瘦素和瘦素受体在乳腺癌组织中的表达及其与临床预后的关系

瘦素和瘦素受体在乳腺癌组织中的表达及其与临床预后的关系　基金项目：国家自然科学基金面上项目［３０７７２４７４（ＢＡ０７）］；江苏省科技厅基础研究计划自然科学基金（ＢＫ２００８４７７）；人事部留学回国人员基金（２００９ＩＡ０９）；江苏省卫生厅开放课题（ＸＫ１８２００９０４）１　２１００２９　南京医科大学第一附属医院乳腺外科２　２１００２９　南京医科大学第一附属医院病理科３　通讯作者，Ｅｍａｉｌ：[e-mail]２１００２９　南京　南京医科大学第一附属医院肿瘤科陈　薇，查小明１，刘晓安１，张伟民２，殷咏梅３　　【摘　要】　目的　检测瘦素（ＯＢ）和瘦素受体（ＯｂＲ）在人乳腺癌组织中的表达情况，探讨二者与ＨＥＲ２以及临床病理之间的关系，并分析它们对预后的影响。方法　用免疫组织化学的方法检测１１４例乳腺癌组织中ＯＢ和ＯｂＲ的表达，回顾分析相关的临床病理资料和随访情况。结果　ＯＢ和ＯｂＲ在大多数乳腺癌组织中均有表达，阳性率分别为７９８％和８５１％；ＯＢ和ＯｂＲ的表达与患者的年龄、绝经状态、肿瘤大小、肿瘤病理学分型、淋巴结转移及远处转移均无关（Ｐ＞００５）；与ＥＲ、ＰＲ、ｐ５３的表达状态也无关（Ｐ＞００５）；ＯｂＲ的表达与ＨＥＲ２相关（Ｐ＝００１８）；ＯＢ阳性者的总生存时间（ＯＳ）短（Ｐ＝０００９）；在亚组分析中，绝经后、三阴乳腺癌和淋巴结转移组中ＯＢ阳性的ＯＳ均短于ＯＢ阴性（Ｐ分别为００３８、０００６和０００４）。结论　ＯｂＲ与ＨＥＲ２在乳腺癌中的表达具有相关性，ＯＢ可能是导致乳腺癌预后不良的因素。　　【关键词】　乳腺癌；　瘦素；　瘦素受体；　ＨＥＲ２；　临床病理特征；　预后中图分类号：Ｒ７３０５１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－０４６０（２０１０）０６－０４９３－０５Ｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｌｅｐｔｉｎ／ｌｅｐｔｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ　　ＣＨＥＮＷｅｉ，ＣＨＡＸｉａｏｍｉｎｇ，ＬＩＵＸｉａｏａｎ，ＺＨＡＮＧＷｅｉｍｉｎｇ，ＹＩＮＹｏｎｇｍｅｉ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２９，Ｃｈｉｎａ　　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＹＩＮＹｏｎｇｍｅｉ，Ｅｍａｉｌ：[e-mail]　　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏａｎａｌｙｚｅｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｆａｃｔｏｒｓａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｌｅｐｔｉｎ（ＯＢ）／ｌｅｐｔｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＯｂＲ）ｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＯＢａｎｄＯｂＲｗａｓｅｘａｍｉｎｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｉｎｔｉｓｓｕｅｓｏｆ１１４ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｓａｍｐｌｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＰｏｓｉｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＯＢａｎｄＯｂＲｗｅｒｅｎｏｔｅｄｉｎ７９８％ａｎｄ８５１％ｏｆｔｈｅｓａｍｐｌｅｓ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＯＢａｎｄＯｂＲｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｗａｓｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇａｇｅｓ，ｍｅｎｏｐａｕｓｅ，ｔｕｍｏｒｓｉｚｅ，ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｔｙｐｅ，ｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｄｉｓｔａｎｔｍｅｔａｓｔａｓｉｓ（Ｐ＞００５）．