GB 5009.202-2016 食品安全国家标准 食用油中极性组分（PC）的测定

书书书中华人民共和国国家标准犌犅５００９．２０２—２０１６食品安全国家标准食用油中极性组分（犘犆）的测定２０１６０８３１发布２０１７０３０１实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布书书书５００９．２０２—２０１６Ⅰ　　　　前　　言　　本标准代替ＧＢ／Ｔ５００９．２０２—２００３《食用植物油煎炸过程中的极性组分（ＰＣ）的测定》。本标准与ＧＢ／Ｔ５００９．２０２—２００３相比，主要变化如下：———标准名称改为“食品安全国家标准　食用油中极性组分（ＰＣ）的测定”；———修改了检测范围；———增加了制备型快速柱层析法为第一法；———对原有的柱层析法进行了修改，并作为第二法。５００９．２０２—２０１６１　　　　食品安全国家标准食用油中极性组分（犘犆）的测定１　范围本标准规定了食用动植物油脂中极性组分（ＰＣ）的测定方法。本标准适用于各类食用动植物油脂中的极性组分（ＰＣ）含量的测定。第一法　制备型快速柱层析法２　原理通过制备型快速柱层析技术的分离，油脂试样被分为非极性组分和极性组分两部分，其中非极性组分首先被洗脱并蒸干溶剂后称重，油脂试样扣除非极性组分的剩余部分即为极性组分。３　试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。３．１　试剂３．１．１　乙醚（Ｃ４Ｈ１０Ｏ），使用前在低温环境中放置数小时，使其温度控制在１０℃～１８℃之间。３．１．２　石油醚，３０℃～６０℃沸程，使用前在低温环境中放置数小时，使其温度控制在１０℃～１８℃之间。３．１．３　丙酮（Ｃ３Ｈ６Ｏ），使用前在低温环境中放置数小时，使其温度在１０℃～１８℃之间。３．１．４　三氯甲烷（ＣＨＣｌ３）。３．１．５　冰醋酸（Ｃ２Ｈ４Ｏ２）。３．１．６　９５％乙醇（Ｃ２Ｈ６Ｏ）。３．１．７　磷钼酸（Ｈ３ＰＯ４·１２ＭｏＯ３·２４Ｈ２Ｏ）。３．１．８　无水硫酸钠（Ｎａ２ＳＯ４），在１０５℃～１１０℃条件下充分烘干，然后装入密闭容器冷却并保存。３．２　试剂配制３．２．１　非极性组分洗脱液：石油醚＋乙醚＝８７＋１３，８７０ｍＬ的石油醚中加入１３０ｍＬ的乙醚，充分混匀，用时现配。３．２．２　极性组分洗脱液：丙酮＋乙醚＝４０＋６０，６００ｍＬ的乙醚中加入４００ｍＬ的丙酮，充分混匀，用时现配。３．２．３　薄层色谱展开剂：石油醚＋乙醚＋冰醋酸＝７０＋３０＋２，７０ｍＬ的石油醚中加入３０ｍＬ的乙醚和２ｍＬ的冰醋酸，充分混匀，用时现配。３．２．４　薄层色谱显色剂：首先将１００ｇ的磷钼酸固体先完全溶解于适量的９５％乙醇中，然后再用９５％乙醇稀释至１Ｌ，最后分装入喷雾瓶中。５００９．２０２—２０１６２　　　　３．３　材料３．３．１　食用油极性组分快速分离制备色谱柱：内填装２０ｇ粒径为４０μｍ～６０μｍ的无定形活化硅胶，柱内径２．６ｃｍ，柱体长１０．４ｃｍ（不含两端柱头），柱外壳为聚丙烯制成，铝箔密封包装。３．３．２　薄层色谱层析板：长２００ｍｍ、宽１００ｍｍ的玻璃板，上涂一层０．２１ｍｍ～０．２７ｍｍ厚的硅胶６０（粒径为１０μｍ～１２μｍ；孔体积０．７４ｍＬ／ｇ～０．８４ｍＬ／ｇ；比表面积４８０ｍ２／ｇ～５４０ｍ２／ｇ）或其他等效硅胶，且不含任何的荧光指示剂。３．３．３　薄层色谱点样毛细管：长１００ｍｍ，内径０．３ｍｍ。４　仪器和设备４．１　５００ｍＬ圆底或平底烧瓶，标准磨口。４．２　食用油极性组分制备型快速柱层析系统：配置二元无阀计量泵、紫外检测器、全自动二维馏分收集器、实时监测系统和溶剂温度控制系统。４．３　旋转蒸发仪。４．４　天平：感量至少达到０．００１ｇ。４．５　真空恒温干燥箱。４．６　恒温干燥箱。４．７　玻璃干燥器（内装有变色硅胶干燥剂）。４．８　薄层色谱玻璃层析缸，能与薄层色谱板（３．３．２）配套。４．９　１０ｍＬ玻璃烧杯。４．１０　１０ｍＬ一次性塑料注射器。４．１１　１０００ｍＬ小口玻璃收集瓶。５　分析步骤５．１　试样制备５．１．