动物细胞融合与单克隆抗体04427

知识回顾？？？？再分化？植物细胞杂交技术利用什么原理？用什么方法可以诱导植物细胞融合？一、原理：细胞膜具有流动性细胞的全能性二、诱导方法：电刺激、聚乙二醇植物细胞杂交技术有什么用途？三、用途：获得杂种植株脱分化一、动物细胞融合（细胞杂交）P521、原理：细胞膜的流动性2、诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒3、动物细胞融合过程4、意义5、应用突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞进行有丝分裂3、动物细胞融合过程提问？1.抗体是由何种细胞产生的？2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？3.简述获得抗体的传统途径？这种方法获得的抗体有什么缺陷？二、单克隆抗体4.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题？效应B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养1、单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞。该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高产生相应的B淋巴细胞如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体。那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。(2)、过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养基第一次筛选杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养专一抗体检测第二次筛选相应杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体三、单克隆抗体的应用2.单克隆抗体的应用有哪些？3.生物导弹的组成及优点（1）作为诊断试剂：准确识别各种抗原质，并与特异性结合优点：准确、高效、简易、快速(2)治疗疾病：主要用于癌症治疗(3)运载药物：制成“生物导弹”组成：“生物导弹”=单克隆抗体+药物+放射性同位素优点：疗效高、毒副作用小。1、单克隆抗体的优点是什么？特异性强、灵敏度高并能大量制备一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞灭活病毒杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞A2..动物细胞融合的目的中最重要的是----------------（）A.克服远缘杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新品种D.生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段基本相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成杂种细胞BD4.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是------（）A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成D创新应用训练4．右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？。原因是。（2）图中②为过程，常用作为诱导剂。该细胞继承了，因此不仅能分泌，还有本领。（3）该方案的目的是。不能没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞.细胞融合灭活病毒双亲细胞的遗传物质特异性抗体在体外培养条件下大量增殖制备单克隆抗体