DB14∕T 1506-2017 大豆皂苷测定方法

ICS65.020.20B05DB14山西省地方标准DB14/T1506—2017大豆皂苷测定方法2017-12-10发布2018-02-10实施山西省质量技术监督局发布DB14/T1506—2017I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13术语和定义........................................................................14化学结构..........................................................................15测定原理..........................................................................26试剂..............................................................................27仪器设备..........................................................................28测定步骤..........................................................................29结果计算..........................................................................310重复性...........................................................................4DB14/T1506—2017II前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山西农业大学提出并归口。本标准起草单位：山西农业大学农学院。本标准主要起草人：岳爱琴、杜维俊、赵晋忠、王敏、徐海军、张永坡、高春艳、郭东东、刁秀楠。DB14/T1506—20171大豆皂苷测定方法1范围本标准规定了大豆皂苷测定的术语和定义、化学结构、测定原理、试剂、仪器设备、测定步骤、计算结果和重复性。本标准适用于大豆种子、根、茎、叶以及种皮中大豆皂苷的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T22464大豆皂苷NY/T1252大豆异黄酮3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1大豆皂苷大豆中的一类重要的次生代谢产物，是由大豆皂醇A和大豆皂醇B两种苷元和β-D-葡萄糖、β-D-半乳糖、β-D-木糖、β-D-葡萄糖醛酸、α-L-鼠李糖、α-L-阿拉伯糖六种糖基及其乙酰化糖基等组成的五环三萜齐墩果酸型皂苷。4化学结构大豆皂苷根据结构不同将其分为A类、DDMP类、B类和E类皂苷，见表1。皂苷组分的化学结构见图1。表1大豆皂苷组成的种类-RA类皂苷DDMP类B类E类Aa系列Ab系列A0系列1.β-D-葡萄糖基-(1→2)-O-β-D-半乳糖AaAbA0-αgαgBaBd2.β-L-鼠李糖基-(1→2)-O-β-D-半乳糖AuAcA0-βgβgBbBe3.β-D-半乳糖AeAfA0-γgγgBb′Be′4.β-D-葡萄糖基-(1→2)-O-α-L-阿拉伯糖AxAdA0-αaαaBxBf5.β-D-鼠李糖基-(1→2)-O-β-D-阿拉伯糖AyAzA0-βaβaBcBg6.α-L-阿拉伯糖AgAhA0-γaγaBcBgDB14/T1506—20172图1皂苷组分的化学结构5测定原理大豆皂苷溶液在波长205nm处有最大吸收峰，在一定范围内，峰面积与大豆皂醇的浓度成正比关系。6试剂6.1试剂6.1.1超纯水，乙醇（分析纯），冰乙酸（分析纯），乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），冰乙酸（色谱纯）。6.1.2提取液（含0.01%乙酸的70%乙醇溶液）：取700mL无水乙醇加0.1mL冰乙酸，然后加水稀释至1000mL。6.2标准品6.2.1大豆皂苷Aa（98%）、大豆皂苷Ab（98%）、大豆皂苷Ba（98%）、大豆皂苷Bb（98%）。6.2.2大豆皂苷标准液：准确称取大豆皂苷标准品Aa、Ab、Ba、Bb各5mg，置于5mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。大豆皂苷标准品含量为1mg/mL。7仪器设备所需仪器设备包括：a)具有紫外检测器的高效液相色谱-质谱联用仪；b)振动球磨仪；c)感应量为0.0001g的电子天平；d)漩涡震荡仪；e)台式离心机。8测定步骤DB14/T1506—201738.1提取提取步骤如下：a)将大豆各材料置于震荡研磨仪中，1600rpm震荡30s，材料备用；b)准确称取0.100g样品，放入10mL的离心管中，加入5mL提取液（70%乙醇+0.01%乙酸）；c)放入漩涡振荡器中，漩涡震荡2min，浸提24h；d)室温下3000r/min离心10min；取上清液2mL，用2倍体积的正己烷萃取脱脂，用0.22μm滤膜过滤后密封保存备用。8.2高效液相色谱-电喷雾质谱联用仪分析条件8.2.1色谱柱：HypersilGold，150×2.1mm，5μm；柱温为30℃。8.2.2流动相比例见表2，A为含0.025％冰乙酸的乙腈溶液，B为含0.025％冰乙酸的超纯水溶液。表2流动相比例时间/t/min0152025303540A(%)907060600090B(%)10304040100100108.2.3流速：1.0mL/min。8.2.4检测器：二极管阵列检测器，205nm波长。8.2.5进样体积：10µL。8.2.6电喷雾质谱条件：——质谱扫描：负离子扫描模式；——扫描范围：400～1500；——喷雾电压为：3.5kV；——鞘气的压力：30psi；——辅助气的压力：5psi；——毛细传输管温度：350℃。8.3色谱测定在相同色谱条件下，分别将标准溶液和样品溶液注入高效液相色谱-质谱仪分析，运行完之后采用选择性离子抽提模式抽提大豆皂苷各组分的离子色谱图，以质荷比定性，根据4个标准品的标准曲线以峰面积进行定量。9结果计算9.1A系列皂苷单体组分的计算A系列皂苷单体组分的计算，见公式（1）。DB14/T1506—20174式中：Xi——样品中大豆皂苷组分的含量（ug/g）；Xa——大豆皂苷标准品Aa的含量（ug/mL）；Ma——大豆皂苷标准品Aa的峰面积；V——样品总体积，单位为微升（mL）；M——样品质量，单位为克（g）。计算结果保留三位有效数字。9.2B系列、DDMP系列和E系列皂苷单体组分的计算B系列、DDMP系列和E系列皂苷单体组分的计算，见公式（2）。Xi——样品中大豆皂苷组分的含量（ug/g）；Xa——大豆皂苷标准品Ba的含量（ug/mL）；Ma——大豆皂苷标准品Ba的峰面积；V——样品总体积，单位为微升（mL）；m——样品质量，单位为克（g）。计算结果保留三位有效数字。10重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。_________________________________