jjg 538-1988 荧光光度计试行检定规程

MV_RR_CNG_0109荧光光度计试行检定规程1.荧光光度计试行检定规程说明编号JJG538-1988名称（中文）荧光光度计试行检定规程（英文）VerificationRegulationofFluorescencePhotometer归口单位黑龙江省标准计量局起草单位黑龙江省计量科学研究所主要起草人叶军安(黑龙江省计量科学研究所)批准日期1987年12月21日实施日期1988年10月1日替代规程号适用范围本规程适用于以滤光片获得单色光的、作非连续取样定量分析用的新制造、使用中和修理后的荧光光度计的检定。主要技术要求1外观与初步检查2检出极限3线性误差4稳定度5重复性6荧光池成套性7滤光片透光特性8绝缘电阻是否分级否检定周期（年）1附录数目4出版单位中国计量出版社检定用标准物质相关技术文件备注2.荧光光度计试行检定规程摘要一概述荧光光度计(以下简称仪器)是根据某些物质被一种波长的光(如紫外光)照射后，会在极短的时间内发射出比照射波长稍长的光(如可见光)的原理，测量物质的性质和含量的分析仪器。荧光强度与物质的浓度存在以下关系：F＝κ′φI0(1－e－εLc)式中：F——荧光强度；κ′——仪器常数；φ——量子效率；I0——激发光强度；ε——荧光物质的摩尔吸收系数；L——液层的厚度；c——荧光物质的浓度。对于给定的物质来说，当激发光的波长和强度以及液层的厚度给定，溶液的浓度较低时，荧光强度与荧光物质的浓度，有以下简单关系：F＝κc仪器主要由光源系统、单色器系统、样品室、探测器系统和显示仪表组成。二技术要求1外观与初步检查1.1仪器应有下列标志：仪器名称、型号、制造厂名、出厂时间和仪器编号。1.2仪器应能平稳地置于工作台上，各紧固件均应紧固良好。各调节旋钮、按键和开关均能正常工作，无松动现象。电缆线的接插件应接触良好。外观不应有明显的机械损伤。1.3指示器应工作正常。刻线应清晰、粗细均匀。指针的宽度不大于刻线的宽度，并应与刻线平行。1.4旋动“调零”和“满度”旋钮时，电表指针应平稳无跳动现象。1.5仪器所配荧光池表面应光洁，不应有划痕、斑点及任何裂纹。1.6滤光片透光面不得有灰尘、油污或影响透光特性的斑点存在。2检出极限用硫酸奎宁标准溶液检定仪器的检出极限应优于1×10－8g/mL。3线性误差仪器的线性误差不大于±4.0％。对指针式直读电表仪器，若配套指示仪表准确度低于0.5级，此项可不检定。4稳定度4.1电源电压为220±4.4V时，3min内，仪器示值的正、反向漂移应不大于1.5％。4.2输入电压220±22V时，仪器示值变化量应不大于1％。5重复性仪器的重复性不大于满度值的0.8％。6荧光池成套性配套使用的荧光池间的示值差应不大于1％。7滤光片透光特性仪器上配置的玻璃滤光片、干涉滤光片的峰值波长应符合以下要求：玻璃滤光片：标称值±10nm；干涉滤光片：标称值±5nm。其他指标应符合出厂说明的规定。8绝缘电阻仪器在不工作状态下，在符合规定的环境条件下，试验电压500V，电源输入电路与外壳之间的绝缘电阻不小于20MΩ。三检定条件(一)检定用设备9检定设备见表1。表1序号名称规格备注1交流稳压电源220V0.5kVA稳定度0.5%2调压器0.5kVA3兆欧表试验电压500V4交流电压表150/300V,准确度1.0级5秒表分度值不大于0.1s6荧光池光径10mm工作标准荧光池，其配对误差不大于0.5%7分光光度计300—400nmΔλ±0.7nm400—500nmΔλ±1.1nm500—600nmΔλ±1.5nm需经汞灯校准的紫外-可见分光光度计8配制溶液设备配制标准溶液所需设备及器材见附录110工作标准溶液10.10.05mol/L硫酸溶液。10.2硫酸奎宁标准溶液(溶剂0.05mol/L硫酸)，其浓度分别为1×10－8、2×10－7、4×10－7、6×10－7、8×10－7、1×10－6g/ml。(二)检定环境条件11检定环境条件应符合以下要求11.1温度20±10℃；相对湿度不大于85％。11.2电源电压220±22V。11.3仪器应置于水平面无震动的工作台上，操作时不得有摇动现象。检定处不得有强光直射。11.4仪器周围无强磁场、电场干扰，无强气流影响。11.5仪器电源必须接地良好。仪器接通电源之前，必须安装好滤光片，更换滤光片必须先切断光源。11.6检定前，仪器应预热20min。