DBS52 007-2014 食品安全地方标准 白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测

ICS67.220.20X40DB52贵州省地方标准DBS52/007—2014食品安全地方标准白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法Localfoodsafetystandards—Determinationofsodiumcyclamate,saccharinsodium,acesulfameKandsucraloseinChinesespirits-LC-MS/MSmethod2015-02-12发布2015-04-01实施贵州省卫生和计划生育委员会发布DBS52/007—2014I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13原理..............................................................................14试剂和材料........................................................................15仪器..............................................................................26试样的制备与保存..................................................................27测定步骤..........................................................................28结果计算..........................................................................39方法检出限和回收率................................................................4附录A（资料性附录）标准物质总离子流图..............................................5附录B（资料性附录）甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖保留时间表......................6附录C（资料性附录）添加回收数据....................................................7DBS52/007—2014II前言本标准按照GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准附录A、附录B和附录C为资料性附录。本标准由贵州省产品质量监督检验院提出。本标准由贵州省卫生和计划生育委员会归口。本标准起草单位：贵州省产品质量监督检验院、贵州茅台酒厂（集团）习酒有限责任公司。本标准主要起草人：孙棣、冯永渝、钟方达、胡峰、赵贵斌、梁桂娟、李凯、龙四红、胡建锋、张琼、陈明学、车驰、谈晓君、何洪、张世美。DBS52/007—20141食品安全地方标准白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于各种白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理白酒用水稀释定容后过膜，供液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。4试剂和材料4.1甲醇，色谱纯。4.2乙酸铵，色谱纯。4.3乙酸铵溶液（10mmol/L）0.77g乙酸铵（4.2）加水超声溶解定容至1000mL。4.4甜蜜素、糖精钠、安赛蜜标准物质（纯度≥99.0%），三氯蔗糖标准物质（纯度≥98.5%）。4.5标准储备溶液（1.0mg/mL）准确称取每种标准物质（4.4）10.0mg分别放入10mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀。4.6标准中间溶液（10.0μg/mL）分别吸取1.0mL各标准储备溶液（4.5）于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。4.7标准工作溶液由于四种甜味剂在质谱上响应有差异，分别配制各种物质的标准工作溶液。准确移取一定体积的标准中间溶液，根据需要用水稀释成甜蜜素（ng/mL）浓度为5.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0、100.0、200.0系列标准工作溶液；糖精钠浓度（ng/mL）为10.0、20.0、40.0、60.0、80.0、100.0系列标准工DBS52/007—20142作溶液；安赛蜜浓度(ng/mL)为5.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0系列标准工作溶液；三氯蔗糖浓度(ng/mL)为20.0、40.0、60.0、80.0、100.0、200.0、400.0系列标准工作溶液。用前配制。4.80.22μm滤膜（水相）。5仪器5.1液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾（ESI）离子源。5.2分析天平，感量0.1mg和0.01g。5.3超声波提取器。6试样的制备与保存将样品充分振摇混匀，分装置洁净容器内作为试样，标明标记；常温下保存。7测定步骤7.1提取称取样品5g(精确至0.01g)置于50mL容量瓶中，用水混匀后定容至刻度，过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.2测定7.2.1液相色谱条件a)色谱柱为C18柱，4.6mm（内径）×150mm，粒径5μm，或同等效能色谱柱；b)进样量为10μL；c)流速为800μL/min；d)柱温为30℃e)流动相为A：10mmol/L乙酸铵溶液，B：甲醇。梯度洗脱条件见表1。