DB32∕T 1879-2011 黑莓中鞣花酸含量的测定高效液相色谱法

ICS65.020.01B31备案号：31279-2011江苏省地方标准DB32DB32/T1879-2011黑莓中鞣花酸含量的测定高效液相色谱法MethodfordeterminationofEllagicAcidinBlackberryHighPerformanceLiquidChromatographyMethod2011-08-15发布2011-10-15实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T1879-2011I前言本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定编制。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院农产品加工研究所。本标准主要起草人：刘小莉、周剑忠、单成俊、王英、李莹、张丽霞。DB32/T1879-20111黑莓中鞣花酸含量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了用高效液相色谱法测定黑莓中鞣花酸含量的方法。本标准适用于黑莓鲜果、黑莓叶子、黑莓籽等产品中鞣花酸的测定。本方法最低检测限为黑莓鲜果中鞣花酸含量在0.2mg/100g、黑莓叶和黑莓籽中鞣花酸含量在1mg/100g以上。2规范性引用文献下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法3原理利用鞣花酸的结构特性，是没食子酸的二聚衍生物，是一种多酚二内酯，呈反式没食子酸单宁结构，有多个共轭双键结构，在254nm处有最大吸收峰。4仪器设备4.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器4.2电子分析天平4.3高速组织捣碎机4.4超声波清洗器4.5高速离心机5试剂和溶液以下所用试剂和水，除特别注明者外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682-2008中规定的三级水。鞣花酸标准溶液：准确称取鞣花酸标准品5.0mg，以色谱纯甲醇溶解，并定容至5mL，摇匀，配成浓度为1mg/mL的母液，4℃保存；无水乙醇；乙腈，色谱纯；磷酸；石油醚。6试样制备DB32/T1879-201126.1黑莓鲜果准确称取250g新鲜黑莓样品，加100ml去离子水，用高速组织捣碎机打浆。取50ml匀浆，加入等体积的无水乙醇，于超声波中处理20min后，10000转/分钟离心10min，取上清，沉淀中加入50ml50%乙醇溶液按上述步骤重复提取2次，合并上清，定容至200ml。以0.45µm滤膜过滤后4℃保存备用。6.2黑莓叶子新鲜黑莓叶子于电热恒温干燥箱50℃烘干至恒重，用高速粉碎机粉碎1min，过孔径0.28mm筛后备用。准确称取5g黑莓叶粉末，加40ml50%乙醇溶液，于超声波中处理20min后，10000转/分钟离心10min，取上清，沉淀中加入50ml50%乙醇溶液按上述步骤重复提取2次，合并上清，定容至200ml。以0.45µm滤膜过滤后4℃保存备用。6.3黑莓籽新鲜黑莓种籽于电热恒温干燥箱50℃烘干至恒重，用高速粉碎机粉碎1min，过孔径0.28mm筛后备用。准确称取5g黑莓籽粉末，加入40ml石油醚，100转/分钟振荡30min，弃去石油醚层，残余黑莓籽中加40ml50%乙醇溶液，于超声波中处理20min后，10000转/分钟离心10min，取上清，沉淀中加入50ml50%乙醇溶液按上述步骤重复提取2次，合并上清，定容至200ml。以0.45µm滤膜过滤后4℃保存备用7检测方法7.1高效液相色谱条件色谱柱：ZORBAXSB-C18柱（4.6×250mm，5μm）流动相：乙腈-1.2%磷酸（18：82），流速1mL/min温度：30℃进样量：20μL检测器：紫外检测器，波长254nm7.2标准曲线用流动相稀释标准储备液，配制系列浓度的标准工作溶液：5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL、50µg/mL、100µg/mL。在上述色谱条件下测定，以峰面积为纵坐标、相应的标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。鞣花酸标样的高效液相色谱图见附录A。7.3样品检测将过滤后的试样溶液在上述色谱条件下测定，用峰面积在标准曲线上计算试样溶液中鞣花酸的浓度。7.4结果计算与表达7.4.1结果计算结果按式（1）式计算：X=100mVC-------------------------------------------------(1)式中：DB32/T1879-20113X—试样中鞣花酸含量，单位为毫克每100克（mg/100g）;C—由标准曲线上查出或由直线回归方程求出的样品中鞣花酸的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）;V—试样制备体积，单位为毫升（mL）；m—试样的质量（g）；7.4.2平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。8允许差同一分析者对同一试样同时测定两次（或重复测定）所得结果相对偏差不大于10％。DB32/T1879-20114附录A(技术性附录)0.1mg/ml鞣花酸标准品图谱图Ａ.10.1mg/ml鞣花酸标准品图谱