SNT 2098-2008 食品和化妆品中的菌落计数检测方法 螺旋平板法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准!!#!#$!$食品和化妆品中的菌落计数检测方法螺旋平板法$%&%’()*+&),*,-+%’,.)/.+/&%’)+0/,1*&)*-,,23+*2/,3(%&)/3!4)’+040+&%(%&5,2!$6%6&%发布!#6!6&实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前!!言本标准的附录!为规范性附录!附录为资料性附录本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位#中华人民共和国福建出入境检验检疫局本标准主要起草人#陈彬$黄晓蓉$郑晶$吴谦$汤敏英$张体银$林杰本标准系首次发布的出入境检验检疫标准!!!#!#$!$食品和化妆品中的菌落计数检测方法螺旋平板法%!范围本标准规定了食品和化妆品中菌落计数的检测方法本标准适用于各类食品和化妆品的菌落计数!!规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注日期的引用文件!其随后所有的修改单%不包括勘误的内容&或修订版均不适用于本标准!然而!鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件!其最新版本适用于本标准#’$%&’()’!化妆品微生物标准检验方法!总则*+,’-(!出口食品平板菌落计数*+’$’./()’(0,,.!培养基制备指南!第’部分#实验室培养基制备质量保证通则&!原理螺旋接种菌落计数是依据阿基米德螺旋原理!使样品以对数规律螺旋线形式接种在平板上样品接种后!菌落即分布在螺旋轨迹上!随半径的增加分布得越来越稀采用特殊的计数栅格!自平板外周向中央对平皿上的菌落进行计数!即可得到样品中微生物的数量’!设备和材料’)%!螺旋接种仪’)!!菌落计数仪’)&!均质器’)’!恒温培养箱#/-12’1!/,12’1’)(!样品杯#容量.34’))!电子天平#精确至,)’5’)*!灭菌吸管#’34$’,34’)$!灭菌平皿#’,,33$’.,33’)#!稀释瓶#广口瓶或锥形瓶!容量为0.,34和.,,34(!培养基和试剂()%!稀释液#磷酸盐缓冲稀释液见第!)’章()!!’367’4氢氧化钠%+89:&#称取;,5+89:溶于’,,,34蒸馏水中()&!’367’4盐酸%:7&#移取浓盐酸&,34!用蒸馏水稀释至’,,,34()’!平板计数琼脂#见第!)0章()(!卵磷脂吐温=(,营养琼脂#见第!)/章())!.)0.次氯酸钠()*!灭菌液体石蜡’!!#!#$!$()$!灭菌吐温=(,)!操作步骤))%!平板制备按*+’$’./()’(0,,.中;)/的规定!制备和储存用于食品检测的平板计数琼脂和用于化妆品检测的卵磷脂吐温=(,营养琼脂))!!样品制备))!)%!按*+,’-(的方法进行食品样品制备制备’?’,的样品匀液后!无菌操作调节该样品匀液的@:为-)-%)0!酸性样液用’367’4氢氧化钠!碱性样液用’367’4盐酸调节!或根据产品标准规定的酸碱溶液来调节@:值))!)!!化妆品样品按#’$%&’()’方法进行样品制备))!)&!根据食品卫生标准要求或对样品污染情况的估计!参照螺旋接种仪接种模式的计数范围选择’个0个适宜稀释度检验))!)’!如果样品稀释液中的微粒会阻塞接种针!应先过滤除去微粒或静置.3AB))&!接种平板))&)%!平板使用前按*+’$’./()’(0,,.中;););的规定或用适宜的方法对琼脂表面进行干燥!使培养基表面的水滴消失!注意不要过度干燥!并做好标记))&)!!在螺旋接种仪上选择平板规格!)’,,33*或)’.,33*平板!并选择接种模式))&)&!取制备好的适宜稀释度的样品稀释液!以选定的模式接种于平板计数琼脂平板或卵磷脂吐温=(,营养琼脂平板!