DB41∕T 1614-2018 单孢杂交平菇品种选育技术规程

ICS65.020.20B05DB41河南省地方标准DB41/T1614—2018单孢杂交平菇品种选育技术规程2018-06-19发布2018-09-19实施河南省质量技术监督局发布DB41/T1614—2018I前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省农业科学院提出并归口。本标准起草单位：河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所。本标准主要起草人：孔维丽、康源春、张玉亭、袁瑞奇、孔维威、胡素娟、刘芹。本标准参加起草人：韩玉娥、段亚魁、宋志波、徐柯、崔筱、孟庆涛。DB41/T1614—20181平菇单孢杂交品种选育技术规程1范围本标准规定了单孢杂交平菇品种选育技术的术语和定义、亲本选择、单核菌丝的制备、单孢杂交、新菌株筛选、鉴定和保藏。本标准适用于平菇单孢杂交新品种的选育。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T1003—2008普通用途双向拉伸聚丙烯（BOPP）薄膜GB/T4456—2008包装用聚乙烯吹塑薄膜GB5749—2006生活饮用水卫生标准GB/T12728—2006食用菌术语GB/T21125—2007食用菌品种选育技术规程NY/T119—1989饲料用小麦麸NY/T528—2010食用菌菌种生产技术规程NY/T1844—2010农作物品种审定规范食用菌NY5099—2002无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求NY5358—2007无公害食品食用菌产地环境条件JC/T479—2013建筑生石灰DB41/T1211—2016平菇发酵料栽培技术规程DB41/T1186—2015平菇熟料栽培技术规程农业部第62号令《食用菌菌种管理办法》2006年3术语和定义GB/T12728—2006和GB/T21125—2007界定的术语和定义适用于本文件。3.1担孢子经核配和减数分裂后在外生于担子上形成的孢子。3.2单孢子分离法通过分离单个孢子以获得真菌纯培养物的方法。3.3菌株由单一细胞个体通过无性繁殖形成的纯培养物及其后代。3.4DB41/T1614—20182品种人工选育或发现并改良，具备特异性、一致性、稳定性，具有符合《农业植物品种命名规定》的品种名称。3.5对照品种目前生产上常用的主栽品种。4亲本选择选择生物学性状优势互补、亲缘关系较远、生态差异大、特异性差异显著的菌株为亲本。5单核菌丝的制备5.1孢子收集挑选第一茬菇颜色均匀、菇型完整，能够代表亲本菌株生物学特性的8成熟整朵子实体为种菇，选取其中1～2片菌盖为种菇，放置在干燥洁净与孢子颜色有差异的纸张上，折叠存放，保持环境温度24℃～26℃，湿度55%～65%，放置12h～18h，即可得到孢子印。5.2单孢分离5.2.1一步稀释法无菌针挑取0.1mm×0.1mm孢子印于灭菌后的400mL无菌水内，混合均匀，吸取1mL孢子混合液移入PDA培养基内，旋转培养皿，使悬浮液铺满培养基表面。5.2.2梯度稀释法250mL三角瓶加入100mL纯净水灭菌备用，无菌接入一环平菇孢子，摇匀。选用4～5支20ml试管灭菌备用，每支试管内加入9mL无菌水，吸取1mL孢子悬浮液加入1号试管内摇匀，吸取1mL1号试管内孢子悬浮液加入2号试管内，稀释至10-4～10-6，显微镜镜检，以视野内保留4～5个孢子为宜，吸取1mL孢子悬液移入PDA培养皿内，旋转培养皿，使悬浮液铺满整个皿内培养基表面。5.3单孢鉴定5.3.1插片培养将接有孢子悬浮液的培养皿，放置于25℃培养箱培养5d～6d，肉眼能见孢子萌发，取灭菌后的0.5μL～10μL移液枪枪头，垂直对准萌发的孢子，扎取，携带培养基转入新的PDA培养皿内，25℃培养7d。萌发后的菌丝再转接至新的培养皿内，距接种点0.5cm处，插入无菌盖玻片，25℃培养，以30～40个培养皿为宜。