药物分析第十一章甾体激素类药物分析

高职高专系列教材配套电子教案高等教育出版社高等教育电子音像出版社主编张骏方应权（第2版）第十一章甾体激素类药物分析甾体激素类药物的分类肾上腺皮质激素雄性激素蛋白同化激素性激素孕激家雌激素各种甾体激素结构上的差异主要在于其取代基的种类、位置和数目，双键的位置和数目以及C10上有无角甲基等。第十一章甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析二、鉴别试验三、杂质检查四、含量测定本章内容一、药物结构与性质关系分析基本母核——环戊烷骈多氢菲第十一章甾体激素类药物分析23451016789121114131716151918ABCDC20C21（一）肾上腺皮质激素（二）性激素—雄性激素及蛋白同化激素（三）孕激素（四）雌激素（五）其它激素第十一章甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析返回（一）肾上腺皮质激素第十一章甾体激素类药物分析本类药物的结构特点：（1）具有21个碳原子（2）A环具有△4-3-酮基的α，β-不饱和羰基结构（3）C17具有α-醇酮基并多数有α-羟基（4）C10、C13具有角甲基；C11具有羟基或酮基（5）其它：有些皮质激素具有△1，6α、9α-卤素，16α-羟基，6α、12α、16α、16β-甲基等。一、药物结构与性质关系分析（一）肾上腺皮质激素第十一章甾体激素类药物分析在结构上，肾上腺皮质激素可以认为是皮质酮的衍生物。一、药物结构与性质关系分析3OHOHOCH2OHC皮质酮（一）肾上腺皮质激素第十一章甾体激素类药物分析例如，氢化可的松、醋酸地塞米松、曲按西龙、地塞米松磷酸钠等等。一、药物结构与性质关系分析H3CHOH3COOCH2OHCOH氢化可的松（一）肾上腺皮质激素第十一章甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析返回（二）性激素—雄性激素及蛋白同化激素第十一章甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析OCH3HHHCH3甲睾酮（methyltestosterone）OHCH3常用的雄性激素为睾丸素的衍生物。例如，甲睾酮（甲基睾丸素）、丙酸睾酮和苯丙酸诺龙等。（二）性激素—雄性激素及蛋白同化激素第十一章甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析OCH3HHHCH3丙酸睾酮（testosteronepropionate）HOOCH3OHHHHCH3苯丙酸诺龙（nandrolonephenylpropionate）HOO第十一章甾体激素类药物分析本类药物的结构特点：（1）具有19个碳原子（2）蛋白质同化激素具18个碳原子（C10上无角甲基）（3）A环具有△4-3-酮基；（4）C17上无侧链，多数是一个β-羟基，有些是由该羟基形成的酯，有些具有α-甲基。一、药物结构与性质关系分析（二）性激素—雄性激素及蛋白同化激素返回（三）孕激素第十一章甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析孕激素也称为黄体激素或孕酮，其典型药物为黄体酮。典型的药物有黄体酮、醋酸甲羟孕酮（安宫黄体酮）等。其结构如下：OCH3HHHCH3黄体酮（progesterone）HCH3OOCH3HHHCH3醋酸甲地孕酮（megestrolacelate）OCH3OCH3OCH3（三）孕激素第十一章甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析本类药物的结构特点：（1）具有21个碳原子（2）环具有△4-3-酮基（3）C17上甲酮基，有些具有α-羟基，与醋酸、己酸等形成酯（如醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、己酸羟孕酮等）；还有些具有△6、6β-甲基、6α-甲基、6β-氯。返回（四）雌激素第十一章甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析雌激素又称为卵泡激素。主要是雌二醇及其各种酯和炔雌醇及其衍生物。其典型药物的主要结构如下：HOHHHCH3雌二醇（estradiol）HOHHOHHHCH3炔雌醇（ethinylestradiol）OHCCH（四）雌激素第十一章甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析本类药物的结构特点：（1）具有18个碳原子（2）A环为苯环（3）C3上具有酚羟且有些形成了酯或醚（4）C10上无角甲基（5）C17具有β-羟基或酮基，有些羟基形成了酯，还有些具有乙炔基。