GB 5009.279-2016 食品安全国家标准 食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的测定

中华人民共和国国家标准GB5009.279—2016食品安全国家标准食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.279—2016Ⅰ前言本标准代替GB/T22222—2008《食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇的测定高效液相色谱法》。本标准与GB/T22222—2008相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的测定”;———修改了样品前处理方法;———增加了第二法高效液相色谱-蒸发光散射检测法;———增加了食品中赤藓糖醇的检测。GB5009.279—20161食品安全国家标准食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的测定1范围本标准规定了口香糖、饼干、糕点、面包、饮料中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的高效液相色谱-示差折光检测和蒸发光散射检测测定方法。本标准适用于口香糖、饼干、糕点、面包、饮料中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇含量的测定。第一法高效液相色谱-示差折光检测法2原理试样经沉淀蛋白质后过滤,上清液进高效液相色谱仪,经氨基色谱柱或阳离子交换色谱柱分离,示差折光检测器检测,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙腈(CH3CN):色谱纯。3.1.2三氯乙酸(CCl3COOH)。3.1.3无水碳酸钠(Na2CO3)。3.2试剂配制3.2.1三氯乙酸溶液(100g/L):称取10g三氯乙酸,加水溶解并定容至100mL。3.2.2碳酸钠溶液(21.2g/L):称取2.12g碳酸钠,加水溶解并定容至100mL,现用现配。3.3标准品3.3.1木糖醇(C5H12O5,CAS号:87-99-0),纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.2山梨醇(C6H14O6,CAS号:50-70-4),纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.3麦芽糖醇(C12H24O11,CAS号:585-88-6),纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.4赤藓糖醇(C4H10O4,CAS号:149-32-6),纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准GB5009.279—20162物质。3.4标准溶液配制3.4.1标准储备液(40mg/mL):分别称取400mg(精确至0.1mg)木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇标准品,加水定容至10mL,放置4℃密封可贮藏1个月。3.4.2标准工作液:分别准确移取各种糖醇标准储备液40μL、60μL、80μL、100μL、120μL、150μL,加水定容至1mL,配制成质量浓度分别为1.6mg/mL、2.4mg/mL、3.2mg/mL、4.0mg/mL、4.8mg/mL、6.0mg/mL的混合系列标准工作溶液。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪:具有示差折光检测器。4.2色谱柱:氨基色谱柱(内径4.6mm,柱长250mm,粒径5μm)或阳离子交换色谱柱(内径6.5mm,柱长300mm)。4.3食品粉碎机。4.4分析天平:感量为0.1mg、0.01g。4.5高速离心机:转速≥9500r/min。4.6超声波清洗机:工作频率40kHz,功率500W。5分析步骤5.1试样制备及前处理5.1.1口香糖取口香糖样品至少20g,用刀片切成小碎块,置于密闭的容器内混匀。准确称取2g左右切碎的样品,置于50mL离心管中,加入40mL水,混匀后置于80℃水浴锅中加热20min,每隔5min振荡混匀,取出后9000r/min离心10min。取8mL上清液置于10mL容量瓶中,加水定容、摇匀,0.22μm滤膜过滤后,上机测试。5.1.2饮料对非蛋白饮料类,取样品至少200mL,充分混匀,置于密闭的容器内。称取10g饮料于50mL容量瓶中,加水定容至50mL,摇匀,0.22μm滤膜过滤后,上机测试。对蛋白饮料类,取样品至少200g,置于密闭的容器内混匀。称取样品5g,置于50mL容量瓶中,加入35mL水,摇匀后超声30min,每隔5min振荡混匀,取出后9000r/min离心10min。沉淀蛋白质:上清液中加入三氯乙酸溶液(100g/L)5mL,摇匀后室温放置30min,9500r/min离心10min。取8mL上清液于10mL容量瓶中并加水定容,摇匀后取滤液850μL,加入碳酸钠溶液(21.2g/L)150μL,摇匀中和;或取10mL上清液加入20mL乙腈,摇匀后室温放置30min,9500r/min离心10min,上清定容至50mL,摇匀。0.22μm的微孔滤膜过滤,上机测试。注:对糖醇含量较低,经乙腈沉淀稀释后低于检出限的样品,应采用三氯乙酸沉淀。对赤藓糖醇含量较低(≤1%)的样品,应采用乙腈沉淀。其他情况两种方法均可。5.1.3饼干、糕点、面包取样品至少200g,用粉碎机粉碎,置于密闭的容器内混匀。称取粉碎的样品1g~5g,置于50mLGB5009.279—20163离心管中,加入40mL水,摇匀后超声30min,每隔5min振荡混匀,取出后9000r/min离心10min。沉淀蛋白质:上清液中加入三氯乙酸溶液5mL,摇匀后室温放置30min,9500r/min离心10min。取8mL上清液于10mL容量瓶中并加水定容,摇匀后取滤液850μL,加入碳酸钠溶液150μL,摇匀中和;或取10mL上清液加入20mL乙腈,摇匀后室温放置30min,9500r/min离心10min,上清定容至50mL,摇匀。0.22μm滤膜过滤后,上机测试。注:对糖醇含量较低,经乙腈沉淀稀释后低于检出限的样品,应采用三氯乙酸沉淀。对赤藓糖醇含量较低(≤1%)的样品,应采用乙腈沉淀。其他情况两种方法均可。