snt 2235-2008 进出口食品中嘧菌环胺残留量检测方法 气相色谱-质谱法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２２３５—２００８进出口食品中嘧菌环胺残留量检测方法气相色谱质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犮狔狆狉狅犱犻狀犻犾狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犌犆犕犛犿犲狋犺狅犱２００８１１１８发布２００９０６０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前　　言本标准的附录Ａ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：丁慧瑛、谢文、陈笑梅、将晓英、周旭、姚亮、卫锋。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２２３５—２００８进出口食品中嘧菌环胺残留量检测方法气相色谱质谱法１　范围本标准规定了食品中嘧菌环胺残留量的气相色谱质谱检测及确证方法。本标准适用于大米、大豆、小菘菜、甜豌豆、梨、柑桔、花生、茶叶、牛肉、鸡肉、虾肉、蜂蜜中嘧菌环胺残留量的检测和确证。２　方法提要试样中残留的嘧菌环胺经正己烷丙酮（１＋１）提取，用凝胶渗透色谱柱和丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱净化，气相色谱质谱检测和确证，外标法定量。３　试剂和材料除另有说明外，所用的有机试剂均为色谱纯，水为蒸馏水。３．１　正己烷。３．２　丙酮。３．３　环己烷。３．４　乙酸乙酯。３．５　甲醇。３．６　氨水：分析纯。３．７　盐酸：分析纯。３．８　０．１ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液：量取９ｍＬ盐酸，加适量水稀释至１０００ｍＬ。３．９　氯化钠：分析纯。３．１０　无水硫酸钠：分析纯，６５０℃灼烧４ｈ，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。３．１１　丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱：３ｍＬ，５００ｍｇ或相当者。３．１２　嘧菌环胺（Ｃｙｐｒｏｄｉｎｉｌ）标准物质：纯度大于９９％，分子式：Ｃ１４Ｈ１５Ｎ３相对分子质量：２２５．３ＣＡＳ号：１２１５５２６１２。３．１３　嘧菌环胺标准溶液：准确称取适量的嘧菌环胺标准物质，用丙酮配成浓度为１００μｇ／ｍＬ的标准储备液。根据需要用丙酮稀释至适当浓度的标准工作液。标准储备液在０℃～４℃冰箱中保存，有效期为１２个月，标准工作液在０℃～４℃冰箱中保存，有效期为６个月。４　仪器和设备４．１　气相色谱质谱仪：配有电子轰击源（ＥＩ）。４．２　旋涡混合器。４．３　离心机：转速大于５０００ｒ／ｍｉｎ。４．４　氮吹仪。４．５　旋转蒸发器。４．６　均质器。４．７　固相萃取装置。４．８　多功能食品搅拌机。４．９　粉碎机。１犛犖／犜２２３５—２００８４．１０　凝胶渗透色谱仪。５　试样制备和保存５．１　试样制备５．１．１　茶叶、粮谷类取代表性样品约５００ｇ，经粉碎机粉碎并通过２．０ｍｍ圆孔筛，混匀，装入洁净容器内密封，标明标记。５．１．２　蔬菜、水果及坚果类取代表性样品约５００ｇ，将其可食部分先切碎，经多功能食品搅拌机充分捣碎均匀，装入洁净容器内密封，标明标记。５．１．３　畜、禽、水产品类取代表性样品约５００ｇ，将其可食部分切碎后，用多功能食品搅拌机充分捣碎均匀，装入洁净容器内密封，标明标记。５．１．４　蜂产品类取代表性样品约５００ｇ，未结晶的样品将其用力搅拌均匀，有结晶析出的样品可将样品瓶盖塞紧后，置于不超过６０℃的水浴中温热，等样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。在融化时应注意防止水分挥发。装入洁净容器内密封，并标明标记。５．２　试样保存茶叶、粮谷、蜂产品、坚果类等试样于４℃以下保存；蔬菜、水果、蓄、禽、水产品类等试样于－１８℃以下保存。在制样过程中，应防止样品受到污染或发生嘧菌环胺残留量的变化。６　检测步骤６．１　提取６．１．１　虾肉称取２０ｇ（精确至０．０１ｇ）试样，加入１０ｍＬ水混匀，加入３０ｍＬ正己烷丙酮（１＋１）混合溶液，以１００００ｒ／ｍｉｎ均质０．５ｍｉｎ，加入５ｇ氯化钠，摇匀，并于４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ。吸取上层有机相于浓缩瓶中，残渣中加入３０ｍＬ正己烷丙酮（１＋１）混合溶液，重复提取一次，合并上层有机相，在４５℃水浴中减压浓缩至近干。