新鹅蟊藿香粒天灸对过敏性鼻炎小鼠的实验研究刘素文刘洋

鹅蟊藿香粒天灸对过敏性鼻炎小鼠的实验研究刘素文，刘洋（湖北省襄樊市中医院，441000）【摘要】目的：探讨鹅蟊藿香粒天灸穴位敷贴对过敏性鼻炎动物的EOS、MC、IL-4、IgE影响。方法：采用卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏与雾化吸入激发的方法建立小鼠过敏性鼻炎模型。将实验小鼠随机分为4组：正常对照组、模型对照组、阳性对照组、天灸治疗组。观察各组症状，记录过敏潜伏期，对鼻黏膜组织病检并对EOS、MC计数，检测血浆IL-4和IgE的含量。结果：与模型组比较各给药组对过敏性鼻炎潜伏期均有不同程度的延长作用，特别是鹅蝥藿香粒天灸治疗组与模型组有极显著性差异(PO.01)，病理变化得到明显改善，EOS、MC、IL-4、IgE下调明显。结论：鹅蟊藿香粒天灸对过敏性鼻炎动物有较好的治疗作用。【关键词】鹅蟊藿香粒天灸；过敏性鼻炎；EOS；MC；IL-4；IgE过敏性鼻炎(allergierhinitis，AR)也称变应性鼻炎，中医认为本病当属“鼻鼽”范畴，其发病乃肺气虚弱，卫外不固，腠理疏松，风寒之邪乘虚而入，肺受寒邪，肺气失宣，则鼻窍不利，而致鼻鼽，现代医学认为本病是由变应原激发的、由IgE介导的鼻黏膜炎症反应性疾病。AR的主要临床表现有鼻塞、流鼻涕、鼻痒、打喷嚏以及嗅觉功能障碍等。鹅蝥藿香粒是襄樊市中医院刘素文主任医师根据祖国医学内病外治、冬病夏治的理论及多年临床经验研制而成，其方由鹅不食草、斑蝥、细辛、藿香等中药组成，采用穴位敷贴天灸疗法,用于防治小儿过敏性鼻炎。本实验主要研究了鹅蟊藿香粒天灸对实验动物整体过敏性鼻炎症状及潜伏期和过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜组织中EOS、MC、IL-4、IgE的影响。1实验材料1.1实验药品鹅蝥藿香粒天灸:由鹅不食草、斑蝥、细辛、藿香组成；（襄樊市中医医院药剂科，批号：20100101）；布地奈德鼻喷雾剂：阿斯利康制药有限公司.瑞典，进口药品注册证号：H20080120，批准文号:国药准字J20040082，批号:0901005；1.2实验动物清洁级健康小鼠40只，雌雄各半，体重20±2g，购自华中科技大学同济医学院实验动物中心，实验动物质量合格证编号:NO.00005904。动物饲养：温度20±2℃，湿度40～70％，自然采光。不锈钢笼饲养，自由摄食进水。1.3实验试剂卵白蛋白：sigma分装，A5378；氢氧化铝：上海试一化学试剂有限公司，批号：0909008；白细胞介素-4放免药盒：美国R&D公司进口分装(BatchNo.1002125)；IgE放免药盒：美国R&D公司进口分装(BatchNo.1001034)。1.4实验仪器鱼跃402A1超声雾化器：江苏鱼跃医疗设备股份有限公司；THZ-103B恒温培养摇床：上海一恒科技仪器有限公司；LeicaRM2135石蜡切片机：德国莱卡公司；OlympusCX-41生物显微镜及成像系统：日本奥林巴斯OLYMPUS；Synergy2多功能酶标仪：美国Biotek公司。2实验方法2.1造模方法本实验参照文献[1]，采用卵白蛋白(OVA)注射雾化吸入法复制过敏性鼻炎小鼠模型。实验第ld，临时配制10%卵蛋白和10%AL(OH)3生理盐水溶液，每只小鼠腹腔注射OVA溶液0.2ml以致敏。注射后第15d，将致敏小鼠分别置透明密闭玻璃容器中，以5%OVA生理盐水溶液按最大雾化量进行雾化吸入，出现抓搔、鼻塞、喷嚏、呼吸急促深快、流涕等症状时为造模成功，约连续激发7d。2.2分组与给药小鼠取二个穴位：大椎，肺俞（双），给药方案：0.1g,给药面积为3.14mm2即直径为2mm的圆孔，每次2h。小鼠40只，雄性，体重20±2g。随机分为4组，每组10只，包括正常对照组、模型组、鹅蟊藿香粒天灸治疗组、布地奈德阳性对照组。除正常组外均采用雾化吸入法复制过敏性鼻炎。