JJF18742020自动核酸提取仪校准规范

中华人民共和国国家计量技术规范JJF1874—2020(自动)核酸提取仪校准规范CalibrationSpecificationfor(Automatic)NucleicAcidExtractors2020-11-26发布2021-05-26实施国家市场监督管理总局发布(自动)核酸提取仪校准规范CalibrationSpecificationfor(Automatic)NucleicAcidExtractors􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀥣􀧣􀧣􀧣􀧣JJF1874—2020归口单位:起草单位:本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释JJF1874—2020本规范主要起草人:参JJF1874—2020目录引言(Ⅲ)………………………………………………………………………………………1范围(1)……………………………………………………………………………………2引用文件(1)………………………………………………………………………………3概述(1)……………………………………………………………………………………4计量特性(1)………………………………………………………………………………4.1温度示值误差(1)………………………………………………………………………4.2温度均匀性(1)…………………………………………………………………………4.3温度稳定性(1)…………………………………………………………………………4.4振动频率示值误差(1)…………………………………………………………………4.5振动频率稳定性(1)……………………………………………………………………4.6取液量示值误差(1)……………………………………………………………………4.7取液量重复性(1)………………………………………………………………………4.8取液量一致性(1)………………………………………………………………………4.9核酸提取回收率一致性(1)……………………………………………………………4.10核酸提取回收率重复性(1)…………………………………………………………4.11核酸提取回收率(1)…………………………………………………………………5校准条件(1)………………………………………………………………………………5.1环境条件(1)……………………………………………………………………………5.2校准设备和标准物质(2)………………………………………………………………6校准项目和校准方法(2)…………………………………………………………………6.1温度示值误差(2)………………………………………………………………………6.2温度均匀性(2)…………………………………………………………………………6.3温度稳定性(3)…………………………………………………………………………6.4振动频率示值误差(3)…………………………………………………………………6.5振动频率稳定性(3)……………………………………………………………………6.6取液量示值误差(4)……………………………………………………………………6.7取液量重复性(4)………………………………………………………………………6.8取液量一致性(4)………………………………………………………………………6.9核酸提取回收率一致性(5)……………………………………………………………6.10核酸提取回收率重复性(5)…………………………………………………………6.11核酸提取回收率(6)…………………………………………………………………7校准结果表达(6)…………………………………………………………………………8复校时间间隔(6)…………………………………………………………………………附录A校准原始记录格式(参考)(7)…………………………………………………附录B校准证书(内页)格式(10)………………………………………………………ⅠJJF1874—2020附录C温度示值误差校准结果的不确定度评定示例(12)………………………………附录D振动示值误差校准结果的不确定度评定示例(14)………………………………附录E取液量示值误差校准结果的不确定度评定示例(16)……………………………附录F核酸提取回收率校准结果不确定度评定示例(18)………………………………附录G纯水密度表(20)……………………………………………………………………ⅡJJF1874—2020引言JJF1071—2010《国家计量校准规范编写规则》、JJF1001—2003《通用计量术语及定义》、JJF1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》共同构成支撑校准规范制修订工作的基础性系列规范。本规范在(自动)核酸提取仪的主要技术参数实验测试结果的基础上编制,参考了JJF1527—2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》。本规范为首次发布。ⅢJJF1874—2020(自动)核酸提取仪校准规范1范围本规范适用于全自动核酸提取仪和半自动核酸提取仪的校准。2引用文件本规范引用了下列文件:JJF1059.1—2012测量不确定度评定与表示JJF1101—2019环境试验设备温度、湿度校准规范JJF1527—2015聚合酶链反应分析仪校准规范凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本规范。3概述(自动)核酸提取仪(以下简称提取仪)是应用核酸提取试剂完成样本核酸提取的一类核酸提取纯化设备,其原理是在一定温度、振动等条件下,对样本进行裂解、提取和纯化。提取仪由温控系统、振荡系统、取液系统和分离纯化系统全部或部分组成。