准确加入１０．０ｍＬ环己烷乙酸乙酯（１＋１）溶解残渣，供凝胶色谱净化。６．１．２　蜂蜜称取２０ｇ（精确至０．０１ｇ）试样，加入２０ｍＬ水混匀，加入３０ｍＬ正己烷丙酮（１＋１）涡旋混匀１ｍｉｎ，加入５ｇ氯化钠，摇匀，并于４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ。吸取上层有机相于浓缩瓶中，残渣中加入３０ｍＬ正己烷丙酮（１＋１）混合溶液，重复提取一次，合并上层有机相，在４５℃水浴中减压浓缩至近干。准确加入１０．０ｍＬ环己烷乙酸乙酯（１＋１）溶解残渣，供凝胶色谱净化。６．１．３　大米、大豆、花生、茶叶、小菘菜、甜豌豆、梨、柑桔、牛肉、鸡肉称取５ｇ（茶叶称取２ｇ）（精确至０．０１ｇ）试样，加入５ｍＬ水混匀（茶叶、大米和花生需放置０．５ｈ），加入１５ｍＬ正己烷丙酮（１＋１）混合溶液，以１００００ｒ／ｍｉｎ均质０．５ｍｉｎ，加入５ｇ氯化钠，摇匀，并于４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ。吸取上层有机相于浓缩瓶中，残渣中加入１５ｍＬ正己烷丙酮（１＋１）混合溶液，重复提取一次，合并上层有机相，在４５℃水浴中减压浓缩至近干。准确加入１０．０ｍＬ环己烷乙酸乙酯（１＋１）溶解残渣，供凝胶色谱净化。６．２　净化６．２．１　凝胶色谱净化６．２．１．１　凝胶色谱净化条件ａ）　凝胶净化柱：４００ｍｍ×２５ｍｍ（内径）；填料：ＢｉｏＢｅａｄｓ，ＳＸ３，３８μｍ～７５μｍ，或相当者（在使２犛犖／犜２２３５—２００８用前需先做淋洗曲线）；ｂ）　流动相：环己烷乙酸乙酯（１＋１）；ｃ）　流速：５．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）　样品定量环：５ｍＬ；ｅ）　收集时间：２０ｍｉｎ～２５ｍｉｎ。６．２．１．２　凝胶色谱净化步骤将提取液转移到离心管中，４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ，将上清液转移到凝胶渗透色谱仪的样品瓶中，按６．２．１．１条件净化，将收集液在４５℃以下水浴减压浓缩至近干，加入５ｍＬ甲醇溶解后，加入５ｍＬ水混匀。６．２．２　丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱净化将丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱安装在固相萃取装置上，加入５ｍＬ甲醇，弃去流出液，再加入５ｍＬ０．１ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液，弃去流出液。加入６．２．１所得溶液，加入１０ｍＬ甲醇水（１＋１），弃去流出液，抽真空至尽干，再加入１０ｍＬ氨水甲醇（５＋９５），收集１０ｍＬ流出液。在４５℃水浴中减压浓缩至近干。准确加入０．５ｍＬ丙酮溶解残渣并定容，供ＧＣＭＳ检测。６．３　检测６．３．１　气相色谱质谱条件ａ）　色谱柱：ＤＢ５ｍｓ石英毛细管柱，３０ｍ×０．２５ｍｍ（内径）×０．２５μｍ（膜厚），或相当者；ｂ）　色谱柱温度：５０℃（１ｍｉｎ）２０℃／→ｍｉｎ３００℃（１０ｍｉｎ）；ｃ）　进样口温度：２５０℃；ｄ）　接口温度：２８０℃；ｅ）　载气：氦气，纯度大于等于９９．９９９％。流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｆ）　进样量：２μＬ；ｇ）　进样方式：脉冲不分流进样，脉冲压力２５ｐｓｉ，延时０．７５ｍｉｎ，０．７５ｍｉｎ后开阀；ｈ）　离子源：电子轰击源（ＥＩ）；ｉ）　电离能量：７０ｅＶ；ｊ）　溶剂延迟时间：８ｍｉｎ；ｋ）　检测方式：选择离子监测方式；ｌ）　选择离子及相对丰度：见表１。表１　选择离子和相对丰度选择离子（ｍ／ｚ）２２４（定量）２２５２２６２１０相对丰度／％１００６１．７９．０１１．３６．３．２　定量根据样液中嘧菌环胺含量的情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中嘧菌环胺响应值应在仪器检测的线性范围内。标准工作溶液和样液等体积穿插进样检测。在上述色谱条件下，嘧菌环胺的保留时间约为１０．５ｍｉｎ，标准品的总离子流色谱图参见附录Ａ中图Ａ．１。６．３．３　确证对标准溶液及样液均按６．３．１规定的条件进行检察，如果样液与标准溶液在相同的保留时间有峰出现，则对其进行质谱确证，在扣除背景后的样品谱图中，所选择离子全部出现，同时所选择的离子的离子丰度比与标准品相关离子的相对丰度一致，波动范围符合表２的最大容许偏差之内（见表２），可判定样品中存在嘧菌环胺。被确证的样品可判定为嘧菌环胺阳性检出。嘧菌环胺标准品的质谱图参见附录Ａ中图Ａ．２。