DBS22 007-2012 食品安全地方标准 食品中甜菊糖苷的测定 高效液相色谱法

DBS22吉林省地方标准DBS22/007—2012食品安全地方标准食品中甜菊糖苷的测定高效液相色谱法2012-12-10发布2013-01-01实施吉林省卫生厅发布DBS22/007—2012I前言本标准的附录A为资料性附录。本标准起草单位：吉林省疾病预防控制中心。本标准主要起草人：李青、方赤光、刘思洁、张冠英、王蕴馨。DBS22/007—20121食品安全标准食品中甜菊糖苷的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了食品中甜菊糖苷的高效液相色谱测定方法。本标准适用于饮料、糕点、糖果中甜菊糖苷的测定。2原理试料中甜菊糖苷经溶剂提取净化后，供高效液相色谱仪（紫外检测器）检测，外标法定量。3试剂与材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水应符合GB/T6682中一级水的规定。3.1乙腈（色谱纯）。3.2磷酸。3.3石油醚。3.40.002mol/L磷酸溶液：精密称取0.196g磷酸于1000mL容量瓶中，加水定容至刻度。3.5甜菊糖苷（SteviosideC38H60O18）标准品：含量99.7%CAS57817-89-7。3.6甜菊糖苷标准溶液：精密称取甜菊糖苷标准品10mg于10mL容量瓶中，加1ml乙腈，溶解后加水定容至刻度，得甜菊糖苷浓度为1mg/mL的标准溶液。3.7甜菊糖苷标准系列溶液的制备：精密吸取甜菊糖苷标准溶液0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL于10mL容量瓶中，加水稀释并定容至刻度，得浓度为5.0µg/mL、10.0µg/mL、20.0µg/mL、50.0µg/mL、100.0µg/mL的甜菊糖苷的系列标准溶液。取此系列标准溶液适量，过0.22nm有机膜待测。4仪器与设备4.1液相色谱仪：配紫外检测器。4.2电子分析天平：感量1mg。4.3混匀器。4.4离心机，转速大于5000r/min。4.5滤膜：0.22µm有机滤膜。5试料的制备5.1液体试料：称取5.0g试料，于10mL烧杯中，精确至0.01g，加流动相适量，混匀后，移入50mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。充分振荡混匀后，过0.22µm有机滤膜待测。DBS22/007—201225.2水溶性固体试料：取有代表性的混合均匀试料2.5g，于10mL烧杯中，精确至0.01g，加流动相适量，混匀后，移入50mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。充分振荡混匀后，过0.22µm有机滤膜待测。5.3水不溶性试料：取有代表性的混合均匀试料2.5g，于10mL烧杯中，精确至0.01g，移入50mL离心管中，加15ml石油醚涡旋振荡5min，在5000r/min下离心10min，将上清液弃去，残渣中再加15mL×3石油醚，重复以上步骤3次，弃去上清液，氮气吹干残渣。残渣中加1g无水硫酸钠和8m0.22µm有机滤膜乙腈，涡旋振荡5min，在5000r/min下离心10min，上清液置于25mL比色管中，重复提取1次，氮气吹干后，残渣用流动相全量转移到50mL容量瓶中并定容至刻度。充分混匀后过0.22µm有机滤膜待测。6分析步骤6.1高效液相色谱参考条件色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5µm）或性能相当的色谱柱；流动相：0.002mol/L磷酸溶液+乙腈=70+30；流速：1.0mL/min；柱温：30℃:；波长：210nm；进样量：10µL。6.2测定精密吸取试料和标准品溶液，按规定色谱条件分别进样10µL，以甜菊糖苷保留时间定性，外标法峰面积定量。标准色谱图详见附录A中A.1。7空白试验除不加试料外，按6∽7操作步骤进行测定。8结果的计算与表述结果按式(1)计算：10001000mVCX....................................(1)式中：X—试料中甜菊糖苷含量，mg/kg；C—从标准曲线中算出试液中甜菊糖苷的浓度，µg/mL；m—试料质量或体积，g或ml；V—试料定容体积，mL。9精密度9.1重复性DBS22/007—20123在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。9.2再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。10线性范围和检出限本方法的线性范围为5.0µg/mL～100.0µg/mL。检出限为4.00mg/kg。DBS22/007—20124AA附录A（资料性附录）甜菊糖苷的液相色谱图图A.1甜菊糖苷标准溶液色谱图_________________________________