DB41∕T 1703-2018 鸡血样与组织样品采集技能操作规范

ICS11.220B41DB41河南省地方标准DB41/T1703—2018鸡血样与组织样品采集技能操作规范2018-09-29发布2018-12-29实施河南省质量技术监督局发布DB41/T1703—2018I前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省畜牧局提出并归口。本标准起草单位：驻马店市动物疫病预防控制中心、驻马店市兽药饲料（动物产品）质量检验监测中心、西平县动物疫病预防控制中心、西平县兽医院、遂平县动物疫病预防控制中心、平舆县动物卫生监督所、正阳县动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：付显东、杨晴、薛双、朱凤霞、刘萌、陈奎、路方、陶顺启、郭小玲、王艳、罗志忠、杨洋、王学敏、赵新建、王德清、孙国松、马萌萌。DB41/T1703—20181鸡血样与组织样品采集技能操作规范1范围本标准规定了鸡翅静脉采血、心脏采血、咽喉/泄殖腔拭子采样、解剖与采样的技术与操作规范。本标准适用于鸡病诊断、流行病学调查、疫情监测、疫苗免疫效果评估、活鸡调运、评估认证等鸡血样和组织样品的采集。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3术语和定义该标准界定的下列术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了NY/T541中的某些术语和定义。3.1样品取自动物或环境，拟通过检验反映动物个体、群体或环境有关状况的材料或物品。3.2采样按照规定的程序和要求，从动物或环境取得一定量的样本，并经过适当的处理，留作待检样品的过程。4个人防护采样人员应做好个人安全防护，穿戴口罩、工作帽、防护服、防护靴、双层手套，必要时戴防护眼镜、面罩。5采样原则5.1先排除后采样凡发现急性死亡的动物，怀疑患有炭疽时，不得解剖。应先采集血样，进行血液抹片镜检，确定不是炭疽后，方可解剖采样。5.2合理选择采样方法5.2.1应根据采样的目的，内容和要求合理选择样品采集的种类、数量、部位与抽样方法。样品数量应满足流行病学调查和生物统计学的要求。DB41/T1703—201825.2.2诊断或被动监测时，应选择症状典型成病变明显或有患病征兆的畜禽，疑似污染物；在无法确定病因时，采样种类应尽量全面。5.2.3主动监测时，应根据畜禽日龄，季节、周边疫情情况估计其流行率，确定抽样单元。在抽样单元内，应遵循随机取样原则。5.3采样时限采集亡动物的病料，应于动物死亡后2h内采集，无法完成时，夏天不得超过6h，冬天不得超过24h5.4无菌操作采样过程应注意无菌操作，刀，剪、摄子，器皿，注射器，针头等采样用具应事先严格灭菌，每种样品应单独采集。5.5尽量减少应激和损害活体动物采样时，应避免过度刺激或害动物；也应避免对采样者造成危害。5.6生物安全防护采样人员应加强个人防护，严格遵守生物安全操作的相关规定，严防人兽共患病感染：同时，应做好环境消毒以及动物或组织的无害化处理，而免污染环境，防止疫病传播。6翅静脉采血6.1采样准备采样箱、保温箱或保温瓶、酒精棉、干棉球、碘伏、镊子、采血器、离心管及自封袋、签字笔、记号笔、样品采集登记表、垃圾袋和防护用品。6.2保定及消毒侧卧保定，展开翅膀，露出腋窝部，拔掉羽毛，在翅下静脉处用碘伏棉球由里向外做点状螺旋式消毒。6.3采样6.3.1拇指压迫近心端，待血管怒张后，用采血器，平行刺入翅静脉，放松对近心端的按压，把针芯向外缓慢拉，使血液流入采血器；6.3.2拔出针头后用干棉球压迫止血；6.3.3采血后，将采血器活塞外拉预留血清析出空间。将采血器套上护针帽，去除推杆；6.3.4对所采样品进行编号并放入保温箱或保温瓶；6.3.5填写样品采集登记表（见附录A）。7心脏采血7.1采样准备采样箱、保温箱或保温瓶、酒精棉、碘酒棉、镊子、采血器、离心管及自封袋、签字笔、记号笔、样品采集登记表、垃圾袋和防护用品等。