GB 5009.252-2016 食品安全国家标准 食品中乙酰丙酸的测定

中华人民共和国国家标准GB5009.252—2016食品安全国家标准食品中乙酰丙酸的测定2016-08-31发布2017-03-01实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.252—2016Ⅰ前言本标准代替SB/T10417—2007《酱油中乙酰丙酸的测定方法》。本标准与SB/T10417—2007相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中乙酰丙酸的测定”;———将适用范围扩充至酱油、饮料(包括碳酸饮料、咖啡饮品、果汁饮料、乳饮料、植物蛋白饮料)、酱类、蜂蜜、乳粉、饼干、糕点、糖果、果冻、面制品;———增加了试剂的级别和分子式;———增加了液体试样和固体试样的制备方法;———增加了食品中乙酰丙酸测定方法的定量限;———修改了色谱图。GB5009.252—20161食品安全国家标准食品中乙酰丙酸的测定1范围本标准规定了用气相色谱法测定食品中乙酰丙酸的方法。本标准适用于酱油、饮料(包括碳酸饮料、咖啡饮品、果汁饮料、乳饮料、植物蛋白饮料)、酱类、蜂蜜、乳粉、饼干、糕点、糖果、果冻、面制品中乙酰丙酸的测定。第一法内标法2原理样品经酸化后,用乙醚提取乙酰丙酸,以正庚酸作为内标物,用配有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行测定,以内标法进行定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,所用水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1无水硫酸钠(Na2SO4):650℃下灼烧4h,贮于干燥器中备用。3.1.2无水乙醚(C4H10O)。3.1.3盐酸(HCl)。3.1.4氯化钠(NaCl)。3.1.5乙酸乙酯(C4H8O2):色谱纯。3.2试剂配制饱和氯化钠溶液:称取370g氯化钠于烧杯中,加入1000mL水,搅拌使其溶解、混匀,静置备用。3.3标准品3.3.1正庚酸(C7H14O2):纯度≥99.5%。3.3.2乙酰丙酸(C5H8O3):纯度≥99.5%。3.4标准溶液配制3.4.1正庚酸标准储备溶液(5.00mg/mL):称取0.5g正庚酸(精确至0.0001g),用乙酸乙酯溶解并定容于100mL容量瓶中,混匀。3.4.2乙酰丙酸标准储备溶液(5.00mg/mL):称取0.5g乙酰丙酸(精确至0.0001g),用乙酸乙酯溶GB5009.252—20162解并定容于100mL容量瓶中,混匀。3.4.3乙酰丙酸标准系列工作溶液:分别准确吸取乙酰丙酸标准储备液(3.4.2)0.025mL、0.05mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL于6个10mL容量瓶中,各加入1.0mL正庚酸标准储备液(3.4.1),用乙酸乙酯定容,即得标准系列工作液,相当于每毫升含12.5μg、25.0μg、50.0μg、250.0μg、500.0μg、750.0μg的乙酰丙酸。4仪器和设备4.1气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(FID)。4.2分析天平:感量为0.1mg和1mg。4.3旋转蒸发仪。5分析步骤5.1试样制备5.1.1液体试样准确称取5g(精确至0.001g)试样于100mL具塞试管中,加入10mL饱和氯化钠溶液、1.0mL正庚酸标准储备液、3.0mL盐酸,充分振摇1min后,加入50mL乙醚,振摇萃取3min~5min,静置约10min~15min。待分层后,吸取上层乙醚萃取液于250mL分液漏斗中,再重复萃取两次,每次用乙醚50mL,合并乙醚萃取液,用10mL饱和氯化钠溶液洗涤两次,弃去下层。乙醚层用30g无水硫酸钠脱水,在45℃左右浓缩至近干,用乙酸乙酯定容至10mL,充分摇匀,待气相色谱进样检测。5.1.2固体试样准确称取充分粉碎均匀的试样5g(精确至0.001g)于100mL具塞试管中,加入10mL饱和氯化钠溶液、1.0mL正庚酸标准储备液、3.0mL盐酸,充分振摇1min后,加入50mL乙醚,振摇萃取3min~5min,静置约10min~15min。待分层后,吸取上层乙醚萃取液于250mL分液漏斗中,再重复萃取两次,每次用乙醚50mL,合并乙醚萃取液,用10mL饱和氯化钠溶液洗涤两次,弃去下层。乙醚层用30g无水硫酸钠脱水,在45℃左右浓缩至近干,用乙酸乙酯定容至10mL,充分摇匀,待气相色谱进样检测。5.2气相色谱参考条件5.2.1色谱柱:DB-WAX石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)或相当型号色谱柱。5.2.2进样口温度:270℃。5.2.3检测器温度:270℃。5.2.4升温程序:初始柱温120℃,保持1min,以8℃/min升温至230℃,保持4min。5.2.5载气:高纯氮,纯度≥99.999%,流速:1.0mL/min。5.2.6氢气流速:30mL/min。5.2.7空气流速:300mL/min。5.2.8尾吹气:30mL/min。5.2.9进样方式:分流进样,分流比25∶1。5.2.10进样体积:1μL。GB5009.252—201635.3标准曲线的制作将标准系列工作溶液分别注入气相色谱仪中,测定乙酰丙酸与内标物质的相应峰面积。以乙酰丙酸峰面积/内标物峰面积为纵坐标,以乙酰丙酸质量浓度为横坐标,绘制标准曲线。乙酰丙酸标准溶液的气相色谱图参见图A.1。5.4试样溶液的测定将试样溶液注入气相色谱仪中,得到乙酰丙酸和内标物质的相应峰面积,根据标准曲线得到待测液中乙酰丙酸的质量浓度。5.5空白试验用5.0mL水代替试样,按5.1~5.4的步骤做空白试验。