动物细胞培养和核移植ppt

1、植物细胞工程常用的技术手段有哪些？2、原理？3、关键词？4、植物细胞工程的实际应用？植物组织培养技术、植物体细胞杂交技术细胞的全能性；细胞膜的流动性和细胞的全能性细胞的全能性、离体、脱分化、愈伤组织、再分化、酶解法、物理法（电激、振动、离心）、化学法聚乙二醇（PEG）、植物细胞工程的实际应用一、植物繁殖的新途径二、作物新品种的培育三、（6）细胞产物的工厂化生产（5）突变体的利用（3）人工种子（4）单倍体育种（2）作物脱毒（1）微型繁殖专题2.2动物细胞工程动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体制备细胞核移植动物细胞工程技术动物细胞工程的基础2.2.1动物细胞培养和核移植技术（三）过程幼龄动物剪碎组织原代培养取动物器官和组织细胞悬浮液传代培养胰蛋白酶处理单个细胞胰蛋白酶处理单个细胞细胞贴壁细胞的接触抑制分瓶动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬液10代细胞50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液（分解细胞间的蛋白）原代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎细胞株细胞系动物组织细胞间隙中含有一定量蛋白质遗传物质未改变遗传物质已改变分瓶目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持正常二倍体核型。（一）、概念是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。（二）、原理细胞分裂增殖有关概念原代培养：人们通常将动物组织消化后的初次培养成为原代培养。通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代培养。传代培养：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，通常被称为传代培养。（将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。）原代培养：传代培养：原代培养与传代培养的区别分装之前，10代以前分装后继续培养，10代以后细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去细胞接触抑制，容易传代培养。细胞的接触抑制细胞贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。细胞系思考题：1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。(1)成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖(2)成块组织使细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等)。4、细胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？注意时间的控制不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近8、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？易于培养细胞贴壁，进行生长增殖1、无菌、无毒的环境保证细胞顺利的生长增殖添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。（四）、动物细胞培养的条件2、营养3、温度和pH培养室中控制,使之达到36.5±0.5℃,7.2~7.4培养所需气体O2和CO2（置于含95%空气和5%的CO2培养箱中）4、气体环境：O2和CO2作用？O2和是细胞代谢所必需的，（有氧呼吸）CO2的主要作用是维持培养瓶的pH（五）、动物细胞培养技术的应用（4）细胞的生理、药理、病理研究（1）获得有重要价值的生物制品，如疫苗、干扰素（2）基因工程的受体细胞（3）用于检测有毒物质细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果获得细胞或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、血清、血浆蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较（一）、动物细胞核移植的概念：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体.克隆动物：用核移植的方法得到的动物。（二）、分类：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易细胞分化程度高，恢复全能性困难卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵细胞(三）体细胞的核移植过程卵母细胞去核体细胞取核重组细胞重组胚胎新个体电激使两细胞融合或核移植MⅡ期（减Ⅱ中）的卵母细胞１、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的核遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞（四）体细胞核移植技术的应用前景1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程2、保护濒危物种3、生产医用蛋白质及组织器官的移植的供体（五）、体细胞核移植技术存在的问题1、克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚。2、克隆技术效率低，畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。3、生产克隆动物费用昂贵。二动物体细胞核移植技术和克隆动物一动物细胞培养概念过程原理应用概念过程应用存在问题体细胞核移植胚胎细胞核移植2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是（）A．获得不死性的细胞B．10代以内细胞C．原代细胞D．传代细胞1、动物细胞工程技术的基础是（）A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养AD课堂反馈练习3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（）A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞分泌蛋白B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡过程中D、培养至50代后传代细胞遗传物质没有发生改变B4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（）①无毒的环境②无菌的环境③培养基需要加入血清④温度与动物体温相似⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能调节培养液PHA、①②③④⑤⑥B、①②③④C、①③④⑤⑥D、①②③④⑥D5、动物细胞培养的特点（）①细胞贴壁②有丝分裂③细胞分化④接触抑制⑤减数分裂⑥原代培养一般传1－10代A、①②④⑥B、②③④⑤C、①③④⑥D、③④⑤⑥A6、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是--------------------（）A．细胞系B．细胞株C．原代细胞D．传代细胞A7、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）A.容易产生各种变异B．具有更强的全能性C.取材十分方便D．分裂增殖的能力强D8.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于------------------------------（）A.培养基不同；B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。A9、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自______________________。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是___________________________________。动物胚胎或幼龄动物剪碎胰蛋白使细胞与培养液充分接触，便于培养（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有________________等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第代，到这时的培养称为__。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配置成，再分装。`动物血清10原代培养胰蛋白酶细胞悬浮液一、动物细胞融合受精作用动物细胞融合细胞A细胞B杂种细胞灭活的病毒物理法化学法用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核病毒颗粒细胞核细胞融合与融合诱导细胞融合物质诱导剂：病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的病毒必须灭活。思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？二、单克隆抗体什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的,并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。效应B淋巴细胞产生抗体。效应B淋巴细胞与抗体１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。２．动物体内的效应B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。３．每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。单克隆抗体由单个效应B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。特点：特异性强、灵敏度高单克隆抗体制备过程注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔（体内）单克隆抗体如何大量生产单克隆抗体？利用淋巴细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞思考：1、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体3、整个制备过程为何要经过两次筛选?（1）第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。（2）第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。单克隆抗体的应用与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高。应用主要有：1、作为诊断试剂2、用于治疗疾病和运载药物。作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤生物导弹：单克隆抗体作为载体分子，同抗癌药物相结合，将他们运载到肿瘤部位，杀死癌细胞，这种抗体——药物结合物称之为“生物导弹”。它能定向杀灭癌细胞。既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞全能性细胞膜的流动性细胞融合的方法去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合诱导方法物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒用途获得杂种植株制备单克隆抗体小结两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是__________3、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______5、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC1.动物细胞工程技术的基础是：（）A．动物细胞融合B．胚胎移植