检测系统的评价与验证

1临床生化实验方法的选择和评价2教学目的和要求：掌握:实验方法的分级、标准品分级及相互之间的联系熟悉:实验方法选择的的原则；实验误差的定义、分类和表示方法；方法评价的指标；了解:实验方法选择评价的步骤；方法评价实验:回收实验和干扰实验的定义、原理和应用。3第一节实验方法的选择选择准确可靠的实验方法为临床提供准确可靠的信息临床生化检验分析保证4一、实验方法选择的目的根本目的：①各实验室按照方法选择的原则结合自身条件，确定合适的某项目的检测方法。②保证拟使用的检测方法在正式应用于临床分析病人标本之前，对方法性能及可能引入的误差进行了解，作出初步评估。5二、实验方法的分级分级依据国际临床化学联合会（IFCC）根据分析方法的准确性与精密度的不同。决定性方法参考方法常规方法分为三级：6（一）决定性方法定义：是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，其测定结果与真值最为接近。主要方法：重量分析法、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）7应用：由于技术要求太高，费用昂贵，这类方法不直接用于鉴定常规方法的准确性，只用于评价参考方法与一级标准品。储氢重量分析仪(北京英格海德分析技术有限公司)8（二）参考方法定义：是指准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的方法。这类方法干扰因素少，系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中的随机误差可以忽略不计。主要方法：原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化学法，离子交换层析法等9应用：能在条件优越的实验室作常规分析，主要用于鉴定常规方法，评价其误差大小、干扰因素并决定是否可以被接受；用于鉴定二级标准品和为质控血清定值；用于商品试剂盒的质量评价。10（三）常规方法定义：应具有足够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析范围，经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要。主要方法：溴甲酚绿法、双缩脲法、J-G法等。应用：临床常规检验使用，常规方法在作出评定以后，经有关学术组织认可，可以作为推荐方法。11项目决定性方法参考方法钙ID-MS原子吸收分光光度法氯电量滴定法、中子活化法电流滴定法镁ID-MS原子吸收分光光度法磷ID-MS钾ID-MS、中子活化法火焰光度法钠重量分析法、中子活化法火焰光度法白蛋白免疫化学法总蛋白双缩脲法肌酐ID-MS、离子交换层析法离子交换层析法尿素ID-MS尿素酶法尿酸ID-MS尿酸酶法（紫外法）胆红素——重氮反应法葡萄糖ID-MS己糖激酶法胆固醇ID-MSAbell-Kendall法，胆固醇氧化酶法甘油三酯ID-MS酶法AST（GOT）——MDH-NADH法ALT（GPT）——LDH-NADH法转肽酶（r-GT）——连续监测产物生成法肌酸激酶——NAD+偶联法ID-MS：同位素－质谱稀释法12三、标准试剂的分级标准试剂（标准品）的定义：国际标准化委员会将标准品的定义暂定为：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定；被用于校正仪器或用于评价一种测定方法的物质，并将其分成三级。标准品的应用：方法评价、仪器校正、常规分析的质量控制13标准品的分级：一级标准品二级标准品控制物14（一）一级标准品（原级参考物）定义：是已经确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定或由高度准确的若干方法确定，所含杂质已经定量。应用：用于校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品”定值。15（二）二级标准品（次级参考物）定义：这类标准品可以是纯溶液（水或有机溶剂的溶液），也可以存在于相似基质中。可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法定值或用一级标准品比较而确定。应用：主要用于常规方法的标化和控制物的定值。16（三）控制物（质控物）用二级标准品和常规方法测定，用于常规质量控制，以控制病人标本的测定误差。控制物不能用于标定仪器或方法。定值血清：在发生问题时查找原因未定值血清：一般情况下使用17决定性方法一级标准品参考方法二级标准品常规方法控制物18四、实验方法选择的原则总原则：从实际出发，根据实验室的条件和检测要求确定适当的方法。条件优越的实验室：参考方法一般临床化学实验室实验室：常规方法或使用方便的参考方法19尽量选用国内外通用方法或推荐方法，便于方法的规范化和质量控制，重点考虑实用性和可靠性。常规方法选择时的原则：20（一）实用性微量快速、方法简便、安全可靠、成本低廉（二）可靠性所选方法具有较高的精密度、准确度和较大的检测能力，保证测定结果的准确性能满足方法允许误差限度的要求。标本μl、试剂ml21五、实验方法选择的步骤根据方法选择的要求对已发表的各种方法进行比较与检验，确定哪些方法有充分的科学根据及真实的使用价值。必须仔细分析各种方法的特点，选择适合于本实验室具体条件的方法，并且要判断所选方法能否满足本室工作的需要。（一）广泛查阅文献：根据方法选择的要求，比较各种方法（二）选定侯选方法：全面认识该法。（三）侯选方法的初步试验：经初步选定的方法称为候选方法。