唾液淀粉酶最适pH的测定

唾液淀粉酶最适pH的测定广西医科大学42班2组刘家林摘要：酶是具有高效催化能力的生物大分子物质,底物浓度相同时,酶的催化活性主要受温度、pH值等因素影响。温度一定时,酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。在不同pH值下,通过测定淀粉酶水解底物的程度,测定唾液淀粉酶的最适pH值。在不同pH条件下,淀粉被唾液淀粉酶水解,与碘液反应呈现颜色反应,通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小,可知底物的反应程度,从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。关键词：唾液淀粉酶；最适pH；吸光值；前言：酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。酶催化化学反应的能力称为酶活性。酶的化学本质是蛋白质，它具有两性电解质的性质，在一定溶液中可以发生解离作用。酶无论在生活中还是在医学领域都具研究意义，酶的各种特性被广泛应用于各个领域。影响酶反应活力的因素很多，主要包括pH、温度、酶浓度、金属离子浓度、抑制剂等。酶在水溶液环境中的解离状态和行为，都受到H+的影响，酶活性中心功能基团解离状态将直接影响到酶的活化以及酶与底物的亲和力，其会随着溶液pH的改变而改变。所以，溶液pH对酶催化反应的速度有明显的影响。在某一pH值时，酶活性达到最大，这一数值称为酶的最适pH。不同的酶的最适pH不相同。淀粉经唾液中的淀粉酶水解，生成糊精和麦芽糖，在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合生成蓝色复合物，其颜色的深浅与空白管颜色的差值和淀粉酶的活力成正比。用单位时间剩余淀粉量与碘反应产生的蓝色在660nm处的吸光度值来表示淀粉酶的活性。在温度、酶浓度相同的情况下，酶活力在最适pH的情况下达到最大。正文：一、实验过程（一）不同pH缓冲液的配制按下表配置不同pH的缓冲液。磷酸缓冲液配制表pH0．2mol/LNa2HPO4（ml）0．2mol/LNaH2PO4（ml）6．00．6154．3856．20．9254．0756．41．3253．6756．61．8753．1256．82．45025．507．03．0501．9507．23．6001．400（二）唾液的获取先漱口1～2次，然后含一大口水约1min，期间做咀嚼运动，然后收集至杯子中。（三）淀粉用量的确定实验组和空白对照组设置表用量（mL）实验组123空白对照7．0pH缓冲液0．90．90．90．92．5g/L淀粉0．10．20．3—唾液（稀释10倍）0．10．10．10．1H2O5．95．85．76混匀，37℃水浴7．5min，然后向每管加2滴碘液。混匀，观察现象看出，0．3mL2．5g/L淀粉溶液颜色反应最浅选择该管做下一步实验。（四）酶液稀释倍数的确定酶液稀释倍数稀释倍数51015202530酶液（mL）10．50．40．250．20．2H2O（mL）44.55．64．754．85．8通过实验得到的酶液稀释对照结果如下表：稀释倍数51015202530空白7．0pH缓冲液0．90.90．90．90．90．90．92．5g/L淀粉（mL）0．30．30．30．30．30．30．3唾液0．10．10．10．10．10．1—H2O6666666混匀，37℃水浴7．5min，然后向每管加2滴碘液。混匀，观察到稀释5倍的1号管颜色最浅，为最适管。（五）最适pH的确定实验过程及其记录如下表：pH6．06．26．46．66．87．07．2pH缓冲液0．90．90．90．90．90．90．92．5g/L淀粉0．30．30．30．30．30．30．3某倍数唾液（5倍）0．10．10．10．10．10．10．1混匀，37℃水浴7.5min。然后向每管加2滴碘液H2O6666666A6600．3360．2570．1920．3090．3540．3710．402混匀，用蒸馏水调零，测定A660。以A660为纵坐标，pH为横坐标作图，得出如下结果：二、实验结果由以上实验过程可以得出，唾液淀粉酶的最适pH为6．4三、讨论唾液的pH一般为6．6～7．1，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。在这次实验中产生误差的可能原因为：（1）制备酶时存在一些不足。直接漱口获得酶的方法对酶浓度的影响较大；每个人因为个体差异，其唾液淀粉酶对酸碱度的适应程度不同。（2）实验设置不理想。固定的缓冲液配置不够精确；水浴保温时间和反应时间不一致。另外，实验中碘液的浓度也直接关系到对实验结果的准确观察，若实验中配制的碘液浓度高，其颜色将实际反应的颜色遮蔽，对淀粉用量和淀粉稀释倍数的判定容易造成影响，使实验结果不能准确地观察得到。酶活性受pH的影响，在37℃时，最适pH为6．4，接近中性，与口腔的环境相似，所以唾液淀粉酶在人体口腔内有较好的初步消化淀粉的作用。00.050.10.150.20.250.30.350.40.4566.26.46.66.877.27.4唾液淀粉酶PH-A660PHA660