返回（五）其它激素第十一章甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析除上述四种甾体激素外，中国药典（2010年版）还收载了口服避孕药物，如炔诺酮(norethisterone)、炔诺孕酮(norgestrel)、炔孕酮（ethisterone）等，其典型结构药物结构如下：HHHCH3炔诺酮（norethisterone）OHCCHHOHHH炔诺孕酮（norgestrel）OHCCHHCH3C（五）其它激素第十一章甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析药物的结构特点：（1）多数在A环上具有△4-3-酮基，与黄体酮和睾酮一致（2）有的在C17具有β-羟基、α-乙炔基或甲酮基（3）有的在C10上无角甲基，与雌激素相同。返回返回（一）与强酸呈色反应（二）官能团的反应（三）氧化还原反应（四）沉淀反应（五）药物或衍生物熔点第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验（六）薄层色谱法（七）高效液相色谱法（八）紫外分光光度法（九）红外吸收光谱法返回（一）与强酸呈色反应第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验1.许多甾体激素能与硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色，其中以与硫酸的呈色反应应用较广。2.试剂：硫酸的呈色反应中最常用的试剂为甲醇和乙醇，而稀释反应体系的试剂常为稀硫酸或水。3.应用实例：以氢化可的松的鉴别为例取本品约2mg，加硫酸2ml使溶解，放置5分钟，显棕黄色至红色，并显绿色荧光；将此溶液倾入10ml水中，即变成黄色至橙黄色，并微带绿色荧光，同时生成少量絮状沉淀。返回（二）官能团的反应第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验1.酮基的呈色反应：甾体激素分子中，大多在C3和C20位上含有酮基，能与羰基试剂肼发生呈色反应，产生有色物质腙。原理：常用的试剂：2,4—二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼。H2NNHNO2NO2H2NNHCONCO+H2NNHCNNHCO+H2NNHCNNH（二）官能团的反应第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验2.甲酮基的呈色反应：具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物亚硝基铁氰化纳芳香醛呈色黄体酮其他甾体亚硝基铁氰化纳蓝紫色（灵敏、专属）淡橙色或不显色（二）官能团的反应第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验3.有机氟的呈色反应：含氟的甾体激素药物氧瓶燃烧F—茜素氟蓝硝酸亚铈显蓝紫色返回（三）氧化还原反应第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验1.碱性酒石酸铜的反应：皮质激素的C17-α-醇酮基具有还原性碱性酒石酸铜Cu2O↓（橙红色）（三）氧化还原反应第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验2.与氨制硝酸银的反应：皮质激素的C17-α-醇酮基具有还原性氨制硝酸银Ag↓（黑色）返回（四）沉淀反应第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验含炔基的甾体激素硝酸银银盐沉淀CCHR+AgNO3CCAgR+HNO3（白色）返回（五）衍生物熔点第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验△黄体酮盐酸羟胺黄体双酮肟↓m.p.235~240℃m.p.200~202℃KOH炔雌醇苯甲酰氯苯甲酸酯（五）衍生物熔点第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验m.p.约182℃△苯丙酸诺龙盐酸氨基脲苯丙酸诺龙的缩氨脲衍生物丙酸睾丸酮醇制KOH△丙酸睾丸酮的水解产物m.p.150～156℃返回（六）薄层色谱法《中国药典》（2010年版）收载的炔诺孕酮雌醚片、丙酸睾酮注射液等均采用薄层色谱法进行鉴别。第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验（七）高效液相色谱法通过比较供试品和对照品保留时间的一致性，进行鉴别（八）紫外分光光度法本类药物的分子中存在共扼结构（CCCO和），具紫外吸收。