5.3.2显微镜检取洁净载玻片滴入0.5mL去离子水或棉蓝染色液，取出长至盖玻片1cm的菌丝，覆盖至载玻片，去除多余水分，放置2min后镜检。高倍镜头下，观察菌丝是否有锁状联合，有锁状联合现象即为双核菌丝，保留单核菌丝。5.4单核菌丝挑选DB41/T1614—20183观察平菇单核菌丝长势，大致分为4种类型，每个类型挑选1～3个单核菌丝，总量以不超过10个为宜。6单孢杂交6.1对峙培养分别将两个不同亲本的单核菌丝接种于培养皿内，两者相距1cm，25℃培养8d～10d，对峙培养区有拮抗线，表明杂交成功。6.2杂合子培养拮抗线两侧1cm处，用接种刀切割成0.5mm2菌块，挑取4～5块菌分别转接至新的培养皿培养基内，25℃培养7d～8d。杂交后获得大量的杂合子，插片培养，显微镜检，保留有锁状联合的杂合子。6.3杂合子鉴定杂合子与两个亲本、杂合子之间通过拮抗试验，筛选出不同的菌株即为杂交菌株，进入初选栽培试验。7菌株筛选7.1初选7.1.1菌袋制作培养料配方：棉籽壳98%，石灰2%，采用14×28cm聚丙烯袋，菌袋质量应符合GB/T1003-2008要求。一端封口，高压灭菌，无菌接种，每个菌株10～15袋。23℃～25℃培养，观察菌丝生长情况。7.1.2出菇管理大棚出菇，保持棚内温度10℃～28℃，空气相对湿度75%～95%，二氧化碳浓度600mg/L以下，自然光照，一端出菇，记录出菇时间、子实体形状、颜色、出菇整齐度、抗杂性、抗病性、产量等。7.1.3优良菌株筛选根据选育目标设定挑选指标，初选出颜色适宜、总产量高产、抗性强的杂交菌株，进入栽培试验。7.2复筛复试采用大棚栽培和设施化栽培，可平行进行，需要2～3个生产周期，每个菌株90～100袋（瓶），通常以2个亲本菌株为对照。7.2.1大棚栽培7.2.1.1熟料栽培适宜周年栽培。按DB41/T1186—2015的规定执行，比较参试菌株之间菌丝长势、出菇早晚、出菇温度、抗病性、抗杂性、产量、生物学效率、子实体性状、出菇率等，筛选出综合性状超过亲本或与亲DB41/T1614—20184本相当的杂交菌株为优良菌株。7.2.1.2发酵料栽培适宜秋冬季栽培。按DB41/T1211—2016的规定执行，比较参试菌株之间菌丝长势、出菇早晚、出菇温度、抗病性、抗杂性、产量、生物学效率、子实体性状、出菇率等，筛选出综合性状超过亲本或与亲本相当的杂交菌株为优良菌株。7.2.2工厂化栽培栽培容器采用质量符合GB/T1003—2008规定的1100ml塑料瓶及质量符合GB/T1003—2008规定折经18～20×38×0.005cm聚丙烯袋为宜，栽培原料应符合NY5099—2002的规定，选用适宜的配方，采用机械化装袋（瓶）、高压灭菌、强制降温、无菌接种、适温集中培养、后熟技术，在可控的温度、湿度、光照强度、二氧化碳浓度条件下集中出菇管理，记录菌丝满瓶时间、出菇早晚、出菇率、一茬菇产量、生物学特性等特征。筛选出一茬菇生物学效率大于50%并超过亲本的菌株为优良菌株。7.3生产筛选生产筛选试验一般安排1～2生产周期，栽培数量以500袋为宜，以生产上主栽品种对照品种。7.3.1大棚栽培采用熟料、发酵料发酵料栽培模式，按7.2.1.1、7.2.1.2的规定执行，比较各个菌株间菌丝长势、出菇时间、抗病性、抗杂性、产量、生物学效率、品质等，筛选出产量超过对照菌株或产量相当品质等其他性状优于对照的菌株为优良菌株。7.3.2工厂化栽培以现有高产、亲本菌株为对照菌株，按照7.2.2执行，筛选出一茬出菇率、一茬菇产量、一茬菇生物学效率超过对照菌株即为优良菌株。8品种鉴定与登记8.1特异性鉴定送至有检验检测资质的单位做特异性检测，具有遗传特异性的菌株为新菌株。8.2品种登记通过申报、审查并获得植物新品种权保护证书。8.3品种鉴定通过河南省农业厅种子管理站农作物品种鉴定要求，并获得河南省农作物品种鉴定证书。9菌种保藏采用短期和长期两种保藏方式，短期保藏采用低温斜面保藏法为宜，长期保藏采用液氮冷冻保藏法为宜。_________________________________