需经弱阳离子交换固相萃取柱净化，用液相色谱测定，外标法定量；用液相色谱质谱／质谱测定和确证，内标法定量双硝基均二苯脲，外标法定量双咪苯脲。３　试剂和材料除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为去离子水。３．１　乙腈：色谱纯。３．２　正己烷。３．３　甲醇：色谱纯。３．４　冰乙酸：色谱纯。３．５　氢氧化钾。３．６　犖，犖二甲基甲酰胺。３．７　无水硫酸钠：经６５０℃灼烧４ｈ，置于干燥器内备用。３．８　乙腈饱和正己烷：正己烷与足够的乙腈混合至饱和。３．９　０．１％乙酸水溶液：取冰乙酸１ｍＬ，用水定容至１Ｌ。过０．４５μｍ滤膜备用。３．１０　１％乙酸水溶液：取冰乙酸１０ｍＬ，用水定容至１Ｌ。过０．４５μｍ滤膜备用。３．１１　２％乙酸水溶液：取冰乙酸２ｍＬ，用水定容至１００ｍＬ。过０．４５μｍ滤膜备用。３．１２　５％乙酸甲醇溶液：取冰乙酸５ｍＬ，用甲醇定容至１００ｍＬ。３．１３　５０％氢氧化钾溶液：取５０ｇ氢氧化钾，溶于１００ｍＬ水。３．１４　甲醇０．１％乙酸水溶液（１＋１，体积比）：量取５０ｍＬ甲醇，加５０ｍＬ０．１％乙酸水溶液（３．９），混匀备用。３．１５　空白样品提取溶液水溶液（１＋９，体积比）：量取１ｍＬ空白样品提取溶液，加９ｍＬ水，混匀备用。３．１６　双硝基均二苯脲标准物质（Ｄｉｎｉｔｒｏｃａｒｂａｎｉｌｉｄｅ，ＣＡＳ号：５８７９０６）：纯度大于等于９７％。３．１７　双咪苯脲标准物质（Ｉｍｉｄｏｃａｒｂ，ＣＡＳ号：２７８８５９２３）：纯度大于等于９７％。３．１８　氘代双硝基均二苯脲（双硝基均二苯脲ｄ８，Ｄｉｎｉｔｒｏｃａｒｂａｎｉｌｉｄｅｄ８）：纯度大于等于９９％。３．１９　双硝基均二苯脲标准贮备溶液（１００ｍｇ／Ｌ）：准确称取适量双硝基均二苯脲标准物质，加犖，犖二甲基甲酰胺５ｍＬ溶解，用乙腈配成浓度为１００ｍｇ／Ｌ的标准贮备溶液。该溶液在４℃保存。３．２０　双咪苯脲标准贮备溶液（１００ｍｇ／Ｌ）：准确称取适量双咪苯脲标准物质，用乙腈配成浓度为１００ｍｇ／Ｌ的标准贮备溶液。该溶液在４℃保存。３．２１　氘代双硝基均二苯脲标准贮备溶液（１００ｍｇ／Ｌ）：准确称取适量氘代双硝基均二苯脲标准物质，１犛犖／犜２３１４—２００９食品伙伴网加犖，犖二甲基甲酰胺５ｍＬ溶解，用乙腈配成浓度为１００ｍｇ／Ｌ的标准贮备溶液。该溶液在４℃保存。３．２２　双硝基均二苯脲标准中间溶液（１．００ｍｇ／Ｌ）：准确移取１．００ｍＬ双硝基均二苯脲标准储备溶液（３．１９）于１００ｍＬ容量瓶，用乙腈稀释至刻度配成浓度为１．００ｍｇ／Ｌ的标准中间溶液。该溶液在４℃保存。３．２３　双咪苯脲标准中间溶液（１．００ｍｇ／Ｌ）：准确移取１．００ｍＬ双咪苯脲标准贮备溶液（３．２０）于１００ｍＬ容量瓶，用１％乙酸水溶液（３．１０）稀释至刻度配成浓度为１．００ｍｇ／Ｌ的标准中间溶液。该溶液在４℃保存。３．２４　氘代双硝基均二苯脲标准中间溶液（０．２０ｍｇ／Ｌ）：准确移取０．２０ｍＬ氘代双硝基均二苯脲标准贮备溶液（３．２１）于１００ｍＬ容量瓶，用乙腈稀释至刻度配成浓度为０．２０ｍｇ／Ｌ的标准中间溶液。该溶液在４℃保存。３．２５　双硝基均二苯脲液相色谱测定用标准工作溶液：根据需要移取适量标准贮备液（３．１９），用乙腈释成合适的标准工作溶液，现用现配。３．２６　双咪苯脲液相色谱测定用标准工作溶液：根据需要移取适量标准贮备液（３．２０），用２％乙酸水溶液（３．１１）稀释成适当浓度的标准工作溶液，现用现配。３．２７　双硝基均二苯脲液相色谱质谱／质谱测定用标准工作溶液：根据需要移取一定量标准中间溶液（３．