如：△４-3-酮λmax240nm；苯环：280nmCCCO苯环返回（九）红外吸收光谱法第十一章甾体激素类药物分析二、鉴别试验中国药典上收载的甾体激素类药物的红外光谱图要求与对照图谱一致。返回三、杂质检查（一）有关物质（二）游离磷酸盐（三）残留溶剂的检查（四）硒（五）乙炔基第十一章甾体激素类药物分析返回三、杂质检查来源：原料、中间体、异构体、降解产物。特点：结构相似、可能存在多个甾体杂质。方法（具一定的分离能力）：1.薄层色谱法（多采用高、低浓度对比法）2.高效液相色谱法（多采用不加校正因子的主成分自身对照法）TLC判定方法：规定杂质斑点数目；比较杂质斑点颜色HPLC判定方法：大多规定杂质峰面积（一）有关物质第十一章甾体激素类药物分析三、杂质检查1.薄层色谱法（多采用高、低浓度对比法）醋酸去氧皮酮中“有关物质”的检查取本品，加三氯甲烷-甲醇（9∶1）溶解并制成每1ml中约含10mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，分别加上述溶剂稀释制成每1ml中约含0.1g的对照溶液（1）与每1ml中约含0.2g的对照溶液（2）摇匀，作为对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（77∶15：8：1.2）为展开剂，展开，晾干，在紫外灯（254nm）下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液（1）所显的主斑点比较不得更深，如有1个斑点深于对照溶液（1）的主斑点，与对照溶液（2）所显的主斑点比较，不得更深。（一）有关物质第十一章甾体激素类药物分析三、杂质检查2.高效液相色谱法（多采用不加校正因子的主成分自身对照法）炔诺酮中“有关物质”的检查取本品，以甲醇溶解并稀释制成每1ml中含2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取3ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。用含量测定项下的色谱条件，取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高度约为满量程的10%，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰面积的和不得大于对照溶液主蜂面积。（一）有关物质第十一章甾体激素类药物分析返回三、杂质检查地塞米松磷酸钠为地塞米松与磷酸形成的磷酸酯二钠盐，所以在其生产和贮存过程中可能引入磷酸盐，因此中国药典对地塞米松磷酸钠进行游离磷酸盐的检查。原理：方法：对照品法（二）游离磷酸盐第十一章甾体激素类药物分析OnHMoOPHPOHPOMoOH还原钼蓝磷钼酸铵740nm三、杂质检查第十一章甾体激素类药物分析期律（二）游离磷酸盐地塞米松磷酸钠中游离磷酸盐的检查精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放置30～50分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。返回三、杂质检查第十一章甾体激素类药物分析（三）残留溶剂的检查药典中的残留溶剂系指在原料药、辅料以及制剂生产中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机挥发性化合物。除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留限度应符合中国药典残留溶剂测定法的规定。返回三、杂质检查第十一章甾体激素类药物分析（四）硒剧毒来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢原理与方法药物氧瓶燃烧Se6+盐酸羟胺Se4+pH2.0±22，3-二氨基萘试液4，5-苯并苯硒二唑环己烷λmax378nm返回三、杂质检查（五）雌酮（乙炔基）第十一章甾体激素类药物分析返回乙炔基的检查：利用硝酸银与乙炔基反应，生成硝酸，再用氢氧化钠滴定液滴定生成的硝酸，电位法指示终点四、含量测定高效液相色谱法紫外分光光度法比色法第十一章甾体激素类药物分析四、含量测定（一）高效液相色谱法特点：样品用量少、灵敏度高、分离效能好、快速固定相：为十八烷基硅烷键合硅胶流动相：大多是甲醇和水组成的混合液检测：可采用紫外检测器于240nm或280nm波长检测，（因为大多甾体激素都具有△4-3-酮及苯环等共轭结构）第十一章甾体激素类药物分析返回四、含量测定（二）紫外分光光度法△4-3-酮基和苯环的共扼系统，于紫外光