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＯＢａｎｄＯｂＲｗａｓｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏＥＲ／ＰＲａｎｄｐ５３ｓｔａｔｕｓ（Ｐ＞００５）．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＯｂＲｓｈｏｗｅｄａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｔｈｅＨＥＲ２ｓｔａｔｕｓ（Ｐ＝００１８）．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＯＢｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｏｖｅｒａｌｌｓｕｒｖｉｖａｌ（Ｐ＝０００９）．Ｆｏｒｔｈｅｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓｅｐａｔｉｅｎｔｓ，ｔｒｉｐｌｅｎｅｇａｔｉｖｅｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｐａｔｉｅｎｔｓ，ｔｈｅｏｖｅｒａｌｌｓｕｒｖｉｖａｌｏｆＯＢｐｏｓｉｔｉｖｅｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅＯＢｎｅｇａｔｉｖｅｇｒｏｕｐ（Ｐ＝００３８，Ｐ＝０００６，Ｐ＝０００４）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＴｈｅｒｅｉｓａｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＯｂＲａｎｄＨＥＲ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓ，ａｎｄｌｅｐｔｉｎｍａｙｂｅａｎｅｇａｔｉｖｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｆｏｒｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ．　　【ＫｅｙＷｏｒｄｓ】　Ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ；　Ｌｅｐｔｉｎ；　Ｌｅｐｔｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓ；　ＨＥＲ２；　Ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ；　Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　　乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一。一直以来，肥胖被认为是绝经后妇女乳腺癌的一个危险因素并与预后不良及耐药相关［１２］，其具体的机制仍未阐明，但一般认为与脂肪组织分泌的一些生物活性因子有关，如雌激素，胰岛素，胰岛素样生长因子Ｉ（ＩＧＦ１）及瘦素（ＯＢ）等。瘦素蛋白（Ｌｅｐｔｉｎ）是肥胖基因（ＯＢ）·３９４·　临床肿瘤学杂志２０１０年６月第１５卷第６期　ＣｈｉｎｅｓｅＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，Ｊｕｎ．２０１０，Ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．６　编码的蛋白产物，主要由脂肪组织分泌，部分也可由胃、胎盘及肝等器官合成和分泌。ＯＢ与其受体（ＯｂＲ）结合后，作用于下丘脑、胰腺和甲状腺等部位，通过降低食欲，增加能量消耗，从而减轻体重。ＯＢ和ＯｂＲ在多种肿瘤组织中均有表达，如乳腺癌、结肠癌、胃癌、前列腺癌和肝癌等［３］。近来有文献报道，ＯＢ可通过ＯｂＲ反式激活ＨＥＲ２从而促进乳腺癌细胞的增殖［４］。本文旨在探讨ＯＢ、ＯｂＲ在人乳腺癌组织中表达的临床意义以及与预后的关系。１　资料与方法１１　标本　全部病例来自江苏省人民医院病理科２００２年至２００４年女性乳腺癌临床手术标本。根据乳腺癌组织学分类标准，浸润性导管癌９４例（８２５％），导管内癌１２例（１０５％），浸润性小叶癌６例（５１％），其他类型２例（１８％）。患者的平均年龄为５４０岁，其中最大年龄为７８岁，最小年龄为３４岁，绝经期后占６７２％，绝经期前３２７％。ＥＲ或ＰＲ阳性的患者（７９１％）均接受了至少５年的内分泌治疗。所有标本均经１０％福尔马林固定，石蜡包埋、切片，切片厚５μｍ，经ＨＥ染色，再由两位病理医师按ＷＨＯ标准共同确认并行病理诊断和组织学分型，并采用国际抗癌联盟（ＩＵＣＣ）１９８７年公布的ＴＮＭ标准进行肿瘤分期。见表１。