DB41/T1703—201837.2消毒选定采血部位，用碘伏棉球由里向外做点状螺旋式消毒。7.3采样7.3.1侧卧保定采血抓住两翅及双腿，右侧卧保定，在触及心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的1/2处垂直或稍向前方刺入2cm～3cm处插入，回抽见有回血时，顺着心脏的跳动频率把针芯向外缓慢拉，使血液流入采血器。7.3.2仰卧保定采血将鸡仰卧保定，使鸡胸骨朝上，用手指压迫嗉囊，露出胸前口，用装有长针头的采血器，将针头沿其锁骨俯角刺入，顺着体中线方向水平刺入心脏，回抽见有回血时，顺着心脏的跳动频率把针芯向外缓慢拉使血液流入采血器。7.3.3拔出针头后用干棉球压迫止血；7.3.4采血后，将采血器活塞外拉预留血清析出空间。将采血器套上护针帽，去除推杆；7.3.5在采血器上标明样品编号并将样品保存至保温箱或保温瓶；7.3.6填写样品采集登记表（见附录A）。8咽喉/泄殖腔拭子采样8.1采样准备棉拭子、离心管及自封袋、PBS（见附录B）、保温箱或保温瓶、样品采集登记表、记号笔、签字笔、垃圾袋等。8.2采样8.2.1无菌棉拭子插入咽喉及上颚裂处来回刮3～5次取咽喉分泌物。8.2.2无菌棉拭子插入泄殖腔约1.5cm～2.0cm，旋转2～3圈后粘上粪便。8.2.3将棉拭子放入含有PBS的1.5mL塑料离心管中，盖上管盖。8.2.4对所采样品进行编号并放入保温箱或保温瓶。8.2.5填写样品采集登记表（见附录A）。9解剖与采样9.1采样准备注射器、普通剪刀、手术剪、酒精棉球、酒精灯、火柴、托盘、镊子、自封袋、尸体袋、保温箱或保温瓶、消毒液桶、样品采集登记表、记号笔、垃圾袋等。活鸡，无放血致死。9.2消毒9.2.1解剖前将鸡放在消毒液中完全浸湿。9.2.2暴露皮下组织和肌肉后用酒精棉球沿切口方向擦拭消毒鸡体。DB41/T1703—201849.2.3每剪开一个部位或采集完一种组织均用酒精棉球擦拭、火焰消毒剪刀两面和镊子。9.3采样9.3.1鸡放入托盘，先将腹壁和大腿内侧的皮肤切开，用力将大腿按下，使髋关节脱臼，将两大腿向外展开，从而固定鸡体；9.3.2于胸骨末端后方将皮肤横切，与两侧大腿的竖切口连接，然后将胸骨末端后方的皮肤拉起，向前分离到头部，使整个胸腹及颈部的皮下组织和肌肉充分暴露；9.3.3在胸骨后腹部横切穿透腹壁，从胸骨两侧向前方剪断肋骨和乌喙骨，然后将胸骨用力向上向前翻转，暴露体腔；9.3.4无菌采集各种组织，采样顺序一般是先采集肝脏，然后依次采集脾脏、肾脏、肺脏等组织，每种样品均不能夹带毛、胆囊或其他杂质；9.3.5沿口腔向下剪开颈部皮肤肌肉，使喉头暴露，采集喉头气管；9.3.6剪开头部皮肤，打开头骨，采集脑组织；9.3.7每种样品分别装入自封袋密封，采样完毕后将尸体装入尸体袋；9.3.8对所采样品进行编号并放入保温箱或保温瓶；9.3.9填写样品采集登记表（见附录A）。DB41/T1703—20185附录A（规范性附录）样品采集登记表样品采集登记表见表A.1。表A.1样品采集登记表被采样单位名称采样地点联系人联系电话邮编动物类别样品类型采样日期动物种类日龄存栏量样品数量样品编号动物临床情况动物免疫情况免疫病种疫苗类型疫苗厂家疫苗批号免疫次数末次免疫剂量末次免疫至采样的间隔天数检测目的被采样单位盖章或签名年月日采样单位盖章采样人签名年月日备注注1：样品类型指全血、咽喉/泄殖腔拭子、组织样品等。注2：动物种类指种鸡、蛋鸡、肉鸡等。注3：此单一式三份，第一联由采样单位保存、第二联随样品、第三联由被采样单位留存。DB41/T1703—20186附录B（规范性附录）PH7.2、0.01mol/LPBS的配制（1）配制25×PBS：称量2.74g磷酸氢二钠和0.79g磷酸二氢钠加蒸馏水至100mL。（2）配制1×PBS：称量40mL25×PBS，加入8.5g氯化钠，加蒸馏水至1000mL。（3）用氢氧化钠或盐酸调PH至7.2.（4）灭菌或过滤。（5）PBS一经使用，于4℃保存不超过3周。_______________________________