4计量特性4.1温度示值误差4.2温度均匀性4.3温度稳定性4.4振动频率示值误差4.5振动频率稳定性4.6取液量示值误差4.7取液量重复性4.8取液量一致性4.9核酸提取回收率一致性4.10核酸提取回收率重复性4.11核酸提取回收率5校准条件5.1环境条件5.1.1环境温度:(10~30)℃。5.1.2相对湿度:≤80%。5.1.3提取仪所在室内不得有明显的机械振动,无电磁干扰。1JJF1874—20205.1.4其他允许的环境条件。5.2校准设备和标准物质5.2.1温度测量装置可至少同时测量7组温度数据,测量范围(0~120)℃,最大允许误差±0.3℃。5.2.2振动频率测量装置测量范围为(0.1~500)Hz,0.1级或优于0.1级。5.2.3电子天平分度值0.1mg,最大称量值≥200g,满足Ⓘ级要求,经过计量检定或校准。5.2.4核酸标准物质采用有证标准物质,浓度≥1000ng/μL,相对扩展不确定度Urel≤5%(k=2)。5.2.5微量分光光度计经过校准,或用有证标准物质进行标定。6校准项目和校准方法6.1温度示值误差温度点一般选择55℃、65℃、90℃,或者其他有实际需要的温度为校准点。使用温度测量装置,将温度传感器固定在提取仪的加热模块上,温度传感器均匀分布,保证温度传感器与加热模块贴合紧密。对于不同加热模块的提取仪,可根据实际情况均匀选取测量点,测温点数选取规则如下:提取仪孔位数48位~96位,测温点选7个;提取仪孔位数8位~48位,测温点选5个;提取仪孔位数8位及以下的,测温点选3个。设定被校提取仪的校准温度,稳定10min或以上,待温度稳定后,读取测温点的温度值,根据公式(1)和公式(2)计算温度的示值误差。ΔTa=Ts-T(1)T=1n∑ni=1Ti(2)式中:ΔTa———温控工作区域内温度示值误差,℃;Ts———温控工作区域内设定温度值,℃;T———所有测温点温度传感器测量值的平均值,℃;Ti———第i个温度传感器测量值,℃;n———测温点数量。6.2温度均匀性分别测试提取仪温度设定为55℃、65℃、90℃(也可选择其他有实际需要的温度进行测试)时工作区域的温度均匀性。根据公式(3)计算温度的均匀性。ΔTu=Tmax-Tmin(3)式中:ΔTu———温度均匀性,℃;2JJF1874—2020Tmax———所有测温点温度传感器测量值的最大值,℃;Tmin———所有测温点温度传感器测量值的最小值,℃。注:若提取仪提取通道少于3个,则不做均匀性考察。6.3温度稳定性测试提取仪温度设定为65℃时加热区域的温度稳定性。待提取仪温度稳定后,测试10min,隔1min记录一次所有测温点温度传感器测量平均值,这些平均值极差的一半,冠以±号表示温度的稳定性。根据公式(4)计算温度的稳定性。ΔTw=±12(Tmax-Tmin)(4)式中:ΔTw———温度稳定性,℃;Tmax———所有测温点温度传感器测量平均值中的最大值,℃;Tmin———所有测温点温度传感器测量平均值中的最小值,℃。6.4振动频率示值误差校准振动频率点选取提取仪频率设定最大值的20%(低)、50%(中)、80%(高)3个点,或者其他有实际需求的振动频率作为校准点。使用振动频率测量装置进行测量。待提取仪稳定5min后,设定待测频率值,分别测量低、中、高提取仪振动频率的示值,每个频率测量3次,根据公式(5)和公式(6)计算振动频率的示值误差。ΔFa=Fs-F(5)F=1n∑ni=1Fi(6)式中:ΔFa———振动频率示值误差,Hz;Fs———振动频率设定值,Hz;F———n次测量振动频率的平均值,Hz;Fi———第i次振动频率测量值,Hz;n———测量次数。注:若提取仪振动频率没有具体数值,则此项可以不做。6.5振动频率稳定性测试提取仪振动频率设定为中等值时振动频率的稳定性。选取振动频率为设定最大值的50%,待提取仪振动稳定后,测试10min,隔1min记一次振动频率,10min之内测得的振动频率极差的一半,冠以±号表示振动频率的稳定性。根据公式(7)计算振动频率的稳定性。ΔFw=±12(Fmax-Fmin)(7)式中:ΔFw———振动频率稳定性,Hz;3JJF1874—2020Fmax———振动频率测量值的最大值,Hz;Fmin———振动频率测量值的最小值,Hz。6.6取液量示值误差分别设定提取仪取液量为50μL、100μL、200μL,或者其他有实际需要的取液量作为校准点。超纯水作为被取液,选择一个通道,每个取液量测量3次,用电子天平称量所取液体质量,根据实验温度时水的密度,将所取液体的质量换算成体积,根据公式(8)和公式(9)计算取液量的示值误差。ΔVa=Vs-V(8)V=1n∑ni=1Vi(9)式中:ΔVa———取液量示值误差,μL;Vs———取液量设定值,μL;V———n次取液量测量值的平均值,μL;Vi———第i次取液量测量值,μL;n———测量次数。6.7取液量重复性测试取液量设定值为100μL时提取仪取液量的重复性。选择一个通道重复取液7次,用电子天平称量所取液体质量,根据实验温度时水的密度,将所取液体的质量换算成体积,根据公式(10)计算不同取液量的重复性。RSD=∑ni=1(Vi-V)2n-1×1V×100%(10)式中:RSD———相对标准偏差,%;Vi———第i次取液量测量值,μL;V———n次取液量的平均值,μL;n———取液次数。6.8取液量一致性测试取液量设定值为100μL时提取仪取液量的一致性。用提取仪的多通道取液器取液一次,用电子天平分别称量各通道取液的质量,根据实验温度时水的密度,将所取液体的质量换算成体积,所有通道取液体积的极差表示取液量的一致性。根据公式(11)计算取液量的一致性。ΔVu=Vmax-Vmin(11)式中:ΔVu———取液量一致性,μL;Vmax———所有通道取液量的最大值,μL;4JJF1874—2020Vmin———所有通道取液量的最小值,μL。注:若提取仪取液通道少于3个,则此项可以不做。6.9核酸提取回收率一致性a)选择有证核酸标准物质,采用微量分光光度计测量其浓度,取3次测量的平均