5.2仪器参考条件5.2.1氨基色谱柱的仪器条件氨基色谱柱的仪器条件列出如下:a)色谱柱:氨基柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或等效柱;b)柱温:30℃;c)流动相:乙腈∶水=80∶20;d)流速:1.0mL/min;e)进样量:20μL;f)检测池温度:30℃。5.2.2阳离子交换色谱柱的仪器条件阳离子交换色谱柱的仪器条件列出如下:a)色谱柱:阳离子交换柱,柱长300mm,内径6.5mm,或等效柱;b)柱温:80℃;c)流动相:水或与色谱柱匹配的酸性水溶液;d)流速:0.5mL/min;e)进样量:20μL;f)检测池温度:50℃。5.3标准曲线的制作将20μL标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中,在5.2所述色谱条件下测定标准溶液的响应值(峰面积),以标准工作液的浓度为横坐标,以响应值(峰面积)为纵坐标,绘制标准曲线。5.4试样溶液的测定将20μL试样溶液注入高效液相色谱仪中,在5.2所述色谱条件下测定试样的响应值(峰面积),通过各个糖醇的色谱峰的保留时间定性。根据峰面积由标准曲线得到试样溶液中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的浓度。6分析结果的表述试样中糖醇含量按式(1)计算:X=ρ×Vm×1000×100……………………(1)式中:X———试样中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的含量,%;GB5009.279—20164ρ———由标准曲线获得的试样溶液中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);V———水溶液总体积,单位为毫升(mL);m———试样的质量,单位为克(g);1000———换算系数。计算结果保留两位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他本方法对木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的检出限均为0.4g/100g,定量限均为1.3g/100g。第二法高效液相色谱-蒸发光散射检测法9原理试样经沉淀蛋白质后过滤,上清液进高效液相色谱仪,经氨基色谱柱分离,蒸发光散射检测器检测,外标法定量。10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。10.1试剂10.1.1乙腈(CH3CN):色谱纯。10.1.2三氯乙酸(CCl3COOH)。10.1.3无水碳酸钠(Na2CO3)。10.2试剂配制10.2.1三氯乙酸溶液(100g/L):称取10g三氯乙酸,加水溶解并定容至100mL。10.2.2碳酸钠溶液(21.2g/L):称取2.12g碳酸钠,加水溶解并定容至100mL,现用现配。10.3标准品10.3.1木糖醇(C5H12O5,CAS号:87-99-0),纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。10.3.2山梨醇(C6H14O6,CAS号:50-70-4),纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。10.3.3麦芽糖醇(C12H24O11,CAS号:585-88-6),纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。GB5009.279—2016510.3.4赤藓糖醇(C4H10O4,CAS号:149-32-6),纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。10.4标准溶液配制10.4.1标准储备液:分别准确称取木糖醇25mg、山梨糖醇25mg、麦芽糖醇25mg、赤藓糖醇35mg,精确至0.1mg,加水定容至10mL,每毫升溶液含相当于3.5mg赤藓糖醇、2.5mg木糖醇、2.5mg山梨醇、2.5mg麦芽糖醇,放置4℃密封可贮藏1个月。10.4.2标准工作液:分别准确移取各种糖醇标准储备液40μL、60μL、80μL、100μL、120μL、140μL,加水定容至1mL,赤藓糖醇配制成质量浓度分别为0.14mg/mL、0.21mg/mL、0.28mg/mL、0.35mg/mL、0.42mg/mL、0.49mg/mL的混合系列标准工作溶液,木糖醇、山梨醇和麦芽糖醇配制成质量浓度分别为0.10mg/mL、0.15mg/mL、0.20mg/mL、0.25mg/mL、0.30mg/mL、0.35mg/mL的混合系列标准工作溶液。11仪器和设备11.1高效液相色谱仪:具有蒸发光散射检测器。11.2色谱柱:氨基色谱柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或等效柱。11.3食品粉碎机。11.4分析天平:感量为0.1mg、0.01g。11.5高速离心机:转速≥9500r/min。11.6超声波清洗机:工作频率40kHz,功率500W。12分析步骤12.1试样制备及前处理12.1.1口香糖取口香糖样品至少20g,用刀片切成小碎块,置于密闭的容器内混匀。准确称取2g左右切碎的样品,置于50mL离心管中,加入40mL水,混匀后置于80℃水浴锅中加热20min,每隔5min振荡混匀,取出后9000r/min离心10min。取8mL上清液置于10mL容量瓶中,加水定容、摇匀,0.22μm滤膜过滤后,稀释后上机测试。12.1.2饮料对非蛋白饮料类,取样品至少200mL,充分混匀,置于密闭的容器内。称取10g饮料于50mL容量瓶中,加水定容至50mL,摇匀,0.22μm滤膜过滤后,稀释后上机测试。对蛋白饮料类,取样品至少200g,置于密闭的容器内混匀。称取样品5g,置于50mL容量瓶中,加入35mL水,摇匀后超声30min,每隔5min振荡混匀,取出后9000r/min离心10min。沉淀蛋白质:上清液中加入三氯乙酸溶液(100g/L)5mL,摇匀后室温放置30min,9500r/min离心10min。取8mL上清液于10mL容量瓶中并加水定容,摇匀后取滤液850μL,加入碳酸钠溶液(21.2g/L)150μL,摇匀中和;或取10mL上清液加入20mL乙腈,摇匀后室温放置30min,9500r/min离心10min,上清定容至50mL,摇匀。0.22μm的微孔滤膜过滤,稀释后上机测试。注:对糖醇含量较低,经乙腈沉淀稀释后低于检出限的样品,应采用三氯乙酸沉淀。对赤藓糖醇含量较低(≤1%)的样品,应采用乙腈沉淀。其他情况两种方法均