DB61∕T 1138-2018 水质 粪大肠菌群的测定 酶底物法

ICS13.060.70Z16DB61陕西省地方标准DB61/T1138—2018水质粪大肠菌群的测定酶底物法WaterqualityDeterminationoffecalcoliformsEnzymesubstratemethod2018-04-12发布2018-05-12实施陕西省质量技术监督局发布DB61/T1138—2018I目  次前‾‾言...............................................................................................................................................................II1范围...................................................................................................................................................................12规范性引用文件...............................................................................................................................................13术语和定义.......................................................................................................................................................14方法原理...........................................................................................................................................................15试剂与材料.......................................................................................................................................................16仪器与设备.......................................................................................................................................................27样品...................................................................................................................................................................28分析步骤...........................................................................................................................................................39结果计算与表示...............................................................................................................................................410质量保证和质量控制.....................................................................................................................................511废物处理.........................................................................................................................................................5附录A（资料性附录）酶底物法培养基的基本成分.................................................................................6附录B（规范性附录）粪大肠菌群检数表..................................................................................................7附录C（规范性附录）51孔定量孔板MPN表.............................................................................................8附录D（规范性附录）97孔定量孔板MPN表.............................................................................................1DB61/T1138—2018II前‾‾言本标准按照GB/T1.1—2009和HJ168—2010给出的规则起草。本标准由陕西省环境监测中心站和陕西省环境保护厅提出。本标准由陕西省环境保护厅归口。本标准起草单位：陕西省环境监测中心站。本标准主要起草人：许锋、张会强、刘敏、周弛、吴卫东、马文鹏、张秦铭、宁西翠、许伊蕾、张静雪。本标准由陕西省环境监测中心站负责解释。本标准首次发布。联系信息如下：单位：陕西省环境监测中心站电话：[phone]地址：陕西省西安市雁塔区西影路106号邮编：710054DB61/T1138—20181水质粪大肠菌群的测定酶底物法1范围本标准规定了水中粪大肠菌群测定的酶底物法的术语和定义、方法原理、试剂与材料、仪器与设备、样品、分析步骤、结果计算与表示、质量保证和质量控制、废物处理的要求。本标准适用于地表水、生活污水和废水中粪大肠菌群的测定。当接种量为300mL时，方法的检出限为3MPN/L，检测范围为3MPN/L～230MPN/L；当接种量为100mL时，方法的检出限为10MPN/L，采用51孔定量孔板的检测范围为10MPN/L～2005MPN/L，采用97孔定量孔板的检测范围为10MPN/L～24196MPN/L。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其昀新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T5750.12生活饮用水标准检验方法微生物指标GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1粪大肠菌群fecalcoliforms粪大肠菌群，又称耐热大肠菌群（thermotolerantcoliforms）。是一种通常在44.5℃下培养发酵乳糖产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。3.2最可能数mostprobablenumber；MPN基于泊松分布的一种间接计数方法。4方法原理粪大肠菌群在邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）培养基上培养产生β-D-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase），该酶可以分解色源底物释放出黄色的邻硝基苯酚，通过颜色变化定性，MPN法定量。5试剂与材料DB61/T1138—201825.1除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。5.2培养基选择市售商品化酶底物法试剂，或自行配制培养基，基本成分参照附录A。5.3硫代硫酸钠（Na2S2O3）。5.4乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）。5.5氯化钠（NaCl）。5.6硫代硫酸钠溶液：ρ（Na2S2O3）＝0.10g/mL。注：称取硫代硫酸钠（5.2）10g，适量水溶解，定容至100mL，临用现配。5.7乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液：ρ（C10H14N2O8Na2·2H2O）＝0.15g/mL。注：称取乙二胺四乙酸二钠（5.3）15g，适量水溶解，定容至100mL，摇匀，常温下可存放30d。5.8灭菌生理盐水:ρ（NaCl）=0.9%（m/v）。注：称取氯化钠（5.4）0.9g，适量水溶解，定容至100mL，经121℃高压蒸汽灭菌20min，备用。6仪器与设备6.1采样瓶：500mL棕色磨口玻璃瓶。6.2恒温培养箱：44.5℃±0.5℃。6.3高压蒸汽灭菌器：121℃、0.101Mpa。6.4冰箱：0℃～4℃。6.5恒温干燥箱：0℃～300℃。6.6程控定量封口机：带51孔和97孔胶托。6.751孔和97孔定量孔板：无菌。6.8100mL无菌取样瓶。6.9试管：Φ15mm×150mm，带透气胶塞。6.10标准阳性比色盘。6.11移液管：1mL、10mL，也可采用体积可调式移液器。6.12锥形瓶：500mL。6.13量筒：100mL。6.14移液管、试管、量筒、采样瓶等均需包扎后经121℃高压蒸汽灭菌20min，备用。7样品7.1样品采集7.1.1与其他项目一同采样时，先单独采集微生物样品。采样瓶（6.1）不得用水样洗涤，按照无菌操作的要求采集水样于灭菌的采样瓶中。7.1.2采集江、河、湖、库等地表水时，可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中，距水面约10cm～15cm处，瓶口朝水流方向，拔玻璃瓶塞，使水样灌入瓶内然后盖上瓶塞，将采样瓶从水中取出。如果没有水流，可握住瓶子水平前推。采样后瓶内要留足够的空间，一般采样量为采样瓶容量的80%左右。采好水样后，迅速盖好瓶盖并扎上无菌包装纸。7.1.3从龙头装置采集样品时，要选用完好无损的龙头，采水前将龙头打开至昀大，放水3min～5min；然后将龙头关闭，用火焰灼烧约3min灭菌，开足龙头，再放水1min。采样时控制水流速度。7.1.4采集地表水、废水样品及一定深度的水样时，可使用灭菌过的专用采样装置采样。在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行。DB61/T1138—201837.2样品保存样品在10℃以下冷藏运输，运输时间不超过6h。实验室接样后不能立即展开检测的，应将样品放入0℃～4℃冰箱（6.4）保存，在2h内检测。7.3干扰和消除酸性样品，应在分析前按无菌操作要求调节样品pH值至7.0～8.0。在采样瓶灭菌前加入0.4mL硫代硫酸钠溶液（5.5）以除去余氯对细菌的抑制作用；在采样瓶灭菌前加入1.2mL乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液（5.6）以除去重金属对细菌的抑制作用。8分析步骤8.1水样接种量水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样的接种量，水样的接种量可参考表1。表1水样接种量参考表水样类型接种量（mL）30010010110-110-210-310-410-510-6地表水（湖、库）▲▲地表水（江、河）▲▲▲生活污水▲▲废水（工业废水）▲▲废水[医疗机构排放污水（处理前）]▲▲废水[医疗机构排放污水（处理后）]▲▲▲废水(畜禽养殖业等排放废水)▲▲注：接种量为10-1～10-