各组分别于造模第8天起给药。操作时先用脱毛膏将小鼠颈背部毛脱掉约2cm×3cm大小面积。鹅蟊藿香粒天灸组每只给鹅蝥藿香粒天灸贴敷，布地奈德组给布地奈德鼻喷雾剂，连续给药7d。各组均于雾化吸入前4h给药。2.3鼻部症状观察观察各组小鼠一般状态，以出现抓搔、鼻塞、喷嚏、流涕、烦躁等表现为激发成功。观察鹅蝥藿香粒天灸组和布地奈德鼻喷雾剂对过敏性鼻炎小鼠呼吸状态的影响。2.4对过敏性鼻炎小鼠过敏潜伏期的观察在末次气道吸入激发时，记录小鼠出现全身抓搔、鼻塞的时间记录为过敏潜伏期。如超过6min,仍不出现上述表现者，其潜伏期以360s计。2.5对过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜组织形态及EOS、MC数量及血清中IgE、IL-4含量的观察。小鼠处死后，暴露鼻中隔前中段，取鼻黏膜，10%甲醛溶液中，固定24h，切片方向为皮肤组织块纵切面，HE染色，观察组织形态。同时，每张病理切片随机选取5个高倍视野(10×40)计数过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜中EOS数。另外，还进行甲苯胺蓝染色，用于MC的计数。3实验结果3.1鼻部症状观察各组小鼠于激发前均状态良好，呼吸平稳，毛色光泽度好，活跃，饮食正常。激发后，正常对照组小鼠于激发前后状态无明显变化，而各造模组均出现呼吸及全身状态的改变，其症状类似过敏性鼻炎发作。激发时，各组小鼠出现呼吸急促，抓搔、鼻塞、喷嚏、流涕明显，口鼻及四肢轻度紫绀，烦躁不安或挣扎，皮毛蓬松，缺乏光泽，甚则瞳孔晦暗;激发后，精神较差，活动明显减少或俯卧不动，饮食减少等表现。各造模组经过给药治疗再次给予雾化吸入激发时，一般状态截然不同。模型对照组于空白贴剂治疗前后未见任何变化，仍出现上述症状;阳性对照组、天灸治疗组小鼠于激发时亦出现呼吸急促、抓搔、鼻塞、喷嚏、流涕、烦躁不安等表现。实验观察显示，鹅蝥藿香粒天灸对过敏性鼻炎的预防有效，同时，过敏性鼻炎小鼠呼吸及全身状态在给药前后有明显变化，鹅蝥藿香粒天灸能有效改善过敏性鼻炎小鼠全身状态，使其呼吸道趋于平稳，说明鹅蝥藿香粒天灸具有改善呼吸道过敏性症状的作用。3.2对过敏性鼻炎小鼠过敏潜伏期的影响表1对过敏性鼻炎小鼠过敏潜伏期的影响(X±s，n=8)组别潜伏期（s）正常对照组模型对照组阳性对照组天灸治疗组360±0**177±51▲▲284±42**243±42*图1鹅蝥藿香粒天灸对致敏小鼠过敏潜伏期的影响由表1、图1可见，与正常组比较各组的潜伏期明显变短，特别是模型组有极显著性差异(P0.001)，说明过敏性鼻炎模型成功；与模型组比较各给药组对过敏性鼻炎潜伏期均有不同程度的延长作用，特别是鹅蝥藿香粒天灸治疗组与模型组有极显著性差异(PO.01)，提示鹅蝥藿香粒天灸可明显提高过敏性鼻炎阈，对过敏性鼻炎小鼠有较好的保护作用。3.3对过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜组织及其中EOS、MC数量的影响病检结果显示：经鹅蝥藿香粒天灸治疗小鼠鼻黏膜上皮、黏膜下组织的病理变化得到明显控制，炎症反应明显减轻。但鼻腔内还有一定量的炎症渗出和增生。固有层偶见少量嗜酸性细胞浸润，腺体增生明显减轻。表2各组小鼠鼻黏膜组织中EOS、MC比较(X±s，n=8)组别EOS（个）MC（个）脱颗粒MC（个）正常对照组模型对照组阳性对照组天灸治疗组1.75±0.88**9.00±1.853.62±1.84**▲4.50±2.32*2.12±1.72**20.62±4.9512.25±5.72**▲13.87±6.35*▲1.12±1.12**14.00±5.636.12±2.64**▲8.50±2.82*▲图2各组小鼠鼻黏膜组织EOS、MC计数比较从表2、图2可见，模型对照组鼻黏膜组织中EOS、MC、脱颗粒MC值升高尤为明显，与正常对照组相比均有显著性差异(P0.01)，说明过敏性鼻炎可引起炎症细胞增多，具有炎症反应的病理基础。