生物基因工程的基本操作程序

转基因生物转黄瓜抗青枯病基因的甜椒转鱼抗寒基因的番茄转黄瓜抗青枯病基因的马铃薯不会引起过敏的转基因大豆水母基因工程的基本操作程序苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。想一想需要做哪些工作？苏云金芽孢杆菌毒蛋白普通棉花抗虫棉获取目的基因制备重组DNA分子转化受体细胞筛选重组细胞基因工程的基本操作程序实现功能表达学习目标：1、简述基因工程的五步基本操作程序2、叙述获取目的基因的方法3、说明基因表达载体的组成及各组件的功能。4、说明基因表达载体构建过程。5、说出三类受体细胞的转导方法。1、人工合成(基因比较小，序列已知)获取目的基因DNA合成仪目的基因的获取方法1）反转录法：蛋白质mRNADNA推测推测DNADNA合成仪合成仪合成2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法：2、从基因文库中获取(基因序列未知)基因文库基因组文库部分基因文库目的基因的获取3、利用PCR技术扩增目的基因聚合酶链式反应目的基因的获取作为基因表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？制备重组DNA分子（基因表达载体的构建）基因工程的核心基因表达载体的组成：a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因e、复制原点运载体目的基因限制酶切同一种黏性末端黏性末端DNA连接酶重组DNA分子基因表达载体的构建有几种重组DNA？质粒一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种限制酶目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。DNA分子转化目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。转化受体细胞常用的受体细胞种类：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌、动植物细胞等转化受体细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法显微注射技术氯化钙法受体细胞植物细胞动物细胞原核细胞农杆菌转化法适用于双子叶植物裸子植物适用于单子叶植物基因枪法花粉管通道法适用于被子植物将目的基因导入动物细胞①方法：显微注射法②程序：目的基因表达载体提纯取卵（受精卵）显微注射受精卵新性状动物将目的基因导入微生物细胞①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少②方法：用Ca2+处理细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子实验抗原－抗体杂交法DNA-RNA分子杂交法DNA分子杂交法受体是否具有转基因特征个体水平目的基因是否翻译目的基因是否转录目的基因是否导入分子水平方法检测对象筛选重组细胞实现功能表达(目的基因的检测与表达)个体生物学水平抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等归纳：基因工程的基本过程五个步骤：1、获取目的基因2、制备重组DNA分子3、转化受体细胞4、筛选重组细胞5、实现功能表达思维训练1、基因工程又叫基因拼接技术。（1）在该技术中，用人工合成方法获得目的基因的途径之一是：以目的基因转录的___________为模板，__________成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成__________。mRNA双链DNA反转录2、在基因工程技术中，下列方法与目的基因获得无关的是A.辐射诱变法B.从基因文库中获取C.反转录法D.人工合成法A3、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达C4、为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。（1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的处，DNA连接酶作用于处。（填“a”或“b”）aa4、为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和法。（3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用技术，该技术原理是。（4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的_______________作探针进行分子杂交检测，又要用__________方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。基因枪法（花粉管通道法）植物组织培养耐盐基因（目的基因）一定浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中）植物细胞的全能性