２２）和氘代双硝基均二苯脲标准中间溶液（３．２４），用甲醇０．１％乙酸水溶液（３．１４）配成适当浓度的混合标准工作溶液，每毫升该混合标准工作溶液含有１０ｎｇ氘代双硝基均二苯脲，现用现配。３．２８　双咪苯脲液相色谱质谱／质谱测定用标准工作溶液：根据需要吸取一定量的标准中间溶液（３．２３），以空白样品提取溶液水溶液（３．１５）稀释成适当浓度的标准工作液，现用现配。３．２９　弱阳离子交换固相萃取柱：ＷａｔｅｒｓＯａｓｉｓ?ＷＣＸＳＰＥ（羧基键合二乙烯基苯、犖二乙烯基吡咯烷酮聚合物），６０ｍｇ／３ｍＬ，或相当者。临用时用３ｍＬ甲醇活化，３ｍＬ水平衡。３．３０　微孔滤膜：０．２０μｍ，有机相，水相；０．４５μｍ，水相。４　仪器和设备４．１　液相色谱仪：配紫外检测器。４．２　液相色谱质谱／质谱仪：配电喷雾离子源。４．３　分析天平：感量为０．１ｍｇ和０．０１ｇ。４．４　组织捣碎机。４．５　涡旋振荡器。４．６　均质机。４．７　离心机：３５００ｒ／ｍｉｎ。４．８　旋转蒸发仪。４．９　固相萃取装置。４．１０　具塞离心管：５０ｍＬ，塑料。５　试样的制备和保存５．１　动物肌肉、肝脏从原始样品中取出代表性的样品５００ｇ，用组织捣碎机捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样放于－１８℃以下保存。５．２　蛋从原始样品中取出代表性的样品５００ｇ，去除蛋壳后，用组织捣碎机捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样放于０℃～４℃保存。制样操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。２犛犖／犜２３１４—２００９食品伙伴网６　测定步骤６．１　提取称取５ｇ试样（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入１０ｍＬ乙腈、０．２ｍＬ５０％氢氧化钾溶液（３．１３）和３ｇ无水硫酸钠，均质３０ｓ，３５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液转移到２５ｍＬ容量瓶中，残渣加入１０ｍＬ乙腈和０．２ｍＬ５０％氢氧化钾溶液，涡旋振荡提取２ｍｉｎ，３５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，合并上清液，用乙腈定容至刻度，待净化。６．２　净化６．２．１　液液分配移取１０．０ｍＬ提取液（６．１）于２５ｍＬ浓缩瓶中，加入５ｍＬ乙腈饱和正己烷（３．８），涡旋振荡，静置分层，弃去上层。再加入５ｍＬ乙腈饱和正己烷，重复操作。６．２．２　双硝基均二苯脲测定移取２．０ｍＬ分配液（６．２．１）于４０℃下旋转蒸发至近干，用乙腈溶解残渣，定容至２．０ｍＬ，过０．２０μｍ滤膜，供液相色谱测定，或移取１．０ｍＬ滤液，加入０．５ｍＬ氘代双硝基均二苯脲标准中间溶液（３．２４），用甲醇０．１％乙酸水溶液（３．１４）定容至１０．０ｍＬ，供液相色谱质谱／质谱测定。６．２．３　双咪苯脲测定移取５．０ｍＬ分配液于已活化、平衡处理的固相萃取柱中（３．２９），控制流速小于０．５ｍＬ／ｍｉｎ，依次用３ｍＬ水、３ｍＬ甲醇淋洗，１５ｍＬ５％乙酸甲醇溶液（３．１２）洗脱，控制洗脱液流速小于１．０ｍＬ／ｍｉｎ。洗脱液转移到５０ｍＬ浓缩瓶，４０℃下旋转浓缩至近干，用水溶解残渣，定容至２．０ｍＬ，过０．２０μｍ滤膜，供液相色谱测定，或移取１．０ｍＬ滤液，用水定容至１０．