表1梯度洗脱条件时间/min流速/（μL/min）流动相A/(%)流动相B/(%)0.080090101.080090101.280010904.580010905.0800901010.080090107.2.2质谱条件a)离子源为电喷雾离子源；b)扫描方式为负离子扫描；DBS52/007—20143c)检测方式为多反应监测；d)电喷雾电压（IS）为-4500V；e)雾化器压力（GS1）为55Psi；f)气帘气压力（CUR）为25Psi；g)辅助气压力（GS2）为55Psi；h)离子源温度（TEM）为600℃；i)定性离子对、定量离子对、碰撞能量（CE）和去簇电压（DP）见表2。表2四种甜味剂定性离子对、定量离子对、碰撞能量和去簇电压被测物名称定性离子对（m/z）定量离子对（m/z）碰撞能量/V去簇电压/V甜蜜素178.1/80.1178.1/80.1-65-36糖精钠181.9/106.0181.9/42.1181.9/106.0-41-41-27-46安赛蜜161.8/81.9161.8/78.0161.8/81.9-43-43-20-43三氯蔗糖395.0/359.0397.0/361.0395.0/359.0-81-81-14-147.2.3液相色谱-串联质谱测定在仪器最佳工作条件下，用甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖混合标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，应使样品溶液中四种甜味剂的响应值在仪器测定的线性范围内。若样品待测溶液中均出现所选择的两个离子对时，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表3的范围，则可判断样品中存在被测物。甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖标准物质总离子流图参见附录A。在上述色谱条件和质谱条件下，甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖的参考保留时间参见附录B。表3液相色谱－质谱/质谱定性时相对离子丰度最大允许误差相对丰度/%相对离子丰度最大允许误差/%＞50±20＞20～50±25＞10～20±30≤10±507.3空白试验除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。8结果计算结果按下式计算：1000cVXm......................................(1)式中：DBS52/007—20144X--试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c--从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V--样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m--样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。注：试样中组分含量≥1mg/kg时，保留三位有效数字；试样中组分含量＜1mg/kg时，保留两位有效数字。9方法检出限和回收率9.1检出限以信噪比不小于3（S/N≥3）确定甜蜜素检出限为0.02mg/kg；糖精钠检出限为0.05mg/kg；安赛蜜检出限为0.02mg/kg；三氯蔗糖检出限为0.2mg/kg。9.2回收率甜蜜素、糖精钠和安赛蜜添加浓度范围为0.1mg/kg～0.8mg/kg，三氯蔗糖添加浓度范围为0.4mg/kg～2.0mg/kg，回收率为81.1%～115.8%。回收率参见附录C。DBS52/007—20145AA附录A（资料性附录）标准物质总离子流图甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖标准物质总离子流图，见图A.1。图A.1四种化合物标准物质的提取离子质谱图DBS52/007—20146BB附录B（资料性附录）甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖保留时间表表B.1甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖保留时间被测物名称保留时间/min甜蜜素4.81糖精钠4.64安赛蜜4.60三氯蔗糖4.94DBS52/007—20147CC附录C（资料性附录）添加回收数据本方法中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表C.1。表C.1四种甜味剂甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖的添加回收率（n=6）白酒类型化合物添加浓度/(mg/kg)回收率范围/%最大相对标准偏差/%0.192.00~99.002.40.489.25~99.503.8甜蜜素0.892.25~103.883.90.194.00~109.005.70.494.00~106.004.0糖精钠0.882.63~94.253.80.1101.00~110.003.40.496.50~108.255.6安赛蜜0.885.25~91.382.40.486.75~108.007.40.883.88~106.257.8酱香型白酒三氯蔗糖2.091.00~104.004.70.199.00~110.003.80.497.25~106.503.7甜蜜素0.888.13~94.382.20.196.00~106.004.20.498.25~107.504.0糖精钠0.885.88~105.757.20.1100.00~108.003.60.494.25~109.255.2安赛蜜0.881.13~93.885.90.4100.00~112.004.60.889.88~108.636.7浓香型白酒三氯蔗糖2.083.50~88.501.8DBS52/007—20148表C.1(续)四种甜味剂甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖的添加回收率（n=6）白酒类型化合物添加浓度/(mg/kg)回收率范围/%最大相对标准偏差/%0.195.00~108.005.50.499.25~109.253.6甜蜜素0.898.63~103.