每个稀释度接种两块平板))&)’!接种每一个样品前后均按仪器设定程序对螺旋接种仪进行清洗消毒))&)(!按相同接种模式接种稀释液作为空白对照))’!培养将接种后平板翻转!置于/-12’1的恒温培养箱内培养;(C20C%水产品/,12’1培养%0C2/C&!如有产品标准等特殊要求!则按相应的标准或要求进行))(!菌落计数和记录))()%!到培养时间后应立即计数!如果不能立即计数!应将平板存放于,1;1冰箱!但不超过0;C))()!!将平板放在菌落计数仪载物台上!选择适当的背景和光源!选定接种模式和稀释度!按照菌落计数仪的操作规程计数每个平板菌落数!并记录)))!菌落总数的计算和记录))))%!平板上菌落数符合菌落计数仪规定计数范围的为合适范围%如#第)/章所列的计数范围&))))!!如果两个稀释度的四个平板菌落数均在合适范围内!则将四个平板菌落数的平均值作为每克%毫升&样品中的菌落数))))&!如果只有一个稀释度的两个平板菌落数在合适范围内!则将这两个平板菌落数的平均值作为每克%毫升&样品中的菌落数))))’!当低稀释度的两个平板菌落数都少于合适范围的下限时!计算这一稀释度两个平板菌落数的平均值作为每克%毫升&样品中的菌落数给这个数注上星号%&!表明该数是从菌落数在计数范围之外的平板估计所得))))(!当所有平板上的菌落数都超过合适范围的上限时!计算高稀释度两个平板菌落数的平均值作为每克%毫升&样品中的菌落数!给这个数注上星号%&%意义同-)-);&0!!#!#$!$)))))!如果所有稀释度的平板都没有菌落!则以小于’乘以稀释倍数和接种体积作为每克%毫升&样品中的菌落数!给这个数注上星号%&%意义同-)-);&示例’#每个平板接种体积为.,#4!稀释倍数为’,倍!则应报告小于0,,DE’34示例0#每个平板接种体积为’,,#4!稀释倍数为’倍!则应报告小于’,DE’34))))*!记录时!只有在换算到每克%毫升&样品中菌落数时!才能定下两位有效数字!第三位数字采用四舍五入的方法记录也可将样品的菌落数记录为’,的指数形式*!结果的表述根据-)-规定计算出每克%毫升&样品的菌落数!固体样品以DE’5为单位报告!液体样品以DE’34为单位报告/!!#!#$!$附!录!$%规范性附录&培!!养!!基$)%!磷酸盐缓冲稀释液$)%)%!贮存液磷酸二氢钾%F:0G9;&!!!!!!!/;),5蒸馏水.,,34用大约’%.),34的’367’4氢氧化钠溶液调节@:至%)0!用蒸馏水稀释至’,,,34后贮存于;1’01冰箱$)%)!!稀释液用蒸馏水稀释’)0.34贮存液至’,,,34!分装于合适容器!’0’1高压灭菌’.3AB$)!!平板计数琼脂$)!)%!成分胰蛋白胨.),5酵母浸膏0).5葡萄糖’),5琼脂’.),5蒸馏水’,,,34@:%),2,)’$)!)!!制法将各成分加于蒸馏水中!煮沸溶解分装试管或烧瓶!’0’1高压灭菌’.3AB$)&!卵磷脂吐温%$营养琼脂$)&)%!成分蛋白胨0,),5牛肉膏/),5氯化钠.),5琼脂’.),5卵磷脂’),5吐温=(,%),5蒸馏水’,,,34$)&)!!制法先将卵磷脂加到少量蒸馏水中!加热溶解!加入吐温=(,将除琼脂外的其他成分加到其余的蒸馏水中溶解!加入已溶解的卵磷脂$吐温=(,!混匀!调@:值为%)’%);!加入琼脂!’0’1!高压灭菌0,3AB;!!#!#$!$附!录!&%资料性附录&全自动螺旋接种计数系统操作程序%&&)%!仪器接种操作步骤&)%)%!在仪器规定位置分别放置装有.)0.次氯酸钠消毒液$无菌水和无菌水的三个溶液池以及样品杯架!在真空泵上的废液瓶里加适量.)0.次氯酸钠消毒液&)%)!!打开接种仪和真空泵的电源!此时真空泵开始工作!直至达到要求时停止&)%)&!根据需要!在操作面板上选择平板规格及接种模式如果接种样品中含有较多的微粒!选择HIGH4如果接种样品中含有难以杀灭的细菌如革兰氏阳性芽孢菌!选择G9JHK4H!+&)%)’!将装有样液的样品杯!放到样品杯架的左上角位置!样液液面和样品架平齐&)%)(!