１　除杂质作为试样的样品应为液态、澄清、无沉淀并充分混匀。如果样品不澄清、有沉淀，则应将油脂置于５０℃的恒温干燥箱内，将油脂的温度加热至５０℃并充分振摇以熔化可能的油脂结晶。若此时油脂样品变为澄清、无沉淀，则可作为试样，否则应将油脂置于５０℃的恒温干燥箱内，用滤纸过滤不溶性的杂质，取过滤后的澄清液体油脂作为试样，为防止油脂氧化，过滤过程应尽快完成。对于凝固点高于５０℃或含有凝固点高于５０℃油脂成分的样品，则应将油脂置于比其凝固点高１０℃左右的恒温干燥箱内，将油脂加热并充分振摇以熔化可能的油脂结晶。若还需过滤，则将油脂置于比其凝固点高１０℃左右的恒温干燥箱内，用滤纸过滤不溶性的杂质，取过滤后的澄清液体油脂作为试样，为防止油脂氧化，过滤过程应尽快完成。５．１．２　干燥脱水若油脂中含有水分，则通过５．１．１的处理后仍旧无法达到澄清，应进行干燥脱水。对于室温下为液态、无明显结晶或凝固现象的油脂，以及经过５．１．１的处理并冷却至室温后为液态、无明显结晶或凝固现象的油脂，可按每１０ｇ油脂加入１ｇ～２ｇ无水硫酸钠的比例加入无水硫酸钠，并充分搅拌混合吸附脱水，然后用滤纸过滤，取过滤后的澄清液体油脂作为试样。５００９．２０２—２０１６３　　　　对于室温下有结晶或凝固现象的油脂，以及经过５．１．１的处理并冷却至室温后有明显结晶或凝固现象的油脂，可将油脂样品用适量的石油醚完全溶解后再用无水硫酸钠吸附脱水，然后滤纸过滤收集滤液，将滤液置于水浴温度不高于４５℃的旋转蒸发仪内，负压条件下，将其中的溶剂旋转蒸干，取残留的澄清液体油脂作为试样。５．２　快速分离制备色谱柱的活化以非极性组分洗脱液为流动相对制备型快速柱层析系统的流动相管路进行润洗，排尽流动相管路内的气体。取１支食用油极性组分快速分离制备色谱柱，连接入制备型快速柱层析系统的流动相管路，以非极性组分洗脱液为流动相，２５ｍＬ／ｍｉｎ的流速冲洗快速分离制备色谱柱１０ｍｉｎ，使快速分离制备色谱柱完全被溶剂所浸润，弃去冲洗液。５．３　非极性组分的分离取１只干净的１０ｍＬ玻璃烧杯，准确称取１ｇ（精确到０．００１ｇ）的油脂样品（犿）（５．１），然后用５ｍＬ的石油醚将油脂样品充分溶解，成为上样液。将快速分离制备色谱柱的上端与流动相管路断开，用１支干净的１０ｍＬ一次性塑料注射器吸取全部上样液后，快速注射入快速分离制备色谱柱的上端入口处，再用３ｍＬ的石油醚洗涤１０ｍＬ玻璃烧杯内残留的上样液，洗涤液也用同一支１０ｍＬ一次性塑料注射器全部吸取后，注射入快速分离制备色谱柱的上端入口处，再将快速分离制备色谱柱的上端与流动相管路连接，按以下参数进行非极性组分的分离：ａ）　流动相：非极性组分洗脱液；ｂ）流动相流速：２５ｍＬ／ｍｉｎ；ｃ）部分收集器：以１０００ｍＬ小口玻璃收集瓶为收集容器，从洗脱开始以全收集模式进行收集；ｄ）紫外检测器监测波长：２００ｎｍ；ｅ）启用实时监测系统，获得洗脱色谱图；ｆ）溶剂温度控制系统温度：１０℃；ｇ）洗脱时间：１１ｍｉｎ。进行制备型快速柱层析操作时，实验的环境温度应不高于２５℃。５．４　非极性组分的收集、浓缩和定量取１个干净的５００ｍＬ烧瓶放入１０３℃±２℃的恒温干燥箱内，烘１ｈ左右，然后取出立即放入玻璃干燥器内冷却至室温，然后称重（犿０，精确至０．００１ｇ）。根据５．３分离操作所获得的实时监测数据，非极性组分最大的色谱峰的结束时间点应控制在４．５ｍｉｎ～６．８ｍｉｎ区间内（如附录Ａ所示），此时将洗脱时间区间为０ｍｉｎ～１１ｍｉｎ内所有收集的洗脱液（１０００ｍＬ小口玻璃收集瓶内）倒入此５００ｍＬ圆底烧瓶内。然后将此装有收集洗脱液的５００ｍＬ烧瓶置于水浴温度为６０℃的旋转蒸发仪内，常压条件下，将其中的溶剂大部分蒸发，然后再在负压条件下，将剩余少量溶剂旋转蒸发至近干，取出该烧瓶并擦干烧瓶外壁的水。然后将此５００ｍＬ烧瓶放入４０℃的真空恒温干燥箱，在０．１ＭＰａ的负压条件下，烘２０ｍｉｎ～３０ｍｉｎ，结束后放入玻璃干燥器内冷却至室温，然后称重（犿１，精确至０．００１ｇ），（犿１－犿０）即为非极性组分的质量。若需收集极性组分，可按照附录Ｂ中的Ｂ．１进行。