6分析结果的表述乙酰丙酸的含量按式(1)计算:X=ρ×V×1000m×1000…………………………(1)式中:X———样品中乙酰丙酸含量,单位为毫克每千克(mg/kg);ρ———测定用样品中乙酰丙酸质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);V———样品的定容体积,单位为毫升(mL);1000———换算系数;m———试样质量,单位为克(g)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他方法检出限为10mg/kg,定量限为25mg/kg。第二法外标法9原理样品经酸化后,用乙醚提取乙酰丙酸,用配有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定,以外标法进行定量。10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。GB5009.252—2016410.1试剂10.1.1无水乙醚(C4H10O)。10.1.2无水硫酸钠(Na2SO4):650℃以下灼烧4h,贮于干燥器中备用。10.1.3乙酸乙酯(C4H8O2):色谱纯。10.1.4盐酸(HCl)。10.1.5氯化钠(NaCl)。10.2试剂配制盐酸溶液(6mol/L):量取50mL盐酸,用水稀释至100mL。10.3标准品乙酰丙酸(C5H8O3):纯度≥99.5%。10.4标准溶液配制10.4.1乙酰丙酸标准储备溶液(5.00mg/mL):准确称取0.5g乙酰丙酸(精确至0.0001g),用乙酸乙酯溶解并定容于100mL容量瓶中,混匀。10.4.2乙酰丙酸标准系列工作溶液:分别准确吸取乙酰丙酸标准储备溶液(10.4.1)0.0mL、0.05mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL于6个10mL容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度后混匀。此标准系列工作液相当于每毫升含0.0μg、25.0μg、50.0μg、250.0μg、500.0μg、750.0μg的乙酰丙酸。11仪器和设备11.1气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(FID)。11.2分析天平:感量为0.1mg和1mg。11.3旋转蒸发仪。11.4超声波清洗器。11.5离心机。12分析步骤12.1试样制备12.1.1液体试样准确称取5g试样(精确至0.001g)于50mL离心管中,加入1mL盐酸溶液,充分振摇均匀,再加入25mL乙醚,振摇萃取1min,静置分层,以4000r/min离心5min~10min,吸取上层乙醚萃取液于250mL分液漏斗中,再重复萃取两次,每次用乙醚20mL,合并乙醚提取液,乙醚层用15g无水硫酸钠脱水,将滤液浓缩至近干,用乙酸乙酯定容至5.0mL,充分摇匀,待气相色谱进样检测。12.1.2固体试样准确称取充分粉碎均匀的试样5g(精确至0.001g)于50mL离心管中,加入2.0g氯化钠,加入GB5009.252—201651mL盐酸溶液,加入25mL乙醚,超声波提取10min,以4000r/min离心5min~10min,吸取上层乙醚萃取液于250mL分液漏斗中,再重复萃取两次,每次用乙醚20mL,合并乙醚提取液,乙醚层用15g无水硫酸钠脱水,将滤液浓缩至近干,用乙酸乙酯定容至5.0mL,充分摇匀,待气相色谱进样检测。12.2仪器参考条件12.2.1色谱柱:DB-FFAP石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)或相当型号色谱柱。12.2.2进样口温度:260℃。12.2.3检测器温度:280℃。12.2.4升温程序:初始柱温60℃,保持1min,以18℃/min升温至200℃,保持1min,再以10℃/min升温至230℃,保持12min。12.2.5载气:高纯氮,纯度≥99.999%,流速1.0mL/min。12.2.6氢气流速:30mL/min。12.2.7空气流速:300mL/min。12.2.8尾吹气:30mL/min。12.2.9进样方式:分流进样,分流比25∶1。12.2.10进样量:1μL。12.3标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入气相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的质量浓度为横坐标,以响应峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。乙酰丙酸标准溶液的气相色谱图参见图A.2。12.4试样溶液的测定将试样溶液注入气相色谱仪中,得到响应峰面积,根据标准曲线得到待测液中乙酰丙酸的质量浓度。13分析结果的表述乙酰丙酸含量按式(2)计算:X=ρ×V×1000m×1000…………………………(2)式中:X———样品中乙酰丙酸含量,单位为毫克每千克(mg/kg);ρ———测定用样品中乙酰丙酸质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);V———样品的定容体积,单位为毫升(mL);1000———换算系数;m———样品质量,单位为克(g)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。14精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。GB5009.252—2016615其他方法检出限为10mg/kg,定量限为25mg/kg。GB5009.252—20167附录A乙酰丙酸色谱图A.1内标法乙酰丙酸标准溶液色谱图内标法乙酰丙酸标准溶液色谱图见图A.1。图A.1内标法乙酰丙酸标准溶液色谱图A.2外标法乙酰丙酸标准溶液色谱图外标法乙酰丙酸标准溶液色谱图见图A.2。图A.2外标法乙酰丙酸标准溶液色谱图