DB32∕T 2579-2013 茄子品种抗青枯病鉴定技术规范

ICS65.020.20B22备案号：40465-2014江苏省地方标准DB32DB32/T2579-2013茄子品种抗青枯病鉴定技术规范Ruleforevaluationofeggplantforresistancetobacterialwilt2013-12-20发布2014-01-20实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T2579-2013前言为规范江苏省茄子品种抗青枯病的鉴定方法及评价技术制定本标准。本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定编写。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院。本标准起草人：刘邮洲、陈志谊、乔俊卿。DB32/T2579-20131茄子品种抗青枯病鉴定技术规范1范围本标准规定了茄子品种抗青枯病鉴定方法和抗性评价的病原物接种体制备、抗性鉴定方法、病情分级和抗性综合评价标准。本标准适用于茄子品种对青枯病抗性的鉴定和评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T1858.4-2010番茄抗青枯病鉴定技术规程NY/T2060.2-2011辣椒抗青枯病鉴定技术规程3病原物接种体制备3.1接种菌株的来源3.1.1TTC培养基的制备TTC培养基的配方：溶液A和溶液B按照1:1的比例混合均匀，冷却至45℃，倒平板备用。溶液A：三苯基四唑氯2g，磷酸缓冲液浓度为0.134mol/L，pH7.2，100mL；溶液B：琼脂20g，一次蒸馏水100mL。3.1.2病原菌的分离、纯化和保存从茄子青枯病发病田块采集病株，取病茎，剪成2cm左右的片段，用1%(w/v)AgNO3溶液表面消毒1min后，无菌水浸洗3次，用灭菌小刀剥开病茎木质部，浸入5mL无菌水中，10min后吸取1mL液体涂布TTC平板上，28℃培养，挑取单菌落划线再培养，纯化后的菌株置于TTC斜面4°C保存。分离物经形态学和分子生物学鉴定等确认为Ralstoniasolanacearum后，再次划线纯化。通过茄子幼苗期致病性测定，筛选强致病力菌株，-70℃、10%甘油中冷冻保存备用。所用菌株需隔年进行致病力测定。3.2青枯病菌接种体制备将保存的青枯病菌在YPGA(酵母浸膏5g，胰蛋白胨5g，葡萄糖5g，琼胶20g和蒸馏水1000mL)平板上活化，移入50mLYPG培养液中，28℃，150r/min振荡培养12h，用无菌水配制成OD600值为0.3的菌液（菌含量为108cfu/mL）。4抗病性鉴定4.1人工病圃鉴定人工病圃选择具备良好的自然发病环境和灌溉条件、地势平坦的地块。鉴定圃内不施用任何杀菌剂。人工病圃鉴定小区的土壤表面均匀喷施青枯病菌菌液1:100倍稀释液，使用量为2000mL/㎡，然后播种盖土。每鉴定品种种植总株数不少于300棵。每隔4个品种设1组感病对照，重复2次。病圃内土壤肥力水平和耕作管理与大田生产相同，不施用任何杀菌剂。DB32/T2579-20132茄子感病品种对照采用北京六叶茄。4.2病情调查人工病圃鉴定在茄子坐果后期进行病情调查。每份鉴定材料每次检查5点，每点随机抽查20株。根据病害症状描述，逐株进行调查并记载病情级别。5病情分级5.1人工病圃鉴定病情分级参照农业部行业标准《番茄抗青枯病鉴定技术规程》（NY/T1858.4-2010）和《辣椒抗青枯病鉴定技术规程》（NY/T2060.2-2011）。人工病圃鉴定严重度分级及其对应的症状描述见表1。表1人工病圃鉴定茄子品种青枯病病情级别划分及症状描述严重度分级症状描述0植株枝、叶健康，无病症1植株顶端1-3片叶片中午萎蔫，早、晚恢复与健株相似2植株至上向下有4-6片叶片中午萎蔫，早、晚恢复与健株相似3植株有1/3叶片中午萎蔫，早、晚恢复与健株相似4整株叶片全部萎蔫5.2病情指数计算盆栽鉴定和人工病圃鉴定采用相同的病情指数计算公式。当严重度用分级代表值表示时，病情指数按公式（1）计算。%100max1aXaXDIiniii……………………………………………………………………（1）DI：病情指数；Xi：病害分级标准各级级值；ai：各级严重度的调查单元数；∑Xi：调查单元总数；amax：最高级值。6抗性评价6.1鉴定有效性判别当鉴定圃中的所有感病对照品种的病情指数DI50，该批次抗青枯病鉴定视为有效。6.2抗性评价标准依据鉴定材料发病程度（病情指数）确定其对青枯病的抗性水平，参照农业部行业标准《番茄抗青枯病鉴定技术规程》（NY/T1858.4-2010）和《辣椒抗青枯病鉴定技术规程》（NY/T2060.2-2011），划分标准见表2。表2茄子品种对青枯病病抗性评价标准病情指数DI抗性评价不侵染，DI=0免疫(I)免疫(I)高抗(HR)0DI≤12.5高抗(HR)DB32/T2579-20133表2（续）茄子品种对青枯病病抗性评价标准病情指数DI抗性评价12.5DI≤25中抗(MR)25DI≤50感病(S)DI75高感(HS)6.3重复鉴定初次鉴定中表现为免疫、高抗、抗病、中抗、感病的材料，次年用应进行重复鉴定。6.4抗性评价根据两年抗性鉴定结果对鉴定材料进行抗病性评价，抗性以统计的最高病情指数为准。7鉴定记载表格茄子品种抗青枯病鉴定原始记录及结果记载表格格式见表3。抗性鉴定记录保存2年。表3年茄子品种抗青枯病鉴定结果记载表编号品种名称来源病情级别及发病株数病情指数抗性评价0级1级2级3级4级注1:鉴定地点注2:接种日期调查日期鉴定技术负责人（签字）：