获得的非极性组分和极性组分的分离效果应按照附录Ｂ中的Ｂ．２进行验证。６　分析结果的表述油脂试样中极性组分的含量按式（１）计算：５００９．２０２—２０１６４　　　　犡＝１００－（犿１－犿０）犿×１００…………………………（１）　　式中：犡———油脂样品的极性组分含量，％；犿０———空白５００ｍＬ烧瓶的质量，单位为克（ｇ）；犿１———蒸干溶剂后，装有非极性组分的５００ｍＬ烧瓶的总质量，单位为克（ｇ）；犿———油脂样品称样量，单位为克（ｇ）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留至小数点后１位。７　精密度当极性组分含量≤２０％时，在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的１５％；当极性组分含量＞２０％时，在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的１０％。第二法　柱层析法８　原理通过柱层析技术的分离，油脂试样被分为非极性组分和极性组分两部分，其中非极性组分首先被洗脱并蒸干溶剂后称重，油脂试样扣除非极性组分的剩余部分即为极性组分。９　试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。９．１　试剂９．１．１　柱层析吸附剂：硅胶６０，ＳｉＯ２，粒径为０．０６３ｍｍ～０．２００ｍｍ的无定形硅胶；平均孔径６ｎｍ；孔体积０．７４ｍＬ／ｇ～０．８４ｍＬ／ｇ；比表面积４８０ｍ２／ｇ～５４０ｍ２／ｇ；ｐＨ６．５～７．５，水分含量４．４％～５．４％。９．１．２　海砂，化学纯。９．２　试剂配制９．２．１　非极性组分洗脱液：同３．２．１。９．２．２　薄层色谱展开剂：同３．２．３。９．２．３　薄层色谱显色剂：同３．２．４。９．３　材料薄层色谱层析板：同３．３．２。１０　仪器和设备１０．１　玻璃层析柱：内径２１ｍｍ，长４５０ｍｍ，下部有聚四氟乙烯活塞阀门，活塞阀门上部的层析柱内部具有一层砂芯筛板，且该层砂芯筛板能有效阻止吸附剂（９．１．１）下漏出层析柱，且当竖直加入２０ｍＬ的５００９．２０２—２０１６５　　　　石油醚后，将活塞阀门开至最大，所有石油醚在２．５ｍｉｎ内流尽。１０．２　２５０ｍＬ圆底烧瓶或平底烧瓶：带标准磨口。１１　分析步骤１１．１　试样制备同５．１。１１．２　装柱用一个烧杯，准确称取２５ｇ硅胶６０，再倒入８０ｍＬ的非极性洗脱液，通过搅拌使硅胶悬浮于非极性洗脱液内。然后立即通过一个漏斗将此硅胶悬浮液倒入已垂直放置的玻璃层析柱内，最后用适量非极性洗脱液洗涤此烧杯，以使硅胶全部转移入玻璃层析柱。打开玻璃层析柱下端的活塞阀门，放出层析柱内的洗脱液，直到层析柱内洗脱液的液面比沉降的硅胶的顶端高１００ｍｍ，关闭活塞阀门，其间轻敲层析柱使硅胶沉降面水平。再通过漏斗向玻璃层析柱内加入４ｇ海砂，再次打开玻璃层析柱下端的活塞阀门，放出层析柱内的洗脱液，直到洗脱液的液面低于海砂沉降层顶部１０ｍｍ以内。弃去所有在层析柱装柱过程中所流出的洗脱液。１１．３　柱层析分离制备１１．３．１　用一个５０ｍＬ的玻璃烧杯准确称取２．４ｇ～２．６ｇ（精确至０．００１ｇ）的制备好的油脂样品（１１．１）。向称量的样品中加入２０ｍＬ的非极性洗脱液，并微微加热使样品完全溶解。然后冷却至室温，并用非极性洗脱液定容至５０ｍＬ。１１．３．２　取一个干净的２５０ｍＬ烧瓶，先在１０３℃±２℃的恒温干燥箱中烘１ｈ，再取出置于干燥器内冷却至室温，然后称重（犿０，精确至０．００１ｇ）。再将此２５０ｍＬ烧瓶放置于装填的玻璃层析柱（１１．２）正下方，正对着洗脱液的流出口，以收集洗脱液。１１．３．３　用一个移液管准确移取２０ｍＬ的样品溶液（１１．３．１）入装填的玻璃层析柱内，其间应避免样品溶液扰乱层析柱顶部海沙层。打开玻璃层析柱下端的活塞阀门，放出层析柱内的洗脱液，直到层析柱内洗脱液的液面下降至海砂层的顶部。其间收集流出的洗脱液于下方的２５０ｍＬ烧瓶（其中含有非极性组分）。１１．３．４　分２～３次向玻璃层析柱内加入总共