SNT 2105-2008 化妆品中柠檬黄和桔黄等水溶性色素的测定方法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２１０５—２００８化妆品中柠檬黄和桔黄等水溶性色素的测定方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犪狉狋狉犪狕犻狀犲牔狊狌狀狊犲狋狔犲犾犾狅狑狑犪狋犲狉狊狅犾狌犫犻犾犻狋狔犮狅犾狅狌狉犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊２００８０７１７发布２００９０２０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前　　言　　本标准的附录Ａ、附录Ｂ、附录Ｃ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：郝楠、白桦、丁岩、陈伟、陈娟、马强。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２１０５—２００８化妆品中柠檬黄和桔黄等水溶性色素的测定方法１　范围本标准规定了化妆品中八种水溶性色素樱桃红、食品红１７、柠檬黄、桔黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝、亮蓝的液相色谱测定方法。本标准适用于皮肤护理类和眼部修饰类化妆品中水溶性色素的测定。２　原理用水提取化妆品中的水溶性色素，提取液经离心过滤后，用高效液相色谱法进行测定。根据其保留时间定性，外标法定量。液相色谱质谱法确证。３　试剂和材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为二次去离子水或重蒸水。３．１　甲醇：高效液相色谱级。３．２　乙酸铵。３．３　樱桃红标准物质：纯度≥９７％。３．４　食品红１７标准物质：纯度≥９７％。３．５　柠檬黄标准物质：纯度≥９７％。３．６　桔黄标准物质：纯度≥９７％。３．７　苋菜红标准物质：纯度≥９７％。３．８　胭脂红标准物质：纯度≥９７％。３．９　亮蓝标准物质：纯度≥９７％。３．１０　靛蓝标准物质：纯度≥９７％。３．１１　水溶性色素标准储备液：准确称取适量水溶性色素（精确到０．１ｍｇ），以水配制成浓度均为１０００μｇ／ｍＬ的标准储备溶液。根据需要用水稀释成适用浓度的标准工作溶液。冰箱冷藏保存，有效期１个月。３．１２　０．４５μｍ水性滤膜。４　仪器与设备４．１　高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器。４．２　微量进样器：１０μＬ。４．３　超声波清洗器。４．４　离心机：大于５０００ｒ／ｍｉｎ。４．５　溶剂过滤器。５　测定步骤５．１　试样处理５．１．１　液体样品称取化妆品试样约１ｇ（精确到０．００１ｇ），置于５０ｍＬ具塞锥形瓶中，加入１５ｍＬ水，在超声波清洗器中超声提取２０ｍｉｎ，提取液移入２５ｍＬ容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，经滤膜（３．１２）过滤，所得滤１犛犖／犜２１０５—２００８液供液相色谱测定。５．１．２　固体样品称取化妆品试样约１ｇ（精确到０．００１ｇ），置于５０ｍＬ具塞锥形瓶中，加入１５ｍＬ水，３ｇ氯化钠固体，在超声波清洗器中超声提取２０ｍｉｎ，提取液过滤，用水定容至２５ｍＬ，经滤膜（３．１２）过滤，所得滤液供液相色谱测定。５．２　测定５．２．１　色谱条件ａ）　色谱柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８２５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径），５μｍ（粒径），或相当者；ｂ）　流动相Ａ：甲醇；ｃ）　流动相Ｂ：０．