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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖/犜2224—2008进出口动物源性食品中利福西明残留量检测方法液相色谱质谱/质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狉犻犳犪狓犻犿犻狀狉犲狊犻犱狌犲犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犲狓狆狅狉狋犪狀犱犻犿狆狅狉狋—犔犆犕犛/犕犛犿犲狋犺狅犱20081118发布20090601实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布食品伙伴网书书书前 言本标准的附录A和附录B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人:李一尘、林维宣、康庆贺。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖/犜2224—2008食品伙伴网进出口动物源性食品中利福西明残留量检测方法液相色谱质谱/质谱法1 范围本标准规定了动物源性食品中利福西明残留量的液相色谱质谱/质谱检测方法。本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾、牛奶中利福西明残留量的检测和确证。2 规范性引用下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法。(GB/T6682—2008,ISO3696:1987,MOD)3 方法提要样品中利福西明残留物用乙腈提取,正己烷除去提取液中脂肪,固相萃取柱净化,洗脱液氮气吹干后,用液相色谱串联质谱测定,外标法定量。4 试剂和材料除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。4.1 乙腈:高效液相色谱级。4.2 正己烷:高效液相色谱级。4.3 异丙醇。4.4 甲酸:高效液相色谱级。4.5 无水硫酸钠:650℃灼烧4h,置于干燥器中备用。4.6 乙腈饱和正己烷:100mL乙腈中加入100mL正己烷,充分振荡后,静置分层,取上层液体。4.7 0.1%甲酸溶液:准确量取1mL甲酸(4.4)于1L容量瓶中,用水定容至1L。4.8 乙腈水溶液(40+60,体积比):量取40mL乙腈加入60mL水中混匀。4.9 利福西明标准品(Rifaximin,CASNo.80621814):纯度大于等于95%。4.10 利福西明标准储备溶液:称取约0.01g利福西明标准品(精确至0.0001g),用乙腈溶解定容至100mL,此标准溶液浓度为100μg/mL,置于-18℃冰箱避光保存。保存期半年。4.11 利福西明标准工作溶液(1.0μg/mL):吸取适量的利福西明标准储备溶液(4.10),用乙腈配成1.0μg/mL的标准工作溶液。标准工作溶液置于4℃避光贮存。4.12 固相萃取小柱:WatersoasisHLB柱,500mg,6mL,或相当者。4.13 微孔滤膜:0.45μm,有机相。5 仪器和设备5.1 高效液相色谱质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源。5.2 组织捣碎机。1犛犖/犜2224—2008食品伙伴网5.3 分析天平:感量分别为0.1mg和0.01g。5.4 旋转蒸发器。5.5 固相萃取装置。5.6 离心机:4000r/min。5.7 旋涡混合器。5.8 均质器。10000r/min。6 样品制备与保存6.1 猪肉、猪肝和猪肾取约500g代表性样品,用组织捣碎机充分捣碎,均分成两份,分别装入洁净容器中,密封,并标明标记。6.2 牛奶所取约500g样品,充分均匀,均分成两份,分别装入洁净容器中,密封,并标明标记。6.3 样品保存猪肉、猪肝和猪肾试样于-18℃以下冷冻避光存放。牛奶试样于0℃~4℃冷藏避光存放。在制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7 测定步骤7.1 提取称取5g试样(精确至0.01g)于50mL具塞离心管中,加入5g无水硫酸钠(4.5)和20mL乙腈(4.1),均质30s,4000r/min离心5min,将上清液转移至另一50mL离心管中,用玻棒捣碎离心管中的沉淀。加入10mL乙腈提取,旋涡混合1min,4000r/min离心5min,合并上清液。加入10mL乙腈饱和正己烷(4.6),振荡5min,静置10min。收集下层液体于100mL浓缩瓶中,加入10mL异丙醇,40℃旋转蒸发至干,用3mL乙腈溶解,待净化。7.2 净化用5mL乙腈淋洗固相萃取柱(4.12),将提取液(7.1)上柱,控制洗脱流速为1mL/min,收集流出液于10mL试管中。再用5mL乙腈洗柱,控制洗脱流速为1mL/min,合并洗脱液,于45℃下氮气吹干,用乙腈水溶液(4.8)溶解定容至1.0mL。过0.45μm滤膜,供液相色谱质谱/质谱测定。7.3 利福西明基质校准标准溶液的配制称取七个基质空白样品(称样量为5g)于50mL具塞离心管中,其中六个空白样品中分别加入适量利福西明标准工作溶液(4.11),按照样品操作步骤7.1、7.2同步操作,使最终样品溶液中利福西明的浓度分别为10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、250ng/mL、500ng/mL。所得系列利福西明基质标准校准溶液即配即用,用以制作标准曲线。7.4 测定7.4.1 液相色谱条件7.4.1.1 色谱柱:AgilentC18柱,4.6mm(内径)×150mm,5μm,或相当者。7.4.1.2 流动相:A组分是0.1%甲酸溶液;B组分是乙腈。梯度洗脱程序见表1。表1 梯度洗脱程序时间/min流速/(mL/min)组分A/%组分B/%0.000.665.035.03.000.65.095.05.000.65.095.02犛犖/犜2224—2008食品伙伴网表1(续)时间/min流速/(mL/min)组分A/%组分B/%5.010.665.035.010.000.665.035.07.4.1.3 流速:0.6mL/min。7.4.1.4 进样量:20μL。7.4.2 质谱条件7.4.2.1 离子源:电喷雾离子源。7.4.2.2 扫描方式:正离子扫描。7.4.2.3 检测方式:多反应监测。7.4.2.4 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气;使用前应调节个参数使质谱灵敏度达到检测要求,质谱参考条件参见附录A。