１２　主要试剂　瘦素兔抗人多克隆抗体ＯＢ（Ａ２０）和瘦素受体羊抗人多克隆抗体ＯｂＲ（Ｍ１８）均购自ＳａｎｔａＣｒｕｚｅ公司；ＩｍｍｕｎｏｓｔａｉｎＳＰＫｉｔ试剂盒和二胺基联苯氨（ＤＡＢ）显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司（编号：Ｋｉｔ９７０９、Ｋｉｔ９７１０）。１３　免疫组织化学　ＳＰ法检测组织中ＯＢ和ＯｂＲ的表达，将切片常规脱蜡水化，灭活内源性酶，热修复抗原，阻断非特异性染色，滴加一抗，滴加二抗，ＤＡＢ显色，苏木精轻度复染、脱水、透明、封片、镜检。１４　结果判断　ＯＢ和ＯｂＲ均为细胞质表达，呈黄色或棕黄色为阳性，观察至少５个高倍视野，共计５００个细胞，计数染色阳性细胞，计算染色阳性细胞的所占比率。０：阳性细胞＜１０％；（＋）：阳性细胞１０％～５０％；（＋＋）：阳性细胞＞５０％，染色强度弱；（＋＋＋）：阳性细胞＞５０％，染色强度强；其中０为阴性表达，（＋）为阳性表达，（＋＋）、（＋＋＋）为强阳性表达。１５　统计学分析　采用ＳＰＳＳ１１５处理。用χ２检验、Ｆｉｓｈｅｒｓ确切概率法和Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关分析；生存曲线采用ＫａｐｌａｎＭｅｉｅｒ法，生存比较用ＬｏｇＲａｎｋ检验。以Ｐ＜００５为差异有统计学意义。２　结　果２１　乳腺癌组织中ＯＢ和ＯｂＲ的表达与临床病理之间的关系　ＯＢ和ＯｂＲ的表达产物均定位于细胞质，呈黄色或棕黄色（图１）。在１１４例乳腺癌组织中，ＯＢ的阳性率为７９８％（９１／１１４），ＯｂＲ的阳性率为８５１％（９７／１１４）。其中ＯＢ强阳率为２１１％（２４／１１４），ＯｂＲ强阳性率为１１４％（１３／１１４）。ＯＢ和ＯｂＲ的表达与患者的年龄、绝经状态、肿瘤大小、病理分型、淋巴结转移及远处转移均无关（Ｐ＞００５）；与ＥＲ、ＰＲ、ｐ５３的表达状态也无关（Ｐ＞００５）；而ＯｂＲ和ＨＥＲ２表达均阳性者３２例，均阴性者１６例，ＨＥＲ２阴性ＯｂＲ阳性者６１例，ＯｂＲ阳性ＨＥＲ２阳性者１例，差异有统计学意义（Ｐ＝００１８）。见表１。表１　ＯＢ和ＯｂＲ的表达与临床病理之间的关系临床病理参数ＯＢ＋－ＰＯｂＲ＋－Ｐ年龄（岁）５３８±１１４５６１±１１９０４５５４５±１１０５２２±１４１０４５月经状态０５２０１４　绝经前６１６６９９　绝经后３０１７２８８肿瘤大小０５９０１９　Ｔ１４１１３４３１１　Ｔ２４２８４６４　Ｔ３８２８２病理类型０６９０４１　浸润性导管癌７７１９８３１３　浸润性小叶癌４２４２　导管内癌１０２１０２淋巴结转移０１６０７２　[phone]远处转移０２６０１１　有２６４２８２　无６５１９６９１５ＥＲ０５００３１　[phone]ＰＲ０４００８２　[phone]ｐ５３０３２０６１　[phone]ＨＥＲ２０１５００１８　[phone]·４９４·　临床肿瘤学杂志２０１０年６月第１５卷第６期　ＣｈｉｎｅｓｅＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，Ｊｕｎ．２０１０，Ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．６　Ａ：ＯＢ阳性表达；Ｂ：ＯＢ阴性表达；Ｃ：ＯｂＲ阳性表达；Ｄ：ＯｂＲ阴性表达图１　乳腺癌组织ＯＢ和ＯｂＲ的表达（ＳＰ×１００）２２　ＯＢ、ＯｂＲ、ＨＥＲ２和ｐ５３之间的相关性　１１４例乳腺癌组织标本中，ＯＢ表达阳性者９１例，阴性者２３例；ＯｂＲ表达阳性者９７例，阴性者１７例；ＯＢ和ＯｂＲ表达均呈阳性者８３例，均阴性者９例；ＯＢ表达阴性２３例中，ＯｂＲ表达阳性１４例；ＯｂＲ表达阴性的１７例中，ＯＢ表达阳性８例，经Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关分析，两者表达具有一致性（ｒ＝０３４２，Ｐ＜００１）；ＯｂＲ和ＨＥＲ２表达均阳性者３２例，均阴性者１６例，经Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关分析，两者表达亦具有一致性（ｒ＝０２２５，Ｐ＝００１８）；ＨＥＲ２和ｐ５３表达均呈阳性者５例，均阴性者８４例；ＨＥＲ２表达阴性的９８例中，ｐ５３表达阳性１４例；ｐ５３表达阴性的９１例中，ＨＥＲ２表达阳性７例，经Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关分析，两者表达也具有一致性（ｒ＝０２２６，Ｐ＝００１８）。２３　ＯＢ、ＯｂＲ与预后的关系　１１４例乳腺癌患者的中位生存时间（ＯＳ）为４８２个月，５年无瘤生存率和总生存率分别为８２％和７９３５％。ＯＢ和ＯｂＲ的表达与疾病无进展生存期（ＤＦＳ）均无关（Ｐ＝０６０７，Ｐ＝００５１）；ＯＢ阳性者的ＯＳ明显短于ＯＢ阴性者（Ｐ＝０００９），但ＯｂＲ的表达与ＯＳ无明显相关性（Ｐ＝０２０２）。亚组分析中，在使用三苯氧胺治疗的病例中，ＯＢ与ＯＳ无关（Ｐ＝００７８）；在绝经后的病例中，ＯＢ阳性组的ＯＳ明显短于ＯＢ阴性组（Ｐ＝００３８），但ＯｂＲ的表达与ＯＳ无关；在Ｅ