３犛犖／犜２２３５—２００８表２　质谱相对离子丰度最大容许偏差相对离子丰度（基峰）／％容许的相对偏差／％＞５０±１０＞２０～５０±１５＞１０～２０±２０≤１０±５０６．３．４　空白试验除不加试样外，均按上述检测步骤进行。６．４　结果计算用色谱数据处理软件或按式（１）计算试样中，嘧菌环胺的残留含量：犡＝犃×犮×犞犃ｓ×犿……………………………（１）　　式中：犡———试样中嘧菌环胺残留量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犃———样液中嘧菌环胺的峰面积；犮———标准工作液中嘧菌环胺的浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；犞———最终样液定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犃ｓ———标准工作液中嘧菌环胺峰面积；犿———最终样液所代表的试样量，单位为克（ｇ）。７　方法检测低限和回收率７．１　检测低限本方法的检测低限：蜂蜜和虾肉为０．０００４ｍｇ／ｋｇ，其他样品为０．０１ｍｇ／ｋｇ。７．２　回收率样品的添加浓度及回收率的实验数据见表３。表３　样品的添加浓度及回收率的实验数据样品添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率／％大米０．０１７７．５～１１２０．０２７７．５～１０７０．０５７７．８～１０２甜豌豆０．０１７８．２～１１３０．０２７７．５～１１００．０５７９．６～１０４小松菜０．０１７５．１～１０２０．０２７９．５～１１００．０５７５．８～９６．４梨０．０１７６．７～１１２０．０２７９．５～１０７０．０５７７．６～１０８样品添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率／％柑桔０．０１６９．１～１１２０．０２７６．０～１０８０．０５８０．２～１１０花生０．０１７８．５～１１４０．０２７９．５～１１１０．０５７９．４～１０８茶叶０．０１６９．８～１１４０．０２７２．５～８６．００．０５７７．０～１０６牛肉０．０１７８．９～１１３０．０２７８．８～１０３０．０５８３．０～１０２．２４犛犖／犜２２３５—２００８表３（续）样品添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率／％鸡肉０．０１７８．１～１１３０．０２７９．５～１０７０．０５８１．６～１０２虾肉０．０００４５６．５～８５．５０．０００８５８．４～８７．９０．００２６８．０～８４．０样品添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率／％蜂蜜０．０００４５４．５～８１．００．０００８５６．８～８２．９０．００２６２．５～８１．５大豆０．０１７３．８～１０７０．０２７５．０～１０４０．０５７９．６～１１０５犛犖／犜２２３５—２００８附　录　犃（资料性附录）色谱图和质谱图图犃．１　嘧菌环胺标物质的总离子流色谱图图犃．２　嘧菌环胺标准物质的质谱图６犛犖／犜２２３５—２００８犉狅狉犲狑狅狉犱犃狀狀犲狓犃狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狀犻狀犳狅狉犿犪狋犻狏犲犪狀狀犲狓．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊狆狉狅狆狅狊犲犱犫狔犪狀犱犻狊狌狀犱犲狉狋犺犲犮犺犪狉犵犲犱狅犳犮犲狉狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犪犮犮狉犲犱犻狋犪狋犻狅狀犪犱犿犻狀犻狊狋犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犱狉犪犳狋犲犱犫狔犣犺犲犼犻犪狀犵犈狀狋狉狔犈狓犻狋犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪，犔犻犪狅狀犻狀犵犈狀狋狉狔犈狓犻狋犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪．犜犺犲狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犿犪犻狀犾狔犱狉犪犳狋犲犱犫狔犇犻狀犵犎狌犻狔犻狀犵，犡犻犲犠犲狀，犆犺犲狀犡犻犪狅犿犲犻，犑犻犪狀犵犡犻犪狅狔犻狀犵，犣犺狅狌狓狌，犢犪狅犔犻犪狀犵，犠犲犻犉犲狀犵．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狆狉狅犳犲狊狊犻狅狀犪犾狊狋犪狀犱犪狉犱犳狅狉犲狀狋狉狔犲狓犻狋犻狀狊狆犲犮狋犻狅