7.4.3 定性测定在相同试验条件下,样品中待测物质与同时检测的浓度相近的基质校准标准溶液具有相同的保留时间,并且所选择的离子相对丰度比相一致或在表2规定的允许偏差范围内,则可判断样品中存在对应的被测物。在上述实验条件下,利福西明的保留时间约为5.44min,定性离子对(m/z)为786.5/754.4;786.5/151.0,定量离子对786.5/754.4,参考离子相对丰度比(%)分别为100.00;23.8,相应的谱图参见附录B。表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%>50>20~50>10~20≤10允许的相对偏差/%±20±25±30±507.4.4 定量测定在仪器最佳工作条件下,对利福西明的基质校准标准溶液分别进样,以峰面积为纵坐标,系列基质校准标准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。7.4.5 空白试验除不加试样外,均按上述操作步骤进行。8 结果计算按式(1)计算试样中利福西明残留量:犡=(犮-犮0)·犞犿……………………………(1)式中:犡———试样中利福西明残留量,单位为微克每千克(μg/kg);犮———从标准曲线中得到的被测组分溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);犮0———从标准曲线中得到的空白试验中被测组分的溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);犞———样品溶液最终定容体积,单位为毫升(mL);犿———最终样液所代表试样质量,单位为克(g)。9 测定低限和回收率9.1 测定低限本方法的测定低限为10μg/kg。3犛犖/犜2224—2008食品伙伴网9.2 回收率不同样品基质添加浓度及回收率范围见表3。表3 利福西明的回收率化合物添加浓度/(μg/kg)回收率/%猪肉猪肝猪肾牛奶利福西明1072.3~86.473.5~89.373.9~87.571.5~88.72071.0~93.572.5~94.072.5~87.571.6~91.65073.8~85.274.2~94.878.0~92.477.2~93.24犛犖/犜2224—2008食品伙伴网附 录 犃(资料性附录)质谱参考条件参数1) 质谱参考条件参数:a) 电喷雾电压(IS):5500V;b) 雾化气压力(GS1):310.275kPa(45psi);c) 气帘气压力(CUR):137.9kPs(20psi);d) 辅助气压力(GS2):379.225kPa(55psi);e) 离子源温度(TEM):650℃;f) 利福西明的定性离子对、定量离子对、去簇电压(DP)、碰撞气能量(CE)及碰撞室出口电压(CXP)见表A.1。表犃.1 定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气能量和碰撞室出口电压组分名称定性离子对m/z定量离子对m/z去簇电压(DP)/V碰撞能量(CE)/V碰撞室出口电压(CXP)/V利福西明786.5/754.4786.5/151.0786.5/754.49033109050101) 非商业性声明:附录A所列参数是在API4000质谱仪完成的,此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考,并不涉及商业目的,鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。5犛犖/犜2224—2008食品伙伴网附 录 犅(资料性附录)利福西明标准品的多反应监测色谱图图犅.1 利福西明标准品的多反应监测色谱图6犛犖/犜2224—2008食品伙伴网犉狅狉犲狑狅狉犱犃狀狀犲狓犃犪狀犱犪狀狀犲狓犅狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狀犻狀犳狅狉犿犪狋犻狏犲犪狀狀犲狓.犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊狆狉狅狆狅狊犲犱犫狔犪狀犱犻狊狌狀犱犲狉狋犺犲犮犺犪狉犵犲犱狅犳犮犲狉狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犪犮犮狉犲犱犻狋犪狋犻狅狀犪犱犿犻狀犻狊狋犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪.犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犱狉犪犳狋犲犱犫狔犔犻犪狅犖犻狀犵犈狀狋狉狔犈狓犻狋犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪,犎犲犻犔狅狀犵犑犻狀犵犈狀狋狉狔犈狓犻狋犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪.犜犺犲狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犿犪犻狀犾狔犱狉犪犳狋犲犱犫狔犢犻犮犺犲狀犔犻,犠犲犻狓狌犪狀犔犻狀,犙犻狀犵犺犲犓犪狀犵.犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狆狉狅犳犲狊狊犻狅狀犪犾狊狋犪狀犱犪狉犱犳狅狉犲狀狋狉狔犲狓犻狋犻狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱狇狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅犿狌犾犵犪狋犲犱犳狅狉狋犺犲犳犻狉狊狋狋犻犿犲.7犛犖/犜2224—2008食品伙伴网犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狉犻犳犪狓犻犿犻狀狉犲狊犻犱狌犲犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犲狓狆狅狉狋犪狀犱犻犿狆狅狉狋—犔犆犕犛/犕犛犿犲狋犺狅犱1 犛犮狅狆犲犜犺犲狊狋犪狀犱犪狉犱狊狆犲犮犻犳犻犲狊狋犺犲犿犲狋犺狅犱狊狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犫狔犔犆犕犛/犕犛狅犳犚犻犳犪狓犻犿犻狀狉
本文标题:snt 2224-2008 进出口动物源性食品中利福西明残留量检测方法 液相色谱-质谱 质谱法
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