DB61∕T 1001.5-2015 保健用品微生物限度检查 第5部分霉菌和酵母菌数测定

ICS11.020C50DB61陕西省地方标准DB61/T1001.5—2015保健用品微生物限度检查第5部分：霉菌和酵母菌数测定MicrobiallimitexaminationforhealthcaresuppliesPart5：Testsformyceteandsaccharomycete2015-12-29发布2016-03-01实施陕西省质量技术监督局发布DB61/T1001.5—2015I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13设备和材料........................................................................14培养基和试剂......................................................................15操作步骤..........................................................................26结果和报告........................................................................2DB61/T1001.5—2015II前言DB61/T1001《保健用品微生物限度检查》分为以下5个部分：——第1部分：总则；——第2部分：菌落总数测定；——第3部分：铜绿假单胞菌检验；——第4部分：金黄色葡萄球菌检验；——第5部分：霉菌和酵母菌数测定。本部分为DB61/T1001的第5部分。DB61/T998《保健用品安全性评价指导原则及试验方法》与DB61/T999《保健用品功能学评价指导原则及试验要求》、DB61/T1000《保健用品产品标准编写规范》、DB61/T1001《保健用品微生物限度检查》共同构成了陕西省保健用品系列地方标准。下面列出了这些地方标准的结构：a)DB61/T998《保健用品安全性评价指导原则及试验方法》分为以下6个部分：1)第1部分：安全性评价指导原则；2)第2部分：皮肤急性毒性试验；3)第3部分：皮肤长期毒性试验；4)第4部分：皮肤刺激性试验；5)第5部分：皮肤过敏性试验；6)第6部分：眼部刺激性试验。b)DB61/T999《保健用品功能学评价指导原则及试验要求》分为以下16个部分：1)第1部分：总则；2)第2部分：改善微循环类功能学评价动物试验；3)第3部分：改善微循环类功能学评价人体试验；4)第4部分：乳房保健类功能学评价动物试验；5)第5部分：乳房保健类功能学评价人体试验；6)第6部分：胃肠功能保健-助消化类功能学评价动物试验；7)第7部分：胃肠功能保健-助消化类功能学评价人体试验；8)第8部分：胃肠功能保健-通便类功能学评价动物试验；9)第9部分：胃肠功能保健-通便类功能学评价人体试验；10)第10部分：皮肤瘙痒类功能学评价动物试验；11)第11部分：皮肤瘙痒类功能学评价人体试验；12)第12部分：妇女卫生保健类功能学评价动物试验；13)第13部分：妇女卫生保健类功能学评价人体试验；14)第14部分：眼部保健类功能学评价人体试验；15)第15部分：改善睡眠、醒脑通窍保健类功能学评价动物试验；16)第16部分：改善睡眠、醒脑通窍保健类功能学评价人体试验。c)DB61/T1000《保健用品产品标准编写规范》分为以下8个部分：1)第1部分：总则；2)第2部分：保健贴类产品标准编写规范；DB61/T1001.5—2015III3)第3部分：眼贴类产品标准编写规范；4)第4部分：含药芯类产品标准编写规范；5)第5部分：喷涂类产品标准编写规范；6)第6部分：清洗液类产品标准编写规范；7)第7部分：器具类产品标准编写规范；8)第8部分：功能服装类产品标准编写规范。本部分根据GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由陕西省食品药品监督管理局提出并归口。本部分起草单位：陕西省食品药品监督管理局、陕西省质量技术监督局。本部分主要起草人：杨晓莉、乔蓉霞、李伟、张扬。本部分由陕西省食品药品监督管理局负责解释。本部分首次发布。联系信息如下：单位：陕西省食品药品监督管理局电话：[phone]地址：西安市高新六路56号邮编：710065DB61/T1001.5—20151保健用品微生物限度检查第5部分：霉菌和酵母菌数测定1范围DB61/T1001的本部分规定了保健用品中霉菌和酵母菌数的测定方法。本部分适用于陕西省保健用品中霉菌和酵母菌数的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。