００５ｍｏｌ／Ｌ乙酸铵；ｄ）　流动相梯度（见表１）；表１　流动相梯度程序时间／ｍｉｎ流动相Ａ流动相Ｂ０１０９０２２０８０６９８２１０９８２１３１０９０　　ｅ）　流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｆ）　检测波长：樱桃红、食品红１７、柠檬黄、桔黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝：２５４ｎｍ；亮蓝：６３０ｎｍ；ｇ）　柱温：室温；ｈ）　进样量：１０μＬ。５．２．２　标准工作曲线绘制用水溶性色素标准储备液（３．１１）分别配制成浓度为０．５ｍｇ／Ｌ、１．０ｍｇ／Ｌ、５．０ｍｇ／Ｌ、１０．０ｍｇ／Ｌ、２０．０ｍｇ／Ｌ、５０．０ｍｇ／Ｌ、１００．０ｍｇ／Ｌ的混合标准工作溶液，分别取１０μＬ注入液相色谱仪，按色谱条件（５．２．１）进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。在上述仪器条件下（５．２．１）柠檬黄的保留时间约为４．４ｍｉｎ，苋菜红的保留时间约为５．１ｍｉｎ，靛蓝的保留时间约为５．９ｍｉｎ，胭脂红的保留时间约为６．２ｍｉｎ，桔黄的保留时间约为６．６ｍｉｎ，食品红１７的保留时间约为６．９ｍｉｎ，亮蓝的保留时间约为７．３ｍｉｎ，樱桃红的保留时间约为８．４ｍｉｎ，水溶性色素标准物种类表和色谱图参见附录Ａ、附录Ｂ。５．２．３　试样测定用微量进样器准确吸取１０μＬ试样溶液（５．１）注入液相色谱仪，按色谱条件（５．２．１）进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积。待测物质含量高，样液超过线性范围的，可用水稀释后进行测定。需要时，用液相色谱质谱法进行确证（参见附录Ｃ）。５．３　空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。６　结果计算结果按式（１）计算：犡＝犮×犞犿×１０００……………………………（１）２犛犖／犜２１０５—２００８　　式中：犡———化妆品中待测物质的量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犮———从标准工作曲线上查出的试样溶液中水溶性色素的浓度，单位为毫克每升（ｍｇ／Ｌ）；犞———试样定容体积，单位为升（Ｌ）；犿———试样的质量，单位为克（ｇ）。７　测定低限及精密度７．１　测定低限本方法对亮蓝测定低限为２．５ｍｇ／ｋｇ，对樱桃红、食品红１７、柠檬黄、桔黄、苋菜红、胭脂红和靛蓝测定低限为１０ｍｇ／ｋｇ。７．２　精密度回收率和精密度见表２。表２　水溶性色素回收率和精密度名　　称添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）平均回收率／％相对标准偏差／％柠檬黄１０００９５．９１．１８１００９５．３２．３６１０９９．８２．１６苋菜红１０００９５．９１．２２１００９２．５４．７４１０１０２２．４９靛蓝１０００９３．９１．６４１００８６．０４．８３１０８２．９２．８８胭脂红１０００９５．２２．１４１００９８．１３．５３１０１０１２．６１桔黄１０００９５．９１．００１００９０．５２．８９１０８８．８２．４２食品红１７１０００９５．８１．１５１００８４．４２．３１１０９０．０２．９８樱桃红１０００９５．２３．４１１００８５．８４．４６１０１０４３．６９亮蓝１０００９５．２１．２９１００９４．５２．４６２．５１０２２．９６３犛犖／犜２１０５—２００８附　录　犃（资料性附录）八种水溶性色素种类表表犃．１　八种水溶性色素种类表序号中文名称英文名称化学文摘号ＣＡＳ色号Ｃ．Ｉ．