DB61∕T 563-2013 水质 丙烯酰胺的测定 高效液相色谱-质谱质谱法

ICS13.060.01Z16DB61陕西省地方标准DB61/T563—2013水质丙烯酰胺的测定高效液相色谱-质谱/质谱法2013-01-07发布2013-03-01实施陕西省质量技术监督局发布DB61/T563—2013I前言本标准由陕西省环境监测中心站提出。本标准由陕西省环境保护厅归口。本标准起草单位：陕西省环境监测中心站。本标准主要起草人：黄国全、许锋、李合义、吴卫东、周弛。本标准由陕西省环境监测中心站负责解释。本标准为首次发布。DB61/T563—20131水质丙烯酰胺的测定高效液相色谱-质谱/质谱法1范围本标准规定了测定水中丙烯酰胺的高效液相色谱-质谱/质谱法的方法原理、试剂和材料、仪器和设备、样品、分析步骤、结果计算等要求。本标准适用于饮用水源地地表水、地下水中丙烯酰胺的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法3方法原理采用固相萃取技术富集样品中的丙烯酰胺，用甲醇洗脱，洗脱液浓缩后，用高效液相色谱串联质谱仪检测，外标法定量。4试剂和材料4.1水：符合GB/T6682-2008中规定的一级水。4.2甲醇：液相色谱纯。4.3甲酸：液相色谱纯。4.4丙烯酰胺标准贮备：=1000mg/L。介质为甲醇，4℃冰箱中冷藏保存。4.5丙烯酰胺标准中间液：=1.0mg/L。以水为溶剂，将丙烯酰胺标准贮备液(4.4)适当稀释，4℃冰箱中保存，保存期为7d。4.6丙烯酰胺标准使用液：=100µg/L。准确吸取10mL丙烯酰胺标准中间液(4.5)于100mL容量瓶中，用水定容，摇匀。现用现配。4.7微孔滤膜：0.45μm，水系。4.8固相萃取小柱：PlusAC-2，400mg/85μm，或其它性能相当者。5仪器和设备5.1高效液相色谱串联质谱仪(三重四级杆质谱)，配电喷雾离子源(ESI)。5.2氮吹浓缩仪。5.3固相萃取装置。DB61/T563—201326样品6.1样品测定范围样品体积为10mL时，方法的检出限为0.008μg/L，测定下限为0.032μg/L，测定上限为2.5μg/L。6.2样品采集与贮存样品应采集在棕色玻璃瓶中。采样前用待测水样将样品瓶清洗2次～3次。采集的水样应充满样品瓶并加盖密封，及时分析。如需保存，应避光，4℃以下冷藏，48h内分析。7分析步骤7.1样品预处理7.1.1固相萃取小柱的活化：将固相萃取小柱(4.8)安装在固相萃取装置(5.3)上，依此用10mL甲醇(4.2)、10mL水活化固相萃取小柱，流速控制在1mL/min，整个活化过程应保持柱体润湿。7.1.2样品富集：取10mL水样(富集所用水样体积根据水质情况可适当增减)以1mL/min的流速流过已活化好的固相萃取小柱，弃去流出液。7.1.3干燥：真空抽滤15min或高纯氮气吹固相萃取小柱10min，使柱干燥。7.1.4洗脱与浓缩：用10mL甲醇以1mL/min的流速洗脱样品，收集洗脱液。采用氮吹浓缩至近干，用水定容至1mL，过微孔滤膜(4.7)，待测。7.2色谱条件7.2.1色谱柱：填料为5μmODS，柱长15cm，内径2.1mm的反相色谱柱或其他性能相近的色谱柱。7.2.2流动相：流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为甲醇，梯度洗脱见表1。7.2.3流速：400μL/min。7.2.4柱温：40℃。7.2.5进样量：50μL。7.3质谱条件离子源：电喷雾(ESI)，扫描方式：正离子，监测方式：多反应监测（MRM）。具体参数见附录A。表1流动相梯度洗脱程序时间/min流动相A/%流动相B/%0.009910.409912.5040602.519915.009917.4标准曲线的绘制DB61/T563—20133准确移取一定量的丙烯酰胺标准使用液(4.6)至水中，配制浓度分别为0.2µg/L、0.5µg/L、1.0µg/L、2.0µg/L、4.0µg/L、8.0µg/L、16.0µg/L、25.0µg/L的标准系列。按照上述液相色谱−质谱/质谱条件测定标准工作溶液，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。7.5样品测定样品按所建立方法进行测试，记录色谱峰的保留时间和峰面积。7.6空白实验用水代替样品，按样品测定相同的步骤分析。8结果计算8.1定性分析在相同实验条件下，样品与标准工作液中待测物质的色谱峰相对保留时间在2.5%以内，并且在扣除背景后的样品色谱图中，所选择的离子对均出现，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表2流动相梯度洗脱程序相对丰度/（%，基峰）液相色谱-质谱/质谱定性时相对离子丰度最大允许误差＞50±20%大于20至小于等于50±25%大于10至小于等于20±30%≤10±50%8.2定量分析样品中丙烯酰胺的含量按公式（1）计算:stVKVaY..................................(1)式中：——水样中丙烯酰胺的浓度，单位为微克每升(μg/L)；Y——水样中丙烯酰胺的峰面积；a——校准曲线截距；tV——洗脱液浓缩定容后的体积，单位为毫升(mL)；sV——水样体积，单位为毫升(mL)；K——校准曲线斜率。9精密度与准确度9.1精密度DB61/T563—201346家实验室分别对0.040μg/L和2.00μg/L的样品进行了测定，实验室内相对标准偏差为5.6%～9.1%、6.7%～11.7%；实验室间相对标准偏差分别为6.3%和2.8%。9.2准确度6家实验室分别对加标后浓度为0.040μg/L和2.00μg/L的样品进行测定，加标回收率分别为70.0%～97.5%、73.0%～98.0%。10注意事项10.1丙烯酰胺有毒，实验过程中应做好防护。10.2样品通过固相萃取小柱后，必须用氮气吹干固相萃取小柱或者抽气至干，否则会降低该方法回收率。10.3质谱仪应定期校正质量轴，防止质量数发生漂移。DB61/T563—20135AA附录A（资料性附录）丙烯酰胺HPLC-MS/MS方法特征选择离子及质谱参数表A.1丙烯酰胺HPLC-MS/MS方法特征选择离子及质谱参数名称母离子/(m/Z)子离子/(m/Z)管状透镜电压/V碰撞能量/V丙烯酰胺72.455.5*651172.443.56518注1：其他参数：喷雾电压：3500V，鞘气压：35psi，辅助气压：10arb，碰撞气：1.5mTorr离子传输管温度：350℃，吹扫气压：0psi。注2：表A.1中带*的离子为定量离子；对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化至最佳。_________________________________