HEK293细胞瞬时转染操作步骤

HEK293细胞瞬时转染应该注意哪些呢？作者：北京义翘神州瞬时转染已经是现在实验室常用的将重组DNA导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中，重组DNA导入感染性强的细胞系以获得目的基因且高水平的表达。瞬时表达法具有很多优点：如操作简易和周期短，表达效率高，安全高效，不需要筛选基因，能在完整植株上进行。HEK293作为常用的重组蛋白质表达细胞株，常用来进行瞬时转染操作的载体。那么，在应用HEK293细胞进行瞬时转染时有哪些方面需要注意的呢？首先，一定要在无菌条件下进行操作。在开始操作之前，需要清洁并设置生物安全柜参数，即紫外杀菌30min，风机工作10min后方可使用。第二，转染前准备工作：将密度为0.3-0.35X106cells/ml的HEK293F细胞传代接种于20ml培养基中，在36.5℃，175rpm，5%CO2的条件下培养。3天后细胞密度约2-3X106cells/ml时用培养基SMM293TI稀释处理细胞密度到1X106cells/ml，每瓶细胞液体积为20mL，然后旋紧瓶口放入摇床继续培养，2-4小时后可以进行转染。第三，配制转染液（1ml）：质粒DNA与转染试剂的用量需根据具体的实验进行优化。取约800ul的150mM灭菌的NaCl溶液稀释10μgDNA，混匀后在工作台放置5min；往DNA稀释液中加入约50μl的Sinofection转染试剂，最终转染液的总体积为1mL，混匀在工作台后放置10min。第四，将转染液逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床（36.5℃，关闭5%CO2，175rpm）。转染20-24h后加入SMS293-I加料液（0.7mL/瓶，具体加入量可以自己摸索），以后隔天加料培养6-10天。转染48~72h后可检测基因表达。如用于重组蛋白、抗体生产等。也可以进行简易操作：即直接把DNA和Sinofection转染试剂加入到细胞悬液中进行转染。但必须对DNA和转染试剂的比例和用量进行优化试验，选择最佳的比例。由于各实验操作细节可能不同，建议转染前可做优化实验，确定sinofection转染试剂与DNA的最佳比例。具体操作步骤可以搜索“HEK293细胞转染培养”的相关视频学习。