分子式１柠檬黄Ｔａｒｔｒａｚｉｎｅ１９３４２１０１９１４０Ｃ１６Ｈ９Ｏ９Ｎ４Ｓ２Ｎａ３２桔黄ＳｕｎｓｅｔＹｅｌｌｏｗ２７８３９４０１５９８５Ｃ１０Ｈ１０Ｎ２Ｏ７Ｓ２Ｎａ２３樱桃红ＦｏｏｄＲｅｄ１４５６８６３８４５４３０　Ｃ２０Ｈ６Ｉ４Ｎａ２Ｏ５４食品红１７ＦａｎｃｙＲｅｄ２５９５６１７６１６０３５Ｃ１８Ｈ１４Ｎ２Ｎａ２Ｏ８Ｓ２５胭脂红Ｐｏｎｃｅａｕ４Ｒ２６１１８７２１６２５５Ｃ２０Ｈ１１Ｎ２Ｎａ３Ｏ１０Ｓ３６苋菜红Ａｍａｒａｎｔｈ９１５６７３１６１８５Ｃ２０Ｈ１１Ｎ２Ｎａ３Ｏ１０Ｓ３７亮蓝Ｅｒｉｏｇｌａｕｃｉｎｅｄｉｓｏｄｉｕｍｓａｌｔ３８４４４５９４２０９０Ｃ３７Ｈ３４Ｎ２Ｎａ２Ｏ９Ｓ３８靛蓝ＦｏｏｄＢｌｕｅ１８６０２２０７３０１５　Ｃ１６Ｈ８Ｎ２Ｎａ２Ｏ８Ｓ２４犛犖／犜２１０５—２００８附　录　犅（资料性附录）水溶性色素标准物液相色谱图　　１———柠檬黄；　　２———苋菜红；　　３———靛蓝；　　４———胭脂红；　　５———桔黄；　　６———食品红１７；　　７———亮蓝；　　８———樱桃红。图犅．１　水溶性色素标准物的液相色谱图５犛犖／犜２１０５—２００８附　录　犆（资料性附录）确证试验犆．１　液相色谱条件ａ）　色谱柱：ＸＴｅｒｒａＭＳＣ１８柱，１５０ｍｍ×２．１ｍｍ（内径），５μｍ（粒径），或相当者；ｂ）　流动相：流动相梯度见表Ｃ．１，Ａ：甲醇，Ｂ：０．０１ｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液；表犆．１　流动相梯度洗脱程序时间／ｍｉｎ０６１０１４１５流动相Ａ１０８５９５９５１０流动相Ｂ９０１５５５９０　　ｃ）　流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）　柱温：３０℃；ｅ）　进样量：５μＬ。犆．２　质谱条件ａ）　离子源：ＥＳＩ；ｂ）　离子化模式：正离子模式；ｃ）　毛细管电压：３．５ｋＶ；ｄ）　萃取电压：３Ｖ；ｅ）　射频透镜电压：０．５Ｖ；ｆ）　离子源温度：１２０℃；ｇ）　脱溶剂气温度：３５０℃；ｈ）　数据采集方式：选择离子监测（ＭＲＭ）。犆．３　定性测定进行试样测定时，将样液适当稀释，按液相色谱质谱条件测定样液和标准工作溶液，如果检出色谱峰的保留时间与标准物质相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子比与标准物质的相对丰度一致，相对丰度不超过表Ｃ．２规定的范围，则可判断样品中存在该色素。表犆．２　监测离子目　标　物母离子（ｍ／ｚ）子离子（ｍ／ｚ）相对丰度／％允许相对误差／％柠檬黄４６８．９（２０Ｖ）４５１．２（１３ｅＶ）２００．２（２５ｅＶ）１００８６±２０苋菜红５３８．９（２０Ｖ）３４８．４（２５ｅＶ）２２３．４（３０ｅＶ）１００９７±２０胭脂红５３９．０（２５Ｖ）１５８．０（２８ｅＶ）２２３．３（２０ｅＶ）１００５７±２０靛蓝４２３．１（２５Ｖ）３１３．３（２５ｅＶ）３４２．５（２８ｅＶ）１００６７±２０桔黄４０９．１（２０Ｖ）１７３．１（２２ｅＶ）２３６．２（２５ｅＶ）１００７６±２０６犛犖／犜２１０５—２００８表犆．２（续）目　标　物母离子（ｍ／ｚ）子离子（ｍ／ｚ）相对丰度／％允许相对误差／％食品红１７４５３．０（２２Ｖ）２１７．２（２８ｅＶ）２０２．１（３０ｅＶ）１００５１±２０亮蓝７４９．３（５０Ｖ）１７１．２（５０ｅＶ）３０６．２（４８ｅＶ）１００６５±２０樱桃红８３６．７（１８Ｖ）５８２．８（５０ｅＶ）３２９．２（５５ｅＶ）１００４４±２５　　标准物质的离子监测图见图Ｃ．１，质谱图见图Ｃ．２～图Ｃ．９。图犆．１　选择离子监测图图犆．２　柠檬黄质谱图图犆．３　苋菜红质谱图７犛犖／犜２１０５—２００８图犆．４　胭脂红质谱图图犆．５　靛蓝质谱图图犆．６　桔黄质谱图图犆．７　食品红１７质谱图８犛犖／犜２１０５—２００８图犆．８　亮蓝质谱图图犆．９　樱桃红质谱图９犛犖／犜２１０５—２００８