候选方法确定后，应该写出该法的原理与参考文献，所用仪器、试剂的来源、牌号、纯度（或配套试剂盒），标本收集要求，详细的操作步骤，标准曲线和结果计算，文献中列出的性能指标，参考值与参考范围，以及其它应注意的事项与安全防护措施等。1.根据方法性能选择2.根据所需条件设备选择详见教材P8为了实用的目的，初试应该包括①标准曲线及其重复性；②质控血清或新鲜标本的重复试验；③分析待测物浓度不同的标本，与公认的参考方法的测定值作对比；④要有足够的试验证明仪器与试剂能符合要求。22第二节实验方法的评价初步试验判断符合实验要求系统评价决定该方法是否可接受分析评价试验测得结果和比较方法性能判断的标准实验方法系统评价的过程:对实验误差的测定23一、实验误差定义:指量值的给出值与其客观真值之差.(一)实验误差的分类:依据来源性质实验误差系统误差随机误差恒定系统误差比例系统误差广泛性不可求24系统误差定义:指一系列测定值对真值存在同一倾向的偏差。特点:①具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向；②一般由恒定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复出现；③当找到引起误差的原因，采取一定措施即可纠正，消除系统误差能提高测定的准确度。25分类:恒定系统误差：指由干扰物引起的使测定值与真值存在恒定大小的误差，误差大小与被测物浓度无关，而与干扰物浓度相关。比例系统误差：指相对于被测物浓度有相同的百分比误差，误差的绝对量与被测物浓度成正比。引起误差的原因：①方法误差：最严重，最难避免；②仪器和试剂误差：可以采取措施避免。26随机误差特点:①误差没有一定的大小和方向，可正可负，数据呈正态分布；②具有不可预测性，不可避免，但可控制在一定范围内；③当分析步骤越多，造成种误差的机会越多；④随测定次数增加，其算术均数就越接近于真值。定义:指在实际工作中，多次重复测定某一物质时引起的误差。27由测定仪器、试剂、环境等实验条件的改变以及分析人员操作习惯等因素的变化而引起。引起误差的原因：28二、方法评价的基本内容和步骤(一)方法评价的基本内容基本内容:通过实验途径，测定并评价方法的精密度和准确度。评价试验的过程:就是对误差的测定。精密度和准确度误差方法评价指标不可直接测定实际测定可直接测定方法评价试验29(二)方法评价步骤评价前实验:研究候选方法的最适条件。初步评价:批内和日内重复性试验、回收试验、干扰试验最后评价:依顺序作日间重复性试验，方法比较试验和总体判断方法是否可接受。评价后实验:如方法可接受，则进行临床相关研究.方法应用:建立质控系统，培训操作者，引人常规工作等。随机误差系统误差方法性能判断诊断学评价30三、方法评价指标精密度、准确度、特异度和干扰以及线性范围等（一）精密度表示测定结果中随机误差大小程度的指标。它表示同一标本在一定条件下多次重复测定所得到的一系列单次测定值的符合程度。常用标准差（S）或变异系数（CV％）表示。（二）准确度：指测定结果与真值接近的程度正确度（偏倚）31（四）特异度和干扰即专一性，是指在特定实验条件下分析试剂只对待测物质起反应，而不与其它结构相似的非被测物质发生反应。分析方法特异度越高，则测定结果越准确。化学反应中能检出的最小量。即检测限度或检出限，是指能与适当的“空白”读数相区别的待测物的最小值。（三）灵敏度（五）线性范围实验方法所能检测标本中某物质的浓度范围。32四、评价试验评价试验包括重复性试验回收试验干扰试验方法比较试验33（一）重复性试验试验的目的:试验的方法:对同一材料（标准液、质控液、标本等）分成数份试验标本进行多次分析测定，并计算其均数、标准差与变异系数。检测候选方法的随机误差（1）批内:标准液（2）日内:（3）日间:质控液（4）平行双份:试验的形式:应注意的问题:（1）分析标本选择（2）被测物浓度34(二)回收试验试验的目的:试验的方法:将被测物标准液加人病人标本中，成为分析标本；原病人标本中加人等量的无被测物的溶剂作基础标本；然后用候选方法测定并得到各自浓度。检测候选方法的比例系统误差。回收:指候选方法准确测定加入常规分析标本的纯分析物的能力。35回收浓度=分析标本测得浓度-基础标本测得浓度（实际测得值）计算:加入浓度=标准液量病人样品量（ml）＋标准液量（ml）×标准液浓度（理论真实值）回收率（%）=回收浓度加入浓度×100（理想值为１００％）36(三)干扰试验试验的目的:用来检测候选方法的恒定系统误差。干扰物浓度不同，误差大小也不同干扰:指标本中某些非被测物质本身不与分析试剂反应但以其它形式使待测物测定值偏高或偏低。37试验的方法:基本与回收试验一样，但在病人标本中加人的是疑有干扰或非特异性反应的物质。将可能引起干扰的物质配成一定浓度的溶液，加到病人标本中成为干扰分析样本；原病人标本加人相同量的无干扰物质的溶剂作为基础样本；然后用候选方法对此两种样本同时测定，两者之差即表示该干扰物质产生的干扰所引起的误差，即干扰值干扰值=分析标本测得浓度-基础标本测得浓度计算:38(四)方法比较试验（对比试验）用于检测候选方法的系统误差。对所得数据进行分析，可提供系统误差的性质（恒定或／和比例误差）对一组病人的标本用候选方法和比较方法同时进行分析测定，观察二者之间的差异。这是考验候选方法是否可采用的重要措施。39①在进行临床化学常规方法的评价时，最好选择参考方法作为比较方法②若采用已知偏差法，则有部分误差来自比较方法（与已知偏差一致的那部分误差），剩余的则属于侯选方法。③若采用未知偏差法，分析误差可能来源于二者之一或两者都有，难以分析。40方法学评价实验小结重复性试验：测定候选方法的偶然误差，衡量精密度。回收试验：测定比例系统误差，衡量准确度。干扰试验：测定恒定系统误差，衡量准确度。方法比较试验测定系统误差41作业：如何选择生化实验方法，怎样对其进行评价？