四检定项目和检定方法12新仪器应全面进行第1—8条的检定；使用中和修理后的仪器，原则上进行第1、2、3、5、6、7和4.1款的检定，必要时可增加第4.2款和第8条的检定。13外观与初步检查按第1条要求进行。14检出极限14.1用0.05mol/L硫酸溶液作空白溶液，选取浓度为1×10－8g/mL硫酸奎宁标准溶液。灵敏度旋钮放在昀高挡。根据激发滤光片波长在350nm、发射滤光片波长在450nm左右的原则，选择滤光片。例如：使用玻璃滤光片的仪器，激发滤光片可选用“330”号(带通型)＇发射滤光片选用“420”(截止型)与“500”号(带通型)滤光片组合。14.2对空白溶液与标准溶液进行连续交替11次测量。如果在测量中，有1次数据确认是由外界干扰或操作引起的粗大误差，应将该次数据剔除。14.3由下式计算每次测量的荧光强度：Fi＝Fi1－Fi0(1)式中：Fi1——标准溶液的荧光强度；Fi0——空白溶液的荧光强度。荧光强度测量值的平均值为：∑niiFnF1＝1＝(2)式中：n——测量次数。检出极限指能给出二倍于标准偏差读数的物质浓度。用符号DL来表示。)g/mL(2＝DLSFc×(3)式中：F-——11次测量的平均荧光强度；C——标准溶液的浓度；S——单次测量的标准偏差。1－)－(＝21＝nFFSnii∑(4)式中：n——测量次数。15线性误差15.1用0.05mol/L硫酸溶液作空白溶液，适当选择灵敏度倍率挡、满度旋钮，使表2中浓度昀大的溶液示值接近满量程的80％处。滤光片选用按14.1款。表2g/mL标准溶液编号(j)12345标准溶液浓度(cj)2×10－74×10－76×10－78×10－71×10－615.2分别对表2中5种浓度工作标准溶液与空白溶液进行连续交替三次测量。由式(1)、(2)计算每次测量的荧光强度及测量平均值。平均荧光系数κ：∑51＝51＝jjjcFκ(5)式中：cj——标准溶液浓度；F-j——浓度为cj的溶液对应的三次荧光强度测量值的平均值仪器的线性误差由下式计算：100%－＝×jjjjκcκcFa(6)16稳定度16.1滤光片选用同14.1款，测量1×10－6g/mL硫酸奎宁溶液。调节满度旋钮使仪器示值在90％处，历时3min，记录仪器示值的变化量。17重复性滤光片选用同14.1款，测量1×10－6g/mL硫酸奎宁溶液，调节满度旋钮，使仪器示值在90％处。连续测量三次(每次测量前允许调零)，分别记录仪器示值。重复性用下式计算：∑niiiFFnF1＝1－max＝δ(7)式中：Fi——荧光强度；n——测量次数。18荧光池成套性滤光片选用同14.1款，荧光池中装入1×10－6g/mL的硫酸奎宁溶液，将荧光池带有标记的一面正对进光方向，然后，将其中一只放入其它检定项目合格的被检仪器光路中。仪器示值调至90％处，测量其它荧光池，记录荧光池间的仪器示值差。19滤光片的透光特性19.1带通型滤光片用表1中规定的仪器测量被检滤光片在各波长的透射比，绘制透射比-波长特性曲线(见图1)。由曲线求出昀大透射比TM对应的波长λM和透射比为—12TM时对应的波长λ1、λ2，则滤光片峰值波长误差：Δλ＝λ－λM(8)式中：λ——滤光片峰值波长标称值。滤光片半宽度：λW＝λ2－λ1(9)MT21TTMλ1λMλ2λ图119.2干涉滤光片干涉滤光片的检定同19.1款。检定时应注意光束与滤光片平面垂直。19.3截止型滤光片截止滤光片的透光特性用半高波长和陡度H表示。测量方法按照19.1款，由图2所示曲线求出昀大透射比TM，—12TM所对应的波长λ3为半高波长。MT21TTMT4λ4λ3λ图2H＝Aλ4－Aλ3(10)式中：H——陡度；Aλ3——波长为λ3时的吸光度；Aλ4——波长为λ3－20nm时的吸光度(透射比为T4)。20绝缘电阻在仪器电源输入电路与外壳之间用500V兆欧表测量绝缘电阻。21对于测量方法没有完全包括在本规程范围内的其它类型荧光光度计，其主要技术指标可参照上述检定方法进行检定。技术要求可按仪器说明书注明的指标。五检定结果的处理和检定周期22以上检定的各项数据均须记录在检定记录纸上，其中有关项目应填写或注明在检定证书或检定结果通知书上。23经检定符合本规程规定的仪器，发给检定证书；不符合本规程规定的仪器，发给检定结果通知书，并填写注明不合格项目的数据。24检定周期为一年，在此期间中，当条件改变(例如：更换光源灯、光电管、指示器经修理等)或对测量结果有怀疑时，都应进行检定。注：需要查阅全文，请与出版发行单位联系。