鹅蝥藿香粒天灸治疗组鼻黏膜组织中EOS、MC、脱颗粒MC与模型对照组比较，均有显著性差异(P0.01)，疗效显著；治疗后，鹅蝥藿香粒天灸治疗组鼻黏膜组织中EOS、MC、脱颗粒MC与正常对照组相比仍有显著性差异(P0.01)，说明鹅蝥藿香粒天灸虽然能很好地预防与控制炎症反应，但气道炎性病变仍然存在。3.4对过敏性鼻炎小鼠血清中IgE、IL-4含量的影响表3对过敏性鼻炎小鼠血清中IgE、IL-4含量的影响(X±s，n=8)组别IgE(μg/ml)IL-4(ng/ml)正常对照组模型对照组阳性对照组天灸治疗组0.482±0.181**0.987±0.2110.639±0.145**0.772±0.177**▲0.430±0.089**1.224±0.2380.754±0.138**▲0.946±0.163*▲注:同正常对照组比较▲P0.05；与模型对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。图1对过敏性鼻炎小鼠血清中IgE、IL-4含量的影响从表1、图1可以看出，正常对照组血清中IgE、IL-4含量均较低，模型对照组IgE、IL-4含量均明显升高，与正常对照组相比均有显著性差异(P0.01)。鹅蝥藿香粒天灸治疗组血清中IgE、IL-4含量明显降低，与模型对照组相比均有显著性差异(P0.01)，说明鹅蝥藿香粒天灸能显著降低细胞因子IgE、IL-4，可能是正常组模型组阳性组天灸组联合组预防组1234560.00.20.40.60.81.01.21.41.6UIgE(ug/ml)IL-4(ng/ml)其抗过敏性鼻炎的作用靶点之一。同时，天灸治疗组虽然能显著降低血清中的IgE、IL-4从而改善症状，但与正常组相比仍然有显著性差异(P0.05)，说明暂时还没有使血清IgE与IL-4完全恢复到正常。4讨论EOS是AR迟发相反应中的主要效应细胞，它通过释放炎症介质白三稀、血小板活化因子及细胞毒性蛋白质等在AR发病过程中起重要作用。本研究结果显示:鹅蝥藿香粒天灸可明显降低AR小鼠鼻粘膜组织中的EOS数。表明鹅蝥藿香粒天灸具有抑制EOS的免疫药理作用，这也可能是该药控制AR迟发相临床症状的作用机制之一。MC在AR的发病机制中起到核心作用，是AR速发相反应中的主要效应细胞。肥大细胞脱颗粒是机体的一种防御反应，也是速发型变态反应(I型超敏反应)和炎症等病理反应的基础。鹅蝥藿香粒天灸具有抑制MC与活化MC的免疫药理作用，提示穴位敷贴通过抑制VOA过敏性鼻炎小鼠肥大细胞释放组织胺、5-经色胺、白三烯、缓激肤、嗜酸性细胞趋化因子等过敏介质，降低血管通透性、减少炎症渗出等，发挥抗过敏作用。同时，稳定肥大细胞膜，抑制肥大细胞脱颗粒，减弱致炎介质产生。同时，本研究表明:在IgE、IL-4方面鹅蝥藿香粒天灸穴位治疗组与模型对照组血清中IgE、IL-4的含量相比，差异有显著性(P0.01)，说明布地奈德鼻气雾剂、鹅蝥藿香粒天灸刺激大椎穴、双侧肺俞穴均能有效降低过敏性鼻炎血清中IgE、IL-4的含量，从而起治疗过敏性鼻炎的效果。天灸疗法是古代冷灸法的一种，是根据天人相应内病外治的原理，以辛温发散之药外敷在局部俞穴之上并发泡，以达到祛除寒邪，宣通经络，补益人体正气之功效，本方选用鹅不食草、细辛、藿香等中药，其中鹅不食草、斑蝥、细辛、藿香具有祛风、散寒、通窍之功用，斑蝥可刺激皮肤发泡起到透皮的作用。通过药穴并举（鹅蝥藿香粒天灸）对小鼠过敏性鼻炎的实验研究，表明能减少鼻部症状，减轻鼻部鼻痒、喷嚏、清涕等症状；改善局部粘膜的充血、水肿；减少嗜酸性粒细胞在炎症局部的浸润，降低血清中IgE、IL-4的含量，从而有效的治疗过敏性鼻炎。【参考文献】[1]HylkemaMN，HoekstraMO，LuingeM，eta1．ThestrengthoftheOVAinducedairwayinflammationinratsisstraindependent．ClinExpImmunol，2002，129：390-396.