按下!44键!仪器将按顺序开始清洗!吸入样液和接种平板&)%))!在接种针消毒和进样的时候!在琼脂平板侧面标记一条线!将平板放在旋转台上!侧面标记线对准接种起始线&)%)*!此时旋转台旋转!接种针降到琼脂上方!呈放射状向外移动同时!注射器活塞向下移动!将样液接种到平板上&)%)$!接种结束后!小心取下平板!盖上盖子!放置在水平台子上!注意不要倾斜!等琼脂表面干燥后再倒置培养&)%)#!如果还要接种平板!重复)’)/)’)(&)%)%!实验结束后!将装有%,乙醇的样品杯放置于样品杯架的左上角位置!运行一次强力清洗程序!吸入乙醇%乙醇不够再加&!直至整个管道系统充满为止&)%)%%!关闭仪器电源!取下三个溶液池和废液瓶!清洗!消毒&)%)%!!用软布或纸巾蘸玻璃清洁液$不锈钢清洁液或%,乙醇擦拭仪器表面!盖上防尘罩&)!!仪器自动计数操作步骤&)!)%!打开计数仪!显示器和电脑主机的电源&)!)!!在桌面上双击LM6NBO的图标&)!)&!输入用户名和密码&)!)’!建立或打开数据库&)!)(!进入软件界面&)!))!移走平板的盖子!将平板放在平板正中导向装置内&)!)*!在平板工具栏内!在*6NPMQ下拉框内选择平板的接种类型大小设置为3AB#,)’和38R#0,&)!)$!在相机工具栏!选择$6@或6OO63光源!如果菌落颜色比培养基浅!选择4A5CO676BAQS!反之则不选选择适当的*CNOOQP*@QQT!使菌落和培养基对比最清楚&)!)#!如果是倾注或涂布平板!置*83@7QU67N3Q和!PQ8VN7OA@7AQP&)!)%!根据需要更改46W6NBO值!如果使用!NO6G78OQ接种仪!在#PAT中选择*@AP87如果需要阅读平板时缩小分析区域则选择KQTNMQKQ5A6B!同时在!PQ8VN7OA@7AQP输入.),,!!’&!本标准的验证是采用美国*X公司生产的!NO6@78OQ;,,,YLM6NBO全自动螺旋接种计数系统进行的!其他同类仪器经评估后采用.!!#!#$!$&)!)%%!如果是螺旋平板!在螺旋工具栏内设置G78OQP为!NO6@78OQ!在V6TQ中选择接种模式&)!)%!!主屏幕图像区域!在G78OQXZ输入用户定义的编号&)!)%&!在ZA7NOA6B内输入样品稀释倍数的对数值&)!)%’!如果是LM6NBO计数系统!单击6NBO676PLM6NBO计数系统单击$6O876NBO&)!)%(!6NBOESQT和DE’34会出现在图像左边&)!)%)!如果平板上有部分菌落计数有错误!在平板图像上单击鼠标右键!进入HTAO676BAQS!修正结果&)!)%*!如果该计数平板还有平行样平板要计数!点击*8[Q#+QROAS下的KQ@!保存结果!反之点击*8[Q#+QROAS下的+QW&)!)%$!如果还有平板需要计数!重复\0\-\0\’%&)!)%#!计数结束后!关闭计数仪$显示器$电脑的电源!用软布或纸巾蘸玻璃清洁液$不锈钢清洁液或%,乙醇擦拭仪器表面!盖上防尘罩&)&!不同接种模式的计数范围!NO6@78OQ;,,,YLM6NBO全自动螺旋接种计数系统不同接种模式的计数范围见表)’%以接种’,,33平板为例&表&)%!不同接种模式的计数范围接种模式起始半径’33旋转间距’33接种时间’S体积’#4计数范围’%DE’34&指数.,#4’/),’/.)0.,),,;),]’,0;),]’,.缓慢指数.,#48’/),’/()..,),,;),]’,0;),]’,.指数’,,#4’/),’/().’,,),,0),]’,00),]’,.均一0,#4’/),’/.)00,),,’),]’,/’).]’,;均一’,,#4’/),’/.)0’,,),,0),]’,0/),]’,/均一0.,#4’/),’/.)00.,),,(),]’,’’)0]’,/草坪模式^%)//;’;),0,),,比例模式M’/),’/.)00,),,!!8接种有机化合物!或使用湿的平板时使用!防止旋转外圈的样品在向心力的作用下流向旋转内圈!!^在需要底物或细菌在平板上确切