０ｍＬ，供液相色谱质谱／质谱测定。６．３　空白样品提取溶液制备称取５ｇ空白样品，按６．１、６．２．１和６．２．３操作进行到水定容至２．０ｍＬ，过０．２０μｍ滤膜，得到滤液作为空白样品提取溶液。６．４　液相色谱测定６．４．１　色谱条件ａ）　色谱柱：ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＣ１８柱，２５０ｍｍ×４．６（内径）ｍｍ，５μｍ，或相当者；ｂ）　流动相：测定双硝基均二苯脲为乙腈１％乙酸水溶液（５３＋４７，体积比）；测定双咪苯脲为乙腈１％乙酸水溶液（１０＋９０，体积比）；ｃ）　流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）　检测波长：测定双硝基均二苯脲为３５０ｎｍ；测定双咪苯脲为２６０ｎｍ；ｅ）　柱温：３５℃；ｆ）　进样量：２０μＬ。６．４．２　色谱测定根据样液中待测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作溶液进行色谱分析，标准工作溶液和待测样液中双硝基均二苯脲及双咪苯脲的响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，双硝基均二苯脲和双咪苯脲的保留时间分别约为１０．３ｍｉｎ和７．８８ｍｉｎ，标准物质色谱图分别参见附录Ａ中图Ａ．１和图Ａ．２。６．５　液相色谱质谱／质谱测定６．５．１　色谱条件ａ）　色谱柱：ＳｕｎＦｉｒｅＣ１８，１００ｍｍ×２．１（内径）ｍｍ，３．５μｍ，或相当者；ｂ）　流动相：测定双硝基均二苯脲为甲醇０．１％乙酸水溶液（７５＋２５，体积比）；测定双咪苯脲为甲醇０．１％乙酸水溶液（１０＋９０，体积比）；ｃ）　流速：０．２５ｍＬ／ｍｉｎ；３犛犖／犜２３１４—２００９食品伙伴网ｄ）　柱温：３５℃：ｅ）　进样量：测定双硝基均二苯脲为５μＬ；测定双咪苯脲为１０μＬ。６．５．２　质谱条件ａ）　离子源：电喷雾离子源（ＥＳＩ）；ｂ）　扫描方式：测定双硝基均二苯脲为负离子扫描；测定双咪苯脲为正离子扫描；ｃ）　检测方式：多反应选择离子检测（ＭＲＭ）；ｄ）　电喷雾电压（ＩＳ）：测定双硝基均二苯脲为－４５００Ｖ：测定双咪苯脲为５５００Ｖ；ｅ）　雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；各参数参见附录Ｂ中表Ｂ．１；ｆ）　辅助气温度（ＴＥＭ）：５００℃；ｇ）　定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压及碰撞能量等主要质谱参数参见附录Ｂ中表Ｂ．１。　６．５．３　测定６．５．３．１　定性测定在相同实验条件下，如果样品中待测物质与标准溶液中对应的保留时间一致，定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准溶液的相对丰度一致，偏差不超过表１规定的范围，则可判断样品中存在相应的待测物。表１　定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０６．５．３．２　定量测定根据样液中待测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作溶液进行分析，标准工作溶液和待测样液中的响应值均应在仪器线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述仪器条件下，双硝基均二苯脲