DB61/T1001.1-2015保健用品微生物限度检查第1部分:总则3设备和材料对保健用品进行霉菌和酵母菌数的测定时，除应具备微生物实验室常规灭菌和培养设备外，其他设备和材料应符合以下规定的要求：a)霉菌培养箱：温度应控制在28℃±1℃；b)恒温水浴箱：温度应控制在46℃±1℃；c)冰箱：温度应控制在2℃～5℃；d)高压灭菌锅；e)电子天平：感量为0.1g；f)电磁炉；g)振荡器或均质器；h)灭菌吸管：容量为1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）；i)丝口瓶或锥形瓶：容量为250mL、500mL；j)灭菌培养皿：直径为90mm；k)pH计或精密pH试纸；l)放大镜或/和菌落计数器。4培养基和试剂4.1无菌生理盐水无菌生理盐水应符合DB61/T1001.1-2015中3.6.3规定的要求。4.2孟加拉红培养基4.2.1孟加拉红培养基制备材料的种类和量应符合以下要求：a)蛋白胨：5g；b)葡萄糖：10g；c)磷酸二氢钾：1g；DB61/T1001.5—20152d)硫酸镁（无水）：0.5g；e)琼脂：20g；f)孟加拉红：0.033g；g)氯霉素：0.1g；h)蒸馏水：1000mL。4.2.2孟加拉红培养基的制备方法应为：将上述各成份（不包含氯霉素）加入蒸馏水中，加热溶化，补足蒸馏水至1000mL，分装后，121℃灭菌20min。倾注于平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。5操作步骤5.1样品的稀释5.1.1应按照DB61/T1001.1-2015中4.4的规定制备1:10样品匀液。5.1.2应取1mL的1:10样品匀液注入含有9mL无菌生理盐水的试管中，振摇试管或用吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100样品匀液。5.1.3应按照5.1.2的规定，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增1个稀释剂，换用1次1mL无菌吸管。5.1.4应根据对样品污染状况的估计，选择2个或3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释剂分别吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度至少做两个平皿。同时，应分别吸取1mL稀释液加入两个平皿内作空白对照。5.1.5应及时向平皿倾注15mL～20mL冷却至46℃的孟加拉红琼脂培养基（可将其置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温），转动平皿使其混合均匀。5.2培养应在培养基凝固后，将平板倒置，在28℃±1℃条件下培养5d，观察并记录。5.3菌落计数应以肉眼观察菌落数，必要时可用放大镜。应根据菌落形态，分别记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母菌数；菌落计数应以菌落形成单位（colony-formingunits，即CFU）表示。6结果和报告6.1结果计算6.1.1应先计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。6.1.2应选取平均菌落数在10CFU～150CFU之间的平皿，作为霉菌与酵母菌计数范围。6.1.3若只有一个稀释度的平均菌落数在10CFU～150CFU之间，则应按该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.1.4若两个稀释度的平均菌落数均在10CFU～150CFU之间，则应求出两菌落总数的比值：若比值小于等于2，则应计算两个稀释度下平均菌落数的平均值；若比值大于2，则应计算稀释度较低平皿的平均菌落数。6.1.5若所有平板上的菌落数均大于150CFU，则应按最高稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.1.6若所有平板上的菌落数均小于10CFU，则应按最低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数计算。DB61/T1001.5—201536.1.7当所有稀释度的平均菌落数均不在10CFU～150CFU之间时，若其中一个稀释度下的平均菌落数大于150CFU，而相邻稀释度下的平均菌落数小于10CFU，则应以更接近10CFU或150CFU的平均菌落数乘以相应的稀释倍数计算。6.1.8若所有稀释度下的平板均无菌落生长，则以＜1乘以最低稀释倍数计算。6.2结果报告6.2.1若菌落数小于100CFU，则应按“四舍五入”原则修约，以整数报告结果。6.2.2若菌落数大于等于100CFU，则应按“四舍五入”原则修约，保留2位有效数字；也可用10的指数形式来表示，并按“四舍五入”原则修约，保留2位有效数字。6.2.3若所有平板上均为蔓延菌落而无法计数，则应报告菌落蔓延。6.2.4若空白对照平板上有菌落生长，则应判定此次检测结果无效。6.2.5应以CFU/g、毫升（mL）或平方厘米（cm2）为单位报告结果。6.2.6若检测结果超过本标准规定的要求，则应选取同批次未开封样品再连续检